山东省自然科学杰出青年基金(ZR2010ZR029)
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
- 相关作者：何洪彬王洪梅宋玲玲杨宏军侯佩莉更多>>
- 相关机构：山东省农业科学院东北农业大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学杰出青年基金山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 表达hTERT及SV40T永生化奶牛乳腺上皮细胞系的建立被引量：5
- 2013年
- 构建pcDNA3.1-hTERT、pcDNA3.1-SV40 T载体,线性化后,共转染荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞,研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)和猿猴病毒40大T抗原(SV40 T)对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞体外培养的作用,并对细胞进行RT-PCR检测分析及免疫荧光鉴定。结果表明,hTERT和SV40 T在奶牛乳腺上皮细胞中表达可以有效地延长细胞的体外培养时间,增加细胞传代次数,获得的细胞系可以正常表达角蛋白。说明在体外培养的乳腺细胞中共表达hTERT和SV40 T可以有效延长细胞寿命且不影响乳腺细胞特性。
- 上官陶王洪梅冯敏燕仲跻峰何洪彬
- 关键词：永生化
- 不同激素组合对山东白山羊同期发情的比较研究被引量：4
- 2013年
- 以山东白山羊为研究对象,应用国产的孕酮阴道海绵栓,结合PMSG/FSH、PG和HCG,将78头受体羊随机分为4组进行同期发情及卵巢排卵研究。结果显示:放栓15 d,同时在去栓前3 d肌注400 IU/只PMSG和去栓前1 d肌注0.1 mg/只PG,鉴定发情后再肌注100 IU/只HCG处理方案效果最好,发情率为84.21%,黄体形成率为75%。同时手术检查卵巢卵泡和黄体形成情况,处理方案中放栓15 d+PMSG+PG+HCG组卵巢上均有多个排卵黄体,并且排卵窝比较明显。该研究所优化的方案为获得高质量的转基因胚胎移植受体羊提供了技术支持。
- 郇延军赵贵民雷安民王基隆韩猛刘来兴武建明上官陶王洪梅何洪彬
- 关键词：激素组合同期发情胚胎移植卵巢
- 人MxA基因的原核表达及其抗血清的制备被引量：1
- 2013年
- 本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达MxA融合蛋白pET32a(+)-MxA,制备兔抗人MxA抗血清。采用PCR技术获得MxA基因,然后将MxA基因重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21(DE3)培养物,纯化蛋白质后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析结果显示,pET32a(+)-MxA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6400;West-ern blotting检测结果显示,抗血清可与真核表达的MxA蛋白进行特异性结合。试验结果表明,在大肠杆菌中成功表达了pET32a(+)-MxA融合蛋白,制备了具有高度特异性的兔抗人MxA抗血清,这样为采用酶标法测定病毒患者全血细胞或由干扰素诱导的细胞产生的MxA蛋白质含量及临床诊断试剂盒的开发和应用打下了基础。
- 辛婷婷王洪梅刘文浩孙涛王立群何洪彬
- 关键词：MXA原核表达抗血清
- 转人乳铁蛋白羊奶生物安全试验被引量：1
- 2013年
- 为了解转人乳铁蛋白羊奶与普通羊奶之间的差异,将两种羊奶的主要成分及其物理性状进行了比较;同时,参考中华人民共和国农业行业标准《转基因植物及其产品食用安全检测——大鼠90天喂养实验》(NY/T 1102-2006)进行转基因羊奶食用安全评价。实验结果表明,90天灌喂转人乳铁蛋白羊奶的大鼠与普通羊奶灌喂组血常规值差异不显著(P>0.05);灌喂转人乳铁蛋白的羊奶中、高剂量组与自由采食对照组及普通羊奶中、高剂量灌喂组大鼠血清铁含量及铁蛋白含量差异显著(P<0.05)。转人乳铁蛋白羊奶与普通羊奶具有实质等同性,转基因成分没有干扰机体对其它营养物质的吸收,从营养学角度来评价,转人乳铁蛋白羊奶是安全的。
- 武建明庾庆华刘思国杨倩王峰何洪彬
- 关键词：安全性评价血清铁铁蛋白
- 山东地区牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定被引量：3
