国家自然科学基金(31201907)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：李刚王春来谢芳周泷张艳禾更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江八一农垦大学东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 副猪嗜血杆菌相关毒力因子的研究进展被引量：5
- 2016年
- 副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）为巴氏杆菌科（Pasteurellaceae）家族成员之一,属于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）依赖型。H.parasuis通常定居在猪的上呼吸道表面,在特定条件下,毒力菌株侵入呼吸道粘膜层并定植,破坏上皮组织后进入血液循环并迅速扩散到肺组织引起损伤并导致肺炎症状,或侵袭到其他脏器组织导致多发性的纤维素性胸膜炎、腹膜炎以及关节炎,这些组织的损伤特性由Glasser首次报道，因此被命名为革拉瑟氏病（Glasser＇s disease）。
- 张艳禾李婷谢芳李刚刘伟石王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌毒力因子HAEMOPHILUS脏器组织致病菌株呼吸道粘膜
- 副猪嗜血杆菌种特异性基因的筛选与鉴定
- 2014年
- 为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆后测序,经Southern Blot验证和BLAST分析,获得6个HPS特异基因片段。研究为建立副猪嗜血杆菌基因鉴别诊断方法及ELISA抗原靶标的鉴定奠定基础。
- 李继昌崔宁刘娇周泷张艳禾谢芳李刚牛惠王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌抑制消减杂交
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素对细胞毒性机制的研究
- <正>副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,H.parasuis)是引起剐猪嗜血杆菌病的病原,该病主要表现为多发性浆膜炎、关节炎及脑腆炎。细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending t...
- 牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌细胞毒性分子机制
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtC亚基的克隆表达及细胞毒性分析被引量：2
- 2013年
- 细胞致死膨胀毒素(CDT)由CdtA、CdtB和CdtC三个亚基构成,是细菌的一种重要毒力因子。为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis)CDT的CdtC亚基的功能,本研究根据G enBank中cdtC基因序列设计引物,扩增cdtC基因,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行诱导表达。SD S-PAGE和w estern blot检测目的蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为25 ku。将纯化后的重组蛋白复性后进行体外细胞毒性试验。结果表明,CdtC蛋白对Vero细胞和PK-15细胞有较强的细胞毒性作用。本研究为研究细胞致死膨胀毒素CDT的致病机制奠定了基础。
- 李艳玲李建军周泷崔宁刘娇张艳禾李刚谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌细胞毒性
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析被引量：1
- 2015年
- 为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。
- 牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白的表达及其免疫保护效力分析被引量：6
- 2016年
- 为评价副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以H.parasuis血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并在E.coli BL21(DE3)感受态中诱导表达。结果显示,重组CdtB蛋白(rCdtB)以可溶形式表达。以纯化后的100μg蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,2周后进行一次加强免疫并进行血清抗体检测,其抗体效价高于1:25 600,表明该蛋白具有良好的免疫原性。淋巴细胞增殖试验结果表明rCdtB能够显著刺激小鼠T淋巴细胞增殖。此外,分别以5 LD_(50)的H.parasuis血清5型HN10菌株和血清13型ZD12菌株攻毒,结果表明rCdtB可以对血清5型HN10菌株提供60%以上的免疫保护力,而对血清13型ZD12菌株可以提供50%以上的免疫保护力,这表明rCdtB可以作为重组亚单位疫苗的候选抗原蛋白。
- 李大鹏徐胜奎刘双红李刚王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌原核表达免疫保护
- 副猪嗜血杆菌自转运三聚体VtaA1蛋白的表达及其免疫保护效力研究被引量：1
- 2014年
- 为鉴定副猪嗜血杆菌(HPS)自转运三聚体VtaA1蛋白免疫保护效率,本研究以血清5型HPS株基因组为模板,通过PCR方法扩增VtaA1编码基因的N-端、C-端和中间区段,并将各基因片段克隆于表达载体pET-28a(+)中构建重组表达质粒pET-VtaA1N、pET-VtaA1C和pET-VtaA1M,将重组质粒分别转化到E.coli BL21(DE3)感受态中,在22℃和37℃条件下经IPTG诱导表达,目的蛋白均以包涵体形式存在。VtaA1M和VtaA1C用亲和层析纯化,但VtaA1N无法纯化。将纯化后的VtaA1M和VtaA1C分别免疫5周龄昆明小鼠并制备免疫血清,ELISA检测结果显示VtaA1M和VtaA1C血清效价分别在1∶105和1∶404以上,表明VtaA1M和VtaA1C具有良好的免疫原性。免疫的小鼠分别用HPS血清5型分离株攻毒,结果显示VtaA1M和VtaA1C免疫的小鼠对该强毒株的攻击均能够提供60%的保护,表明VtaA1M和VtaA1C可以作为亚单位疫苗的有效成分。
- 刘娇崔宁周泷牛慧张艳禾李刚谢芳唐月敏倪宏波王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌原核表达免疫保护
