国家自然科学基金(39570335)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 人白细胞介素12双亚基共表达载体的构建及表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :为了基因治疗研究的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基基因共表达质粒 [(P(+) IL 12 ) ],比较它与单个亚基基因表达质粒 [P(+) P4 0 和P(- ) P35]1∶1共同转染肝癌细胞HepG2后 4 8小时表达结果。方法 :分别克隆hIL 12P4 0 、P35亚基cDNA全长至pcDNA3 1(± )中构建P(+) P4 0 和P(- ) P35,再将两者串联克隆至pcDNA3 1(+)中构建P(+) IL 12。脂质体转染 3种质粒至肝癌细胞HepG2 ,4 8小时后抽取细胞总RNA做半定量RT PCR ,同时取细胞上清做ELISA及Western杂交 ,结果进行比较分析。结果 :两种转染方式均可以表达hIL 12蛋白质且半定量RT PCR显示较未转染组hIL 12的mRNA水平均增加 ;转染后 4 8小时P(+) IL 12组细胞培养上清hIL 12表达量较 [P(+) P4 0 和P(- ) P35]按 1∶1比例共同转染组显著增高(P <0 0 5 )。结论 :人白细胞介素 12双亚基基因串联共表达质粒 [P(+) IL 12 ]能够转入HepG2并表达hIL 12蛋白质 ,并且转染后 4 8小时hIL 12表达量较单个亚基基因表达质粒 [P(+) P4 0 、P(- ) P35]1∶1共转染者显著高。
- 羊东晔卢放根汤熙翔赵水平吴小平刘小伟
- 关键词：人白细胞介素12HEPG2细胞
- 肝细胞靶向基因药物分子构形和表达效率的研究
- 2002年
- 目的 :用调整肝细胞靶向基因药物分子构形的方法 ,以期提高外源转入基因在目标细胞的表达效率。方法 :加入特定辅料分子至基因药物中 ,用电镜观察其液态分子构形。在转入体外培养的人肝癌细胞株BEL 74 0 2中后 ,用ELISA方法检测基因表达产物IFN r的浓度 ,筛选最佳表达外源基因药物分子的构形。结果 :肝细胞靶向基因药物在辅料分子不同浓度中构形发生改变 ,显现出絮状、球形、串蛛状及杆状与类染色体形的混合体。筛选出了具最佳表达的杆形和类染色体混合体分子构形。该构形的药物分子在体外培养细胞中的表达显著高于脂质体转运载体携带的同一基因 ,且不需要抑制溶酶的活性。结论 :用于基因治疗的药物分子构形对其转入靶细胞的表达效率有重要的影响。杆状和类染色体复合分子构形 。
- 卢放根刘小伟欧阳春晖羊东晔吴晓英
- 关键词：基因治疗肝细胞肝脏靶向基因
- 肝癌细胞靶向基因药物分子构形与表达量关系的体外研究
- 2002年
- 目的 通过调整靶向基因药物分子构形来提高外源基因的表达量 ,以解决外源基因在靶细胞中表达效率低的难题。方法 应用PCR方法扩增出人白介素 1 2P4 0 、P35亚基的cDNA全长并克隆至真核表达载体pcDNA3 .1 (± )中 ,构建P(+) /IL 1 2、P(+) /P4 0 和P(- ) /P35三种质粒 ,分别与脱唾液酸黏蛋白 多聚左旋赖氨酸 (ASOR PLL)结合成两种靶向基因药物 [ASOR PLL P(+) /IL 1 2和ASOR PLL P(+) /P4 0 、ASOR PLL P(- ) /P35] ,透射电镜观察它们在不同辅料浓度中的分子构形 ;不同构形药物分子转染HepG2细胞 ,48h后用半定量RT PCR和ELISA法检测hIL 1 2的表达量。 结果 靶向基因药物分子构形为直径 2 5～ 1 50nm的颗粒状或圆环状时 ,hIL 1 2表达量最高 ;ASOR PLL P(+) /P4 0 、ASOR PLL P(- ) /P35共转染者较ASOR PLL P(+) /IL 1 2转染者hIL 1 2表达量普遍要高。结论 靶向基因药物分子构形对外源基因的表达有重要影响 ,以直径 2 5～ 1 50nm的颗粒状或圆环状构形为最佳分子构形 。
- 羊东晔卢放根吴小平欧阳春晖刘小伟吴晓英
- 关键词：肝癌细胞表达量体外研究
- 磷酸钙纳米颗粒修饰的甲胎蛋白和树突状细胞疫苗对小鼠皮下移植瘤的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨转染小鼠带有信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA树突状细胞（DC）在体外的免疫活性，以及其对Balb／e小鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法应用磷酸钙纳米颗粒将带有信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP1cDNA真核表达载体pcDNA3．1转染DC，将DC疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养，采用酶联免疫吸附（ELISA）法，检测上清液中干扰素-γ（IFN-γ）的表达情况。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法，检测AFP1／DC和AFP2／DC刺激同基因小鼠脾淋巴细胞增殖能力及诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤能力。观察AFP1／DC和AFP2／DC对Balb／e小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。结果AFP2／DC能明显促进脾淋巴细胞增殖并提高CTL的特异性杀伤作用。AFP1／DC和AFP2／DC瘤内注射均可显著抑制肝癌移植瘤的生长，但AFP2／DC的抑制作用更明显，治疗2周后，AFR／DC组小鼠肿瘤体积为（726．7±298．2）mm3，明显小于AFP2／DC组[（1486．2±457．2）mm3]和空质粒对照组[（2137．2±547．2）mm3，P〈0．05]。AFR／DC组和AFP，／DC组的抑瘤率分别达79．2％和39．7％，而空质粒对照组和空白对照组的抑瘤率为0。AFP2／DC组和AFP，／DC组小鼠的生存时间分别为（58．5±4．2）d和（45．2±4．8）d，较空质粒对照组[（30．6±6．2）d]显著延长（P〈0．05）。结论AFP2／DC疫苗在体外能够诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫效应，在体内具有抑制Balb／c小鼠皮下移植瘤生长的作用。
- 曾斌廖爱军卢放根方唯意王健
- 关键词：甲胎蛋白树突状细胞小鼠
- 人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建被引量：3
- 2003年
- 目的 :为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基共表达质粒。方法 :先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P4 0 和P3 5的cDNA全长 ,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/ )中构建单亚基质粒———P(+) /P4 0 和P( ) /P3 5,然后再将二者串联克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(+)中得到P(+) /IL 12质粒。脂质体转染HepG2后 2 4,48hELISA检测细胞培养上清内hIL 12蛋白质表达。结果 :P(+) /IL 12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确 ,序列无突变 ;ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL 12蛋白质。结论 :成功构建P4 0 和P3 5双亚基真核共表达质粒———P(+) /IL 12 ,为模拟hIL 12生理表达方式 ,简化hIL 12基因治疗操作奠定了基础。
- 羊东晔卢放根赵水平汤熙翔刘小伟吴小平
- 关键词：人白细胞介素12真核载体克隆
