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广东省自然科学基金(9151063101000015)

作品数：12 被引量：55H指数：3
相关作者：肖东贾俊双姚开泰林晓琳肖高芳更多>>
相关机构：南方医科大学中南大学广东省医学实验动物中心更多>>
发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学理学更多>>

文献类型

  • 12篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生
  • 3篇生物学
  • 1篇理学

主题

  • 7篇基因
  • 5篇荧光
  • 4篇细胞
  • 4篇小鼠
  • 4篇慢病毒
  • 4篇干细胞
  • 3篇蛋白
  • 3篇多潜能干细胞
  • 3篇荧光蛋白
  • 3篇荧光素
  • 3篇荧光素酶
  • 3篇诱导性多潜能...
  • 3篇肿瘤
  • 3篇转基因
  • 3篇转基因小鼠
  • 3篇慢病毒载体
  • 3篇病毒载体
  • 2篇红色荧光蛋白
  • 2篇报告基因
  • 2篇C-MYC

机构

  • 11篇南方医科大学
  • 1篇中南大学
  • 1篇广东省医学实...

作者

  • 11篇肖东
  • 9篇贾俊双
  • 9篇姚开泰
  • 6篇林晓琳
  • 5篇史俊文
  • 5篇肖高芳
  • 4篇姚志芳
  • 3篇张余琴
  • 3篇申红芬
  • 3篇赵尊兰
  • 3篇高飞
  • 3篇张晟
  • 2篇李静
  • 2篇樊全荣
  • 2篇王胜纯
  • 1篇顾为望
  • 1篇赵文淘
  • 1篇黄黎珍
  • 1篇饶子亮
  • 1篇那顺巴雅尔

传媒

  • 4篇热带医学杂志
  • 2篇中国癌症杂志
  • 2篇中国比较医学...
  • 1篇生命科学研究
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇Journa...
  • 1篇岭南现代临床...

