南京军区医学科技创新课题(10Z008)
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
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- 黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：7
- 2013年
- 目的观察黄芪甲苷（Ast）孵育后的脂肪源性干细胞（ADSC）对顺铂诱导的肾小管上皮细胞（HKC）损伤的影响。方法HKC被分为4组：（1）对照组；（2）顺铂组；（3）ADSC与损伤HKC共培养组（ADSC＋HKC组）；（4）Ast孵育ADSC后与损伤HKC共培养组（Ast＋ADSC＋HKC组）。分别用不同浓度的顺铂（2．5、5、10、20μmol／L）诱导HKC6、24h，建立肾小管细胞损伤模型。用Transwell小室与20mg／LAst孵育的ADSC间接共培养48h。流式细胞术（FCM）和原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测HKC的细胞凋亡；以增殖细胞核抗原（PCNA）反映HKC增殖情况；ELISA法检测下室HKC培养液中白细胞介素6（IL－6）、T细胞表达和分泌因子（RANTES）、红细胞生成素（EPO）、类胰岛素一号增长因子（IGF－1）的表达；结晶紫染色观察上室膜下ADSC的迁移指数。结果FCM和TUNEL结果均显示，与顺铂组相比，ADSC＋HKC组和Ast＋ADSC＋HKC组细胞凋亡的比例和数量减少，差异有统计学意义（均P〈0．05）；PCNA染色结果显示ADSC＋HKC组和Ast＋ADSC＋HKC组的细胞增殖数量高于顺铂组，差异有统计学意义（P〈0．05）；与顺铂组相比，Ast＋ADSC＋HKC组IL－6、RANTES水平明显降低，EPO、IGF－1水平升高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；结晶紫染色显示Ast＋ADSC＋HKC组ADSC的迁移指数高于其他3组（均P〈0．05）。结论黄芪甲苷可刺激ADSC的旁分泌效应，增强ADSC向受损部位定向迁移，从而减少HKC凋亡。
- 王葳姜燕王巍巍张金元
- 关键词：急性肾损伤黄芪甲苷顺铂
- 低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响。方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育。电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化;原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数;Westernblot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化。结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高;其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显。(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P<0.05);细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显。(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高;培养液中HO-1、VEGF含量增高(P<0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显。结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关。
- 王巍巍李慧凛张金元王葳
- 关键词：低氧诱导因子1Α基因转染肾小管上皮细胞
- 低氧诱导因子1α基因修饰脂肪干细胞修复小鼠急性肾损伤被引量：5
- 2012年
- 背景:干细胞移植为肾损伤的治疗提供了一个新的途径,治疗基因转染干细胞可增强对疾病的治疗效果。目的:探讨低氧诱导因子1α基因修饰的脂肪源性干细胞移植对急性肾损伤小鼠肾脏结构和功能的影响。方法:连续2d向BALB/C裸鼠腹腔注射10mg/kg顺铂诱导急性肾损伤小鼠模型。造模24h后经小鼠尾静脉注射含1×105个脂肪源性干细胞或转染低氧诱导因子1α的脂肪源性干细胞的细胞悬液,3d后留取小鼠血液及肾组织标本进行实验。以注射200μL生理盐水的急性肾损伤小鼠作为模型对照,以正常小鼠作为正常对照。结果与结论:脂肪源性干细胞干预后急性肾损伤小鼠血清肌酐、尿素氮水平降低,肾组织病理改变及肾小管上皮细胞的凋亡病变减轻,肾组织炎症因子RANTES、肿瘤坏死因子α表达降低,白细胞介素10表达升高;其中低氧诱导因子1α基因修饰的脂肪源性干细胞对肾组织细胞凋亡及炎症因子表达作用更明显。免疫荧光染色可见移植的脂肪源性干细胞的存活,但未见其向肾小管上皮细胞转化。结果表明脂肪源性干细胞移植可改善急性肾损伤小鼠的肾脏结构和功能,经低氧诱导因子1α基因修饰后的脂肪源性干细胞作用更显著。
- 王巍巍姜燕王葳程劲张金元
- 关键词：干细胞脂肪间充质干细胞低氧诱导因子1Α基因修饰急性肾损伤细胞移植干细胞移植
- 黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响被引量：6
- 2014年
- 背景:干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实,但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。目的:观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法:实验分为4组。2.5μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞24 h,建立肾小管细胞损伤模型(顺铂损伤组);将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养(脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);利用Transwell小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养(黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);以正常肾小管上皮细胞做对照(正常对照组)。结果与结论:与肾小管上皮细胞损伤组相比,AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组和20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少;ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高(P<0.05);Western blot进一步显示20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降,而Bcl-2的表达量明显增加(P<0.05)。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌,抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。
- 王葳姜燕王巍巍张金元
- 关键词：干细胞脂肪干细胞黄芪甲苷肾小管上皮细胞顺铂
