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骨髓间质干细胞在原位肝移植受体鼠体内分布及对肝功能和生存期的影响被引量：5: 2007年; 目的:观察受体SD大鼠骨髓间质干细胞在原位肝移植术后受体内的分布情况,及其对肝功能与生存期的影响。方法:实验于2005-06/2006-06在珠江医院中心实验室完成。①选取30只Wistar大鼠作为供体,30只SD大鼠作为受体,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、细胞移植组,10对/组。②另取30只SD大鼠用于骨髓间质干细胞的获取,麻醉后处死,取股骨内骨髓,采用密度梯度离心法与贴壁法分离培养骨髓间质干细胞,3d后全量换液,第10天传代。取第3代骨髓间质干细胞1mL(含干细胞约1×107个),用5μmol/L羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记10s,以体积分数为0.1的胎牛血清终止染色。③模型对照组、细胞移植组采用双袖套法建立Wistar→SD大鼠肝移植模型,移植后SD大鼠存活时间大于72h为造模成功标志。假手术组单纯行腹部切开缝合术。术毕关腹前,假手术组、细胞移植组SD大鼠分别经门静脉注入骨髓间质干细胞悬液1mL(约1×107个干细胞),模型对照组给予等量DMEM。④各组分别于术后1周、2周、1个月,荧光显微镜下观测经羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记的骨髓间质干细胞分布情况;取尾静脉血1mL,检测谷丙转氨酶及总胆红素含量;免疫组化法检测肝组织免疫排斥反应。同时观测1个月内各组接受肝移植的SD大鼠的存活时间。结果:各组接受肝移植的10只SD大鼠均进入结果分析。①骨髓间质干细胞的原代培养与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记结果:骨髓间质干细胞原代培养48～72h以圆形和短梭形为主,体外分离培养扩增至第3代较为纯化,经羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记后细胞膜呈绿色。②肝组织骨髓间质干细胞的分布:假手术组、模型对照组术后1,2周及1个月肝组织内均未见骨髓间质干细胞分布。细胞移植组各时间点骨髓间质干细胞主要聚集在肝脏。③术后肝功�; 谭浩翔高毅王琼张会迎; 关键词：原位肝移植免疫排斥反应生存期

最适苦参碱浓度并用冻存保护剂对L-02人肝细胞系冻存保护的效应被引量：2: 2006年; 目的:观察不同浓度剂量苦参碱与冻存保护剂联用对L-02人肝细胞系液氮冻存复苏后功能的影响,探索一种适合肝细胞保存的新方法。方法:实验于2005-01/07在南方医科大学中心实验室进行。常规培养的L-02人细胞系用胰酶消化后,将收集的L-02人肝细胞系分别以6种不同的冻存液(10%二甲基亚砜、5%二甲基亚砜+0mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜+0.2mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜+2mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜+6mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜+10mg/L苦参碱)在液氮中冷冻保存1个月。1个月后快速复苏L-02人肝细胞系,进行存活率、形态学及功能检测。结果:①复苏后L-02人肝细胞系的活存率5%二甲基亚砜+6mg/L苦参碱组明显高于其他处理组[胰酶刚消化的细胞活率为(96.2±1.4)%,10%二甲基亚砜组(76.6±3.8)%,5%二甲基亚砜组(81.9±2.4)%,5%二甲基亚砜+0.2mg/L苦参碱组(81.6±2.4)%,5%二甲基亚砜+2mg/L苦参碱组(84.7±2.8)%,5%二甲基亚砜+6mg/L苦参碱组(89.6±3.4)%,5%二甲基亚砜+10mg/L苦参碱组(86.9±1.6)%,P>0.05]。②复苏后5%二甲基亚砜+6mg/L苦参碱组肝细胞完整性恢复快,肝细胞生长旺盛,细胞膜完整,胞浆内有丰富颗粒,核仁清楚,与未冻存组肝细胞形态相似。③复苏后L-02人肝细胞系培养上清液尿素含量、上清液白蛋白含量5%二甲基亚砜+6mg/L苦参碱组明显高于其他处理组,与对照组无显著差异。结论:①苦参碱对L-02人肝细胞液氮冻存有保护作用,6mg/L苦参碱是最好的浓度。②苦参碱、二甲基亚砜有协同作用,5%二甲基亚砜+6mg/L苦参碱联合冻存保护体系显著提高L-02人肝细胞系的冻存质量。; 郭跃虎高毅陈建锋; 关键词：冷冻苦参碱

人骨髓间充质干细胞的生物学特性分析被引量：2: 2006年; 目的对人骨髓间充质干细胞（HMSCs）的生物学特性进行初步分析，为其临床应用奠定基础。方法抽取4例健康人髋骨内骨髓5～20ml，密度梯度离心法分离HMSCs。体外培养扩增后流式细胞仪检测HMSCs表面标记物；MMT法绘制生长曲线，计算细胞倍增时间；吉姆萨染色法检测细胞核型。结果HMSCs表面标记物CD29、CD44、CD71、CD105、CD166、HLA-ABC、UEA-1阳性表达；CD34、CD45、HLA-DR阴性表达；生长曲线呈S形，细胞倍增时间随代次增加而延长；核型分析显示第3、6代HMSCs的染色体数目未发生改变。结论密度梯度离心法可得到纯度较高的HMSCs，表可达人类间充质干细胞的表型特征。HMSCs可在体外较长时期培养。在第7代之前细胞增殖旺盛，之后细胞增殖能力逐渐下降；在第6代之前染色体数目未发生改变。; 陈建锋高毅潘明新; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养