年份

  • 1篇2016
  • 2篇2013
  • 3篇2012
  • 2篇2011
  • 3篇2010
  • 1篇2009
共 12 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
携带人c-Myc和EGFP基因慢病毒表达载体的构建被引量：1
2011年
目的构建携带人c-Myc和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUMGW。方法 XhoI线性化pLenti-EF1a-c-Myc-IRES-EGFP,回收片段并补平XhoI,接着BamHI酶切该片段,回收2722bp片段而获连接用c-Myc-IRES-EGFP;EcoRI线性化pFUGW,回收并补平EcoRI,然后BamHI酶切该片段,回收9174bp片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的SolutionI将其与连接用c-Myc-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定。所构建载体命名为pFUMGW。获pFUMGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带c-Myc和EGFP基因的慢病毒感染人胚肾细胞株293、肿瘤细胞株CNE1和C666以建立相应的病毒感染体系。结果酶切证实成功构建了pFUMGW,按标准程序生产的携带c-Myc和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染293、CNE1和C666。结论成功构建携带人c-Myc和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUMGW,为相关后续研究打下了良好基础。
李艳青史俊文肖高芳肖东姚开泰
关键词：C-MYCEGFP慢病毒载体
诱导性多潜能干细胞(iPS cells)——现状及前景展望被引量：35
2009年
主要从iPS细胞发展历程、获得iPS细胞的几个关键步骤(如基因导入方式、诱导iPS细胞所需因子组合与小分子化合物运用和体细胞种类选择等)、病人或疾病特异性iPS细胞、iPS细胞体内外诱导分化与其衍生物的临床应用和制备无遗传修饰的(genetic modification-free)iPS细胞的可行性与前景等方面对iPS细胞最新研究进展做评述.日本和美国研究小组先后用4种基因将小鼠(2006年8月)和人(2007年11～12月)的体细胞在体外重编程为诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells),此后在短短两年多时间内,iPS细胞的研究和关注度呈爆炸式增长.体细胞重编程、去分化和多潜能干细胞来源等一系列热点问题再次成为干细胞和发育生物学等研究的热点和焦点.与胚胎干细胞(embryonic stem cells,EScells)一样,iPS细胞在体内可分化为3个胚层来源的所有细胞,进而参与形成机体所有组织和器官.迄今,在体外已由iPS细胞定向诱导分化出功能性的多种成熟细胞.因此,iPS细胞研究不仅具有重要理论意义,而且在再生医学、组织工程和药物发现与评价等方面极具应用价值.
申红芬姚志芳肖高芳贾俊双肖东姚开泰
关键词：体细胞重编程胚胎干细胞诱导性多潜能干细胞细胞治疗
借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞被引量：6
2010年
目的借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblasts,PEFs),以基于PEFs建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法取35d西藏小型猪胚胎,酶消化法分离培养西藏小型猪的PEFs;按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染),随后用病毒上清感染PEFs,24～48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产和成功感染PEFs。结果成功分离培养西藏小型猪的PEFs,按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒高效率感染西藏小型猪的PEFs。结论针对西藏小型猪的PEFs建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外投递系统,为相关后续研究打下了良好基础。
张晟肖高芳黄黎珍那顺巴雅尔贾俊双姚志芳肖东顾为望
关键词：慢病毒绿色荧光蛋白
携带Fluc和ZsGreen双报告基因小鼠iPS细胞系的建立被引量：2
2013年
背景与目的:诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)在修复受损组织器官和治疗人类疾病方面已展示了良好的应用前景,但iPS细胞具有形成畸胎瘤的作用,这是其安全应用于临床的巨大障碍之一。为此本研究拟利用慢病毒体外感染的方法,建立携带萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,ZsGreen)双报告基因的小鼠iPS细胞系,为活体动态监测畸胎瘤形成、定植和形成畸胎瘤所需最小细胞剂量等提供实验基础。方法:构建含Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。以pLH2BmRFP质粒为模板,PCR扩增获得Fluc基因片段,将其克隆至利用BamHⅠ酶切的pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen质粒中,挑选一个阳性克隆质粒进行测序,最终获得携带双报告基因的慢病毒载体pEF1a-Fluc-IRES-ZsGreen(pELZG)。采用脂质体介导的瞬时转染生产携带Fluc和ZsGreen基因的病毒,收集病毒上清,并感染iPS细胞,数天后荧光显微镜下观察是否有绿色荧光的iPS细胞克隆,不断挑取ZsGreen阳性的iPS细胞克隆以进一步纯化。将标记好的iPS细胞移植入裸鼠皮下,观察成瘤情况。结果:pELZG载体分别经XbaⅠ、PvuⅡ、SacⅠ单酶切,得到的片段大小分别为10.005、3.282和6.723 kb,2.441、3.401和6.604 kb,预示成功构建了Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。利用其生产的病毒上清成功感染iPS细胞,经过不断的纯化,最终获得含稳定表达Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系。将标记好的iPS细胞植入裸鼠皮下后,观察到畸胎瘤的形成。结论:成功建立了携带Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系,为相关后续研究打下了良好的基础。标记后的iPS细胞对畸胎瘤的形成和发展具有很好的示踪作用。
樊全荣史俊文贾俊双高飞张余琴赵尊兰姚开泰肖东
关键词：萤火虫荧光素酶293T细胞诱导性多潜能干细胞畸胎瘤
稳定过表达miR-26a肝癌细胞株的建立被引量：3
2013年
目的建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞株。方法以CTE049质粒为模板,PCR扩增miR-26a序列418bp,片段两侧添加XbaⅠ和BamHⅠ酶切位点,In-Fusion克隆至pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen中,次日挑选单菌落,提取质粒并进行测序和酶切鉴定;所构建的载体命名为pLVT-miR26a。获得pLVT-miR26a后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带miR-26a和ZsGreen基因的慢病毒感染小鼠肝癌细胞(Hep1-6)、人肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、Sk-Hep-1、HepG2-luc),以建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞系;qRT-PCR检测所建立肝癌细胞系中miR26a的表达水平。结果测序和酶切证实成功构建了pLVT-miR26a,按标准程序生产的携带miR-26a和ZsGreen基因的慢病毒上清成功感染小鼠及人肝癌细胞。结论成功建立稳定过表达miR-26a的肝癌细胞株,为相关后续研究打下了良好基础。
赵文淘赵尊兰史俊文王胜纯林晓琳李静姚开泰肖东
关键词：慢病毒载体肝癌
Synthesis of a Kind of Temperature-responsive Cell Culture Surface for Corneal Sheet被引量：1
