国家自然科学基金(31201943)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李志勇柳纪省高鹏张志东殷相平更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学西北师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒诱导细胞自噬的分子机制研究
- 自噬（autophagy）是一个依赖于溶酶体的胞内代谢途径,控制蛋白和细胞器降解,并在细胞存活、发育、维持稳态等方面发挥重要作用。同时研究也表明自噬与多种人类疾病相关,包括癌症、神经退行性疾病和病毒感染等。多种刺激能够激...
- 孙鹏
- 关键词：口蹄疫病毒自噬内质网应激天然免疫
- 文献传递
- FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒载体的构建被引量：2
- 2014年
- 为研制O型口蹄疫病毒(FMDV)复制缺陷型腺病毒活载体疫苗毒株,通过RT-PCR方法获得了O型FMDV的开放阅读框(ORF)基因,并定向克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMVORF,经PCR、酶切及测序鉴定,克隆得到的ORF编码基因序列与原始强毒株O型FMDV的ORF编码基因相似性达99.8%。将含有目的基因的穿梭质粒线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-2共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,得到重组腺病毒质粒pAd-ORF,经PCR和酶切鉴定正确。本研究成功获得了含有现代O型疫苗用FMDV毒株的全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒及其腺病毒骨架质粒。
- 高鹏李志勇柳纪省
- 关键词：口蹄疫病毒开放阅读框腺病毒载体
- O型口蹄疫病毒缅甸98株衣壳蛋白的表达及抗原性分析被引量：1
- 2018年
- 口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构，具有与完整病毒相似的构象和免、疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株（O／MYA98／BY／2010株）为研究对象，利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒，间接免疫荧光试验检测到Sf9昆虫细胞成功表达重组衣壳蛋白。对收集的蛋白分析发现，重组衣壳存在于未被裂解的前体蛋白和中间体蛋白中。双抗夹心ELISA检测到重组衣壳蛋白相比灭活病毒有较高的抗原结合效价。蔗糖密度梯度离心纯化空衣壳，空衣壳所在梯度表现出最强抗原性。研究结果证实了重组衣壳蛋白具有良好的抗原性，可为口蹄疫病毒空衣壳疫苗的深入研究提供参考。
- 胡高维马凯凯齐兴财常兴妮殷相平李志勇张志东
- 关键词：O型口蹄疫病毒抗原性
- 稳定表达T7 RNA聚合酶的BHK-21细胞系的建立被引量：1
- 2013年
- 为了建立能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞系,利用PCR方法从BL21(DE3)细菌中扩增T7RNA聚合酶基因,并克隆到慢病毒表达系统的pLVX-Puro转移载体上,然后与Lenti-X HTX包装载体共转染Lenti-X 293T细胞系,收获高效价的慢病毒。将慢病毒感染BHK-21细胞,用嘌呤霉素多次筛选后获得抗性细胞。用构建的pET-28a-IRES-EGFP检测质粒转染得到的抗性细胞,有荧光表达的细胞即可以稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系。结果表明:构建的BHK-T7株细胞能稳定表达T7RNA聚合酶。
- 关洪鑫李志勇高鹏许生智白银梅柳纪省
- 关键词：T7RNA聚合酶细胞系
- 猪线粒体抗病毒信号蛋白MAVS对口蹄疫病毒感染宿主的影响
- 2017年
- 采用构建猪源MAVS重组质粒pEGFP-MAVS,将其转染PK-15细胞24h后,再感染口蹄疫病毒(MOI=0.1),通过Western blot和real-time PCR检测MAVS融合蛋白表达及对口蹄疫病毒感染宿主细胞的复制和病毒感染滴度。结果显示:重组质粒pEGFP-MAVS能在PK-15细胞中获得表达,并且上调MAVS基因对口蹄疫病毒在宿主细胞中的早期复制有显著抑制作用,病毒的感染滴度也有一定的降低。结果表明:MAVS具有一定的抗病毒作用,此为进一步研究口蹄疫病毒逃逸宿主天然免疫的机制奠定了基础。
- 崔晓蕊李守湖秦晓东常兴妮孙鹏孙继国李志勇
- 关键词：线粒体MAVS口蹄疫病毒实时荧光定量PCR
- O型口蹄疫病毒衣壳酸敏感性位点的筛选
- 2015年
- 为筛选与O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳酸敏感性相关的位点,本研究以牛源O型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株筛选工作。通过给予pH 6.0酸性环境连续诱变,筛选获得6株耐酸性毒株。将诱变病毒与亲本病毒衣壳蛋白编码区P1区序列比对后发现7个核苷酸突变,即共同存在于6株耐酸毒株P1区的错义突变A1334G(Y445C)、A1643G(Q548R)、A1822G/A1823C(N608A)及同义突变G1371A,另有仅存在于耐酸毒株m2P1区的错义突变C1849T(P617S)和仅存在于耐酸毒株m1P1区的同义突变G468T。本研究为O型FMDV酸敏感性分子机制的揭示及病毒衣壳酸稳定性的提高奠定了基础。
- 解银丽马琪秦晓东殷相平柳纪省张志东李志勇
- 关键词：O型口蹄疫病毒衣壳
