黑龙江省自然科学基金(QC08C12)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：韩宗玺邵昱昊李慧昕孔宪刚刘娣更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北林业大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金黑龙江省博士后基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测被引量：1
- 2012年
- 为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。
- 李冰李慧昕王钰韩宗玺邵昱昊刘小丽孔宪刚
- 关键词：鸭肠炎病毒原核表达真核表达
- 鸭肠炎病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- 应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)VP5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗VP5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆抗体均能够与DEV感染CEF发生特异性反应,而不与CEF对照发生反应。Western blot检测,4株单克隆抗体均能够识别大小约为150kDa的蛋白,说明4株单抗隆抗体是特异性识别VP5蛋白的抗体。DEV VP5蛋白单克隆抗体的制备为进一步鉴定VP5蛋白B细胞抗原表位及VP5蛋白功能研究提供了有效工具。
- 李慧昕刘胜旺韩宗玺邵昱昊刘晓丽华育平刘娣孔宪刚
- 关键词：鸭肠炎病毒单克隆抗体
