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轮状病毒与细胞受体间相互作用: 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿和多幼龄动物急性肠道疾病的一种主要病原,临床症状以腹泻和脱水为主要特征。该病成全世界分布,每年约有60万婴幼儿因感染RV而死亡,主要发生于欠发达国家。目前尚无治疗RV的特效...; 刘阳阳冉旭华闻晓波

猪轮状病毒Gottfried株和SB-1A株截短VP8基因的原核表达、蛋白纯化及免疫原性分析被引量：5: 2013年; 目的原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性。方法经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64～223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8*和pET-28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。应用ProBondTMResin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与A(lOH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确;表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合;纯化的两种重组蛋白纯度均在95%以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平。结论成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础。; 魏晓曼闻晓波冉旭华崔玉东; 关键词：猪轮状病毒原核细胞免疫原性

G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定被引量：17: 2016年; 轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内引发多种幼龄动物及婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原之一,给畜牧业发展和人类健康造成严重危害。通过RT-PCR对来自宁夏犊牛腹泻粪样进行检测,选取阳性样品经MA104细胞进行病毒分离。细胞盲传4代后出现CPE,至7代后细胞CPE现象明显,获得1株牛轮状病毒,扩增VP7、VP4基因并测序分析,结果表明该分离株属于G6P[5]型轮状病毒,命名为NX28。研究明确了G6P[5]型在国内牛群中的存在及流行,并为下一步的牛轮状病毒的分子流行病学研究奠定基础。; 闻晓波张玲玲倪宏波刘阳阳曹思冉旭华; 关键词：轮状病毒基因型

Gottfried和SB-1A株猪轮状病毒截短VP8*蛋白的免疫原性分析: 原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白并检测其免疫原性。方法经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfrie...; 闻晓波冉旭华魏晓曼崔玉东; 关键词：原核表达蛋白质纯化免疫原性; 文献传递

Gottfried和SB-1A株猪轮状病毒截短VP8*蛋白的免疫原性分析: 原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白并检测其免疫原性。方法经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfrie...; 闻晓波冉旭华魏晓曼崔玉东; 关键词：原核表达蛋白质纯化免疫原性

猪轮状病毒重组VP8*蛋白的原核表达及免疫原性分析被引量：5: 2015年; 为了分析原核表达的猪轮状病毒（PRV）Gottfried株截短的VP8＊（△VP8＊aa64—223）重组蛋白的免疫原性，通过构建原核表达载体pET-28a—Gotffried—△VP8＊（aa64—223），转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达、经SDS—PAGE和Westernblotting检测，并纯化后，肌肉免疫Balb／c小鼠，证明重组蛋白相对分子质量约25．0kDa，以包涵体和可溶性两种形式存在，纯化的重组蛋白纯度在95％以上，可溶性蛋白产量可达14～15mg·L-1。ELISA方法检测表明该重组蛋白可以诱导高滴度的特异性抗体，证明其具有良好的免疫原性，为进一步研制PRV亚单位疫苗及建立ELISA诊断方法奠定基础。; 毕艳铎魏晓曼冉旭华曹思张峣张玲玲苗艳闻晓波; 关键词：猪轮状病毒原核表达

破伤风毒素T细胞表位P2对猪轮状病毒△VP8^＊蛋白免疫原性的增强作用被引量：1: 2016年; 仔猪轮状病毒腹泻严重危害养猪业，为了开发亚单位疫苗，本课题组前期构建了猪轮状病毒SB-1A株截短的VP8^＊蛋白（△VP8^＊，64～223位氨基酸）原核表达载体pET28a—SB1A△VP8^＊。为了进一步提高亚单位疫苗的免疫原性，将破伤风毒素的通用T细胞表位P2引入重组亚单位蛋白，构建重组载体pET28a—P2-SB-IA△VP8^＊。P2-S13-1A△VP8^＊和S13-1A△VP8^＊在大肠杆菌中表达并纯化。重组蛋白与氢氧化铝佐剂混合后经肌肉注射免疫Balb／c小鼠，利用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果显示：P2-S13-1A△VP8^＊和S昏1A△VP8^＊在大肠杆菌中得到了高水平、可溶性表达；重组蛋白P2-SB-1A△VP8^＊诱导的血清抗体水平显著高于SB-1A△VP8^＊，说明P2可以增强SB-1A△VP8^＊的免疫原性，为日后开发猪轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。; 闻晓波魏晓曼冉旭华曹思张峣倪宏波张玲玲; 关键词：猪轮状病毒 T细胞表位 P2

益生菌抗轮状病毒感染的免疫调节机制研究进展: 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿和幼龄动物腹泻的主要病原体之一,全世界每年因感染RV而死亡的婴幼儿大约为21.5万人,目前尚无抗RV特效药。研究表明益生菌作为对宿主有益的一类微生物,可缓解由RV引起的腹泻...; 仝晓丹闻晓波; 关键词：轮状病毒益生菌免疫调节

CpG ODN、氢氧化铝和大肠埃希菌不耐热肠毒素无毒突变体联合佐剂对猪轮状病毒△VP8亚蛋白免疫效果的影响被引量：2: 2015年; 目的评价Cp G ODN、氢氧化铝[Al(OH)3]和大肠埃希菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)无毒突变体联合佐剂对猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)△VP8*亚蛋白免疫效果的影响。方法将LT A亚基上63位丝氨酸突变为赖氨酸,构建LT的无毒突变体重组表达质粒p ET-30a(+)-LTK63,于E.coli表达重组蛋白LTK63,并进行纯化。将小鼠随机分为LTK63+Al(OH)3组、Cp G ODN+Al(OH)3组、Cp G ODN+LTK63+Al(OH)3组及Al(OH)3对照组,将P2-SB-1AΔVP8*抗原蛋白分别与各组相应佐剂共同免疫小鼠,均经颈部皮下注射,隔2周免疫1次,共3次,于每次免疫后14 d采血,分离血清,间接ELISA法检测血清抗体效价及Ig G亚型;末次免疫2周后,MTT法检测小鼠特异性淋巴细胞的增殖。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒p ET-30a(+)-LTK63构建正确;表达和纯化产物经SDS-PAGE及Western blot分析,均可见相对分子质量约33 000(A亚基)和13 000(B亚基)的目的蛋白条带。二免后,Cp G ODN+LTK63+Al(OH)3组的抗体滴度显著高于LTK63+Al(OH)3组、Cp G ODN+Al(OH)3组和Al(OH)3对照组(P<0.05);末次免疫后2周,Cp G ODN+Al(OH)3组抗体滴度显著高于Al(OH)3对照组、Cp G ODN+LTK63+Al(OH)3组和LTK63+Al(OH)3组(P<0.001);Cp G ODN+LTK63+Al(OH)3和LTK63+Al(OH)3组小鼠血清中Ig G2a和Ig G1水平相当,Cp G ODN+Al(OH)3组血清抗体以Ig G2a为主,Al(OH)3对照组血清Ig G以Ig G1为主;Cp G ODN+Al(OH)3组小鼠特异性淋巴细胞的增殖能力最强。结论 Cp G ODN+Al(OH)3联合佐剂表现出明显的协同效应,可显著提高小鼠对PRV△VP8*亚蛋白的体液免疫和细胞免疫应答。; 冉旭华魏晓曼闻晓波曹思张峣崔玉东; 关键词：ODN 氢氧化铝不耐热肠毒素猪轮状病毒

牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达被引量：2: 2015年; 轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。; 冉旭华曹思张峣魏晓曼闻晓波倪宏波朱战波; 关键词：原核表达

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