- 2013年
- 从山东某地区发生呼吸道症状的奶牛场中采集样品,按常规方法处理后,接种牛肾细胞(MD-BK),分离病毒,盲传3代后,接种病料的MDBK细胞出现细胞圆缩、聚集成葡萄串样群落、在单层细胞上形成空洞等病变,且随着传代次数的增加,细胞病变更加规律。对所分离病毒进行TCID50测定,其TCID50值为108/ml;用IBRV特异性引物对分离病毒进行PCR扩增,获得与设计基因片段大小一致的特异性条带,序列测定分析结果确认所分离病毒为牛传染性鼻气管炎病毒。
- 宋玲玲杨宏军冯敏燕侯佩莉王洪梅何洪彬
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒聚合酶链式反应
- 牛流行热病毒山东地方株的分离与鉴定被引量：7
- 2013年
- 利用BHK-21细胞,接种山东济南地区疑似牛流行热病牛高热期的抗凝血,经盲传3代,分离到1株病毒,经RT-PCR鉴定为牛流行热病毒,命名为BEFV-SD。理化特性试验表明:BEFV-SD对热敏感,56℃10 min、37℃18 h可被灭活,对乙醚、氯仿等敏感;BEFV-SD可被BEFV阳性血清中和,中和效价为1∶408;将BEFV-SD的G基因与GenBank中公布的BEFV进行同源性比较,同源性达到96.3%以上。
- 王洪梅侯佩莉杨宏军宋玲玲何洪彬
- 关键词：牛流行热病毒同源性
- 牛病毒性腹泻病毒山东株的分离与鉴定被引量：4
- 2013年
- 牛病毒性腹泻病毒是牛病毒性腹泻-黏膜病的重要病原体,该病毒病是极为复杂、呈多临床类型表现的传染病,给世界养牛业造成了巨大的经济损失。本研究从疑似牛病毒性腹泻-黏膜病的粪便中分离得到一株病毒能使MDBK细胞产生细胞病变,经RT-PCR检测及扩增产物测序进一步证实,该病毒为牛病毒性腹泻-黏膜病病毒,TCID50测定该病毒的滴度为107.15TCID50/ml。该病毒株的分离鉴定为牛病毒性腹泻病毒疫苗的研制奠定了基础。
- 侯佩莉杨宏军宋玲玲王洪梅刘来兴何洪彬
- 关键词：牛病毒性腹泻-粘膜病病毒
- 人抗凝血酶Ⅲ的表达及其抗血清的制备被引量：4
- 2013年
- 目的用大肠杆菌系统表达重组的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制备其抗血清并测定效价。方法利用基因克隆技术获得AT-Ⅲ基因片段,构建原核表达质粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达、蛋白纯化并免疫兔,间接ELISA、Western blot法检测抗血清。结果 SDS-PAGE、Western blot法检测原核表达蛋白结果显示,在相对分子质量(Mr)77 000附近出现特异性条带。对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备AT-Ⅲ抗血清,间接ELISA方法检测抗血清的最高效价可达到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可与293T、CHO细胞表达的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白纯品特异性结合。结论成功制备了人抗凝血酶Ⅲ抗血清。
- 卜澍王洪梅孙涛刘文浩王立群何洪彬
- 关键词：原核表达抗血清
- 肠道病毒71 VP1基因的原核表达及其抗血清的制备被引量：5
- 2013年
- 目的克隆并表达重组肠道病毒71(EV71)VP1基因,进行抗血清的制备并检测抗血清效价。方法利用原核表达系统将PCR获得的VP1片段构建成原核表达载体pET32a(+)-VP1,诱导其表达VP1融合蛋白并利用包涵体纯化方法进行重组蛋白的纯化,将纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备VP1抗血清,ELISA检测抗体效价。同时构建真核表达载体,利用其在真核细胞中的瞬时表达检测抗血清的特异性。结果通过克隆获得VP1原核表达载体,IPTG诱导VP1蛋白表达并纯化,SDS-PAGE结果显示重组蛋白表达且纯化浓度较高,将重组蛋白乳化后免疫新西兰兔3次,取血检测抗血清的效价,ELISA结果显示抗体效价为1∶64 000,利用所构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP1表达VP1对抗血清进行检测,Western blot结果表明抗血清可较好的与VP1特异性结合。结论制备具有免疫原性的VP1蛋白及其效价较高的抗血清,为进一步研究抗EV71诊断方法、血清学诊断试剂盒及抗病毒疫苗的研制奠定基础。
- 谢维欣武建明李杰方永志王洪梅何洪彬
- 关键词：肠道病毒71VP1抗血清抗体效价
