山西省自然科学基金(2007011112)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
- 相关作者：吕智冯毅刘小丽郭贵明张桦栋更多>>
- 相关机构：山西医科大学第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抑癌基因PTEN和p27在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义被引量：1
- 2009年
- 目的探讨抑癌基因PTEN、p27在骨肉瘤发生发展过程中的作用及临床意义。方法收集资料完整的35例骨肉瘤患者和15例骨纤维结构不良患者的病理标本和临床资料,运用免疫组化方法(SP法)检测PTEN、p27在以上病理标本中的表达情况。结果PTEN在骨肉瘤组织中的阳性表达率低于骨纤维结构不良中的表达率(P<0.05),其表达水平与组织分化程度及患者临床分期有关(均P<0.01);p27在骨肉瘤组织中的阳性表达率低于骨纤维结构不良中的表达率(P<0.01),其表达水平与组织分化程度、患者临床分期、组织病理分级以及肺转移有关(均P<0.05);在骨肉瘤组织中PTEN、p27的表达无相关性(r=0.097,P=0.581)。结论PTEN和p27与骨肉瘤的发生发展密切相关,临床上检测PTEN和p27的表达对于骨肉瘤的早期诊断具有重要意义。
- 韩鹏飞吕智刘小丽雷雷张昱
- 关键词：PTENP27骨肉瘤免疫组织化学
- Nocodazole对骨肉瘤MG-63细胞增殖凋亡的影响及机制研究被引量：2
- 2011年
- 目的以细胞有丝分裂阻滞剂Nocodazole为诱导物,诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,并进行生物化学指标的检测。方法首先,观察1nmol/L～10μmol/L递增浓度的Nocodazole对MG-63细胞的作用,然后选取10,50,100,500nmol/L4个浓度诱导凋亡,通过噻唑蓝(MTT)比色实验测定细胞生长曲线;流式细胞技术(FCM)分析细胞周期;免疫细胞化学方法检测PLK1表达情况;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析Nocodazole作用前后MG-63细胞内PLK1基因表达情况。结果不同浓度Nocodazole作用MG-63细胞24h后,对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性增加。流式细胞仪分析结果显示,Nocodazole作用MG-63细胞后,G0/G1期细胞含量降低,S期细胞比例增加,G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Nocodazole作用后,免疫细胞化学检测显示,PLK1表达明显下降。RT-PCR分析显示经Nocodazole作用后的骨肉瘤细胞株MG-63表达PLK1较用药前明显下降。上述结果都有明显的量-效关系。结论 Nocodazole诱导MG-63细胞凋亡、G2/M期阻滞的机制可能是通过抑制PLK1基因的表达实现的。
- 贾鹏吕智刘小丽冯毅薛小云
- 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡
- TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞杀伤的体外实验研究被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨脂质体介导的TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞的杀伤作用以及所产生的旁观者效应。方法:脂质体介导TK基因体外转染骨肉瘤MG-63细胞,倒置荧光显微镜观察细胞转染是否成功,流式细胞仪检测转染细胞与未转染细胞的转染效率。将未转染的骨肉瘤MG-63细胞分为3组,实验1组用转染TK/GCV的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;实验2组用0.22μm滤器过滤的转染后的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;对照组用培养液培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别测定各组细胞的生长抑制率及骨肉瘤细胞对TK/GCV系统的敏感性。结果:经TK基因转染的MG-63细胞,倒置荧光显微镜下有大量绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染TK基因的细胞转染效率可达75.5%。6 d后MTT检测结果显示实验1组中各比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比有统计学意义(P<0.05);实验2组中1/10、1/7比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。经TK基因转染的MG-63细胞随GCV浓度增加,细胞凋亡率增加。结论:脂质体介导的TK/GCV系统能够通过旁观者效应抑制骨肉瘤MG-63细胞的生长。
- 张桦栋吕智冯毅刘小丽侯慧铭
- 关键词：骨肉瘤旁观者效应
- Caveolin-1在骨肉瘤中的表达及其意义被引量：3
- 2008年
- 目的观察Caveolin-1在骨肉瘤中的分布和表达情况,分析Caveolin-1在骨肉瘤临床诊断、治疗及预后评价中的意义。方法采用免疫组织化学SP法检测39例骨肉瘤组和22例良性骨肿瘤中Caveolin-1的表达,镜下观察Caveolin-1在肿瘤组织中的分布,应用自动图像分析检测Caveolin-1的表达情况。结果Caveolin-1表达于所有标本的肿瘤微血管和小血管内皮上,Caveolin-1表达于大多数骨肉瘤的肿瘤细胞,定位于细胞膜和胞浆,但在良性骨肿瘤中表达很微弱。Caveolin-1阳性表达率在骨肉瘤组中为59.0%,在良性骨肿瘤中为18.2%,两组间具有显著性差异(P<0.01),有统计学意义,表明Caveolin-1在骨肉瘤中高表达。Caveolin-1的表达与骨肉瘤肿瘤体积、病理分型和患者的性别无关(P>0.05),与骨肉瘤的组织分化和是否转移有关(P<0.05)。结论Caveolin-1在骨肉瘤中高表达原因不明,其可能是促进骨肉瘤发生发展的一个潜在因素,也可能作为骨肉瘤治疗的新靶点。
- 郭贵明吕智刘彦宾
- 关键词：CAVEOLIN-1骨肉瘤免疫组织化学
- TK基因转染骨肉瘤U-2细胞体外实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的研究脂质体介导的TK/GCV系统对人骨肉瘤细胞的杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21以及鉴定测序,提取、纯化重组质粒DNA,培养和转染人骨肉瘤细胞株U-2 OS,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,用转染后的培养液的上清加入TK(-)U-2 OS中观察旁观者效应。结果成功地构建出包含有TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计。荧光显微镜下观察U-2 OS(TK+)呈现绿色荧光。U-2 OS TK/GCV培养上清液可明显诱导细胞凋亡。但将上清液用0.2μm的滤膜滤过后,诱导凋亡作用消失。结论成功构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,体外实验表明人骨肉瘤细胞系U-2 OS对脂质体介导的TK/GCV系统敏感,并且有明显的旁观者效应,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径。
- 李晋惠吕智马卓冯毅王军兰彦平张桦栋
- 关键词：TK基因转染骨肉瘤旁观者效应
- 稳定表达野生型p53基因人骨肉瘤细胞株的建立与鉴定
- 2012年
- 目的建立稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤细胞株(U-2 OS),为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用提供体外实验模型建立与鉴定的方法。方法利用分子生物学基因克隆技术将人类野生型p53基因cDNA片段插入到表达载体pIRES-EGFP中,得到重组质粒pIRES-EGFP-p53,并通过PCR、酶切电泳等方法进行质粒鉴定;然后用该重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,转化菌落经PCR扩增后,将提取的质粒DNA用脂质体介导的转染方法导入U-2 OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系。结果成功地构建出包含有野生型p53 cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-p53,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计;并将该重组质粒成功导入人骨肉瘤细胞株U-2 OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系,命名为U-2-p53 OS。转染后的骨肉瘤细胞出现散在的凋亡现象。结论利用基因转染技术,建立了稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤U-2-p53 OS细胞系,为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用奠定了基础。
- 雷晓晶韩鹏飞吕智
- 关键词：P53基因转染骨肉瘤
- Caveolin-1在肿瘤中的研究进展被引量：5
- 2009年
- 郭贵明吕智
- 关键词：肿瘤侵袭转移CAVEOLAECAVEOLAE肿瘤抑制因子结构蛋白血管生成