2010年
In this study, acrylic acid （AA） and 4-azidoaniline were used to modify poly （N-isopropylacrylamide） （NIPAAm） in order to fabricate temperature-responsive surface for corneal epithelia cell adhesion and detachment. First, NIPAAm was copolymerized with acrylic acid. Then, the copolymer was coupled with azidoaniline to synthesize AzPhPIA, derivative of p（NIPAAm-co-AA）, which possesses both thermo- and photo-sensitivities. Second, the synthesized copolymer was characterized by high performance liquid chromatography （HPLC）, Fourier transform infrared （FTIR） and a CHN analyzer. The thermo-sensitivity was characterized by temperature reducing experiment, contact angle measurement and low critical solution temperature （LCST） testing. Third, the derivatized copolymer was immobilized by photolithography on a polystyrene plate, and then the surface characterization of AzPhPIA-coated polystyrene plate （PSt） was measured by electron spectroscopy for chemical analysis （ESCA）. The thermo-sensitivity and cytocompatibility of the AzPhPIA-coated PSt were investigated by corneal epithelial cells culture. The results revealed that the AzPhPIA-coated PSt exhibited good cytocompatibility and cell detachability when temperature decreased.
Yanqing GuanZhibin LiXin WangXiaoli NiAini YangJunming Liu
关键词：N-ISOPROPYLACRYLAMIDE
慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠被引量：3
2010年
目的利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台。方法将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠。结果移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只(R3和R4)鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只(R1、R2、R3、R4和R5)基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达。结论建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉(RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。
贾俊双肖高芳林晓琳张晟姚志芳杜文婷申红芬刘科饶子亮孙妍姚开泰肖东
关键词：红色荧光蛋白转基因小鼠
慢病毒载体法制备荧光素酶转基因小鼠被引量：1
2012年
目的基于慢病毒介导的转基因方法制备荧光素酶(Luc)转基因小鼠。方法制备携带Luc基因的慢病毒,将其注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,然后将胚胎移植进假孕母鼠体内以获得仔鼠,应用小动物活体成像仪及PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定Luc转基因小鼠。结果移植慢病毒隙感染后的成活胚胎63枚。将其移植至3只假孕母鼠,其中2只怀孕,共生仔鼠11只;利用小动物活体成像仪检测Luc表达,在蛋白水平证实11只F0代中,3只(命名为S1、S2、S3)表达Luc;DNA水平检测证实,3只Luc阳性小鼠的基因组中整合有外源转基因Luc。此外,Luc转基因首建鼠基因组中整合的Luc转基因可稳定遗传至下一代,并能正常表达。Luc转基因小鼠主要脏器如睾丸、肾脏、胃、肠、肺、脑、胸腺、肝脏和心脏等均可见Luc信号,但不同脏器间Luc强度有差异。结论成功制备Luc报告基因转基因小鼠。
张余琴林晓琳贾俊双高飞李静王胜纯姚开泰肖东
关键词：荧光素酶转基因小鼠
构建Alb启动子调控HBEGF肝特异性表达的慢病毒载体及其功能验证被引量：1
2016年
目的构建肝特异性Alb(白蛋白)启动子调控HBEGF(Heparinbinding-epidermal growth factor)表达的慢病毒载体p LV-ATTG。方法首先以p Alb-Cre-GH/BS为模板,PCR扩增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion克隆至Not I酶切的p TRECK6-GFP中,获得p AlbTRECK6(TRECK:toxin receptor-mediated conditional cell knockout);接着以p Alb-TRECK6为模板,PCR扩增Alb-TRECK6,In-Fusion克隆至Xba I/Bam H I酶切的p CD823A-1载体(该载体已卸去EF-1α启动子)中,获得最终的慢病毒载体p LV-ATTG,所构建的质粒均经测序和酶切鉴定。然后按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装。包装成功的慢病毒LV-ATTG感染肝癌细胞株BEL-7402细胞,倒置荧光显微镜检测cop GFP表达,并收集细胞提取总RNA,以检测HBEGF表达。结果酶切鉴定和测序证实成功构建了慢病毒载体p LV-ATTG;LV-ATTG感染BEL-7402细胞后,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,同时q RT-PCR检测结果显示HBEGF转基因能够正常表达。结论成功构建Alb启动子调控HBEGF表达的慢病毒表达载体,为相关后续研究奠定了坚实基础。
贾俊双陈傍柱林霞刘宇肖东林晓琳
关键词：ALB慢病毒载体
人诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)系的建立被引量：2
2011年
掌握建立人iPS细胞系(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的技术,以便为人肿瘤细胞重编程为iPS细胞建立技术平台.在人胚胎干细胞的培养条件下,通过携带Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 4个混合因子的慢病毒感染人皮肤成纤维细胞(CCD-1079SK细胞),从而诱导成干细胞样的克隆.根据人胚胎干细胞的特性进行如下鉴定:克隆形态、碱性磷酸酶活性、核型和CCD-1079SK细胞来源的克隆拟胚体(embryoid bodies,EBs)形成及分化等.结果显示,在人胚胎干细胞的培养环境中,导入Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 4个因子的CCD-1079SK细胞产生了一株iPSC克隆,这株iPSC克隆在细胞形态、增殖能力、胚胎细胞特异性表面抗原以及基因表达与人胚胎干细胞相似,此外,iPSC克隆在体外悬浮培养中形成拟胚体并分化成3个胚层.人iPS细胞系的成功建立为利用iPS细胞技术开展肿瘤细胞重编程研究奠定了坚实基础.
姚志芳史俊文贾俊双申红芬林晓琳肖高芳张晟肖东姚开泰
关键词：肿瘤治疗
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