人骨髓干细胞异体内诱导分化为肝细胞的实验(英文)被引量：2: 2006年; 背景:如何获取来源丰富的高质量人源性肝细胞是生物人工肝和肝细胞移植共同面临的问题。骨髓干细胞在适当条件下可分化为肝细胞,为获取肝细胞提供了新的思路。目的:探讨人骨髓干细胞在大鼠体内诱导分化为肝细胞的方法,为解决临床肝脏移植和生物人工肝来源提供新的思路。设计:随机对照实验。单位:南方医科大学珠江医院普通外科。材料:实验于2004-05/2005-02在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。选取雄性清洁级SD大鼠40只,随机分为5组:单纯模型组、造模+人骨髓干细胞移植14d组、造模+人骨髓干细胞移植28d组、造模+CL-1细胞(人肝细胞系)移植14d组、造模+CL-1细胞(人肝细胞系)移植28d组,8只/组。方法:①5组均建立2-乙酰氨基芴+四氯化碳+环磷酰胺肝损伤模型。②利用治疗性肝再生策略,将人骨髓干细胞移植到大鼠肝脏内诱导分化为肝细胞。造模+人骨髓干细胞移植14d组移植人骨髓干细胞后观察14d,造模+人骨髓干细胞移植28d组移植人骨髓干细胞后观察28d,造模+CL-1细胞移植14d组移植CL-1细胞后观察14d,造模+CL-1细胞移植28d组移植CL-1细胞后观察28d,单纯模型组未进行细胞移植。③各组在正常状态下以及移植前后进行血清标本的采集与肝功能检测。应用免疫组化、聚合酶链反应法、实时荧光定量反转录聚合酶链反应技术检测各组大鼠肝脏内人白蛋白的mRNA的表达。主要观察指标:①人骨髓干细胞移植对大鼠肝功能转氨酶及总胆红素含量的影响。②各组大鼠病理切片肝细胞形态检查结果。③各组大鼠肝脏中人主要组织相容性抗原-Ⅰ类阳性率。④各组大鼠肝脏中大鼠Sox11序列、人Alu-sx序列、人白蛋白mRNA基因的表达。结果:实验选用40只大鼠,全部进入结果分析。①人骨髓干细胞移植对大鼠肝功能转氨酶及总胆红素含量的影响:各细胞移植组在正常状态以�; 陈建锋高毅蒋泽生李浩; 关键词：干细胞骨髓细胞肝再生聚合酶链反应逆转

人骨髓来源的多能成体祖细胞分离纯化的实验研究被引量：6: 2004年; 目的建立获取高纯度人骨髓来源的多能成体祖细胞(MAPCs)的方法。方法取志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,对单个核细胞行贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、Gly-A免疫做磁珠负分选,流式细胞仪鉴定分选后提高细胞纯度。结果 (1)通过MAPCs分选,半均每1×106／mL骨髓贴壁细胞可分选出约(5.1±2.8)×104／mL数量级的MAPCs,分选前后细胞活力分别为96.7％±1.7％和96.0％±2.4％,无明显差异;(2)流式细胞仪分析获取的CD45-、Gly-A-细胞纯度大于98％。结论 CD45、Gly-A免疫微磁珠负分选可从骨髓单个核细胞中中分选出高纯度的MAPCs。; 唐力军高毅姜晓丹柳晓秋邹雨汐; 关键词：CD45 人骨髓祖细胞单个核细胞贴壁细胞成体分离纯化

人源性细胞大鼠体内移植的实验研究: 骨髓内存在能够向肝细胞分化的干细胞的事实已被广泛接受。然而,骨髓源性肝干细胞还不能作为生物人工肝以及肝细胞移植的种子细胞进行临床应用。主要的原因是难以通过骨髓源性干细胞获取足够数量的肝细胞。本实验利用治疗性肝再生策略,通...; 陈建锋李浩潘明新郭跃虎高毅; 文献传递

受体骨髓间质干细胞在大鼠原位肝移植中对免疫排斥的影响: 目的观察受体骨髓间质干细胞(BM-MSCs)在大鼠原位肝移植后体内的分布与作用。方法以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体采用双袖套法制作原位肝移植模型,密度梯度离心法分离与贴壁法富集受体BM-MSCs。CFSE标记术...; 谭浩翔高毅张会迎王琼; 关键词：骨髓间质干细胞原位肝移植术免疫排斥; 文献传递

中国人肝细胞系作为生物人工肝细胞材料的可行性探讨被引量：13: 2004年; 目的:探讨国内人肝细胞系作为生物人工肝细胞材料的可行性。方法:收集国内9株人肝细胞系,体外培养,光镜、电镜下观察细胞生长分化特性;以流式细胞仪测定其DNA指数值;测定培养上清中人白蛋白、尿素含量及安定转化量;将CL-1细胞接种到裸鼠皮下,观察其致瘤性。结果:9株人肝细胞系中,CL-1细胞分化最好,DI值与正常人淋巴细胞的DI值最接近,生物合成及代谢功能最好,但有一定的致瘤性。结论:9株人肝细胞系中,CL-1人肝细胞系最可能用作BAL细胞材料,有进一步研究的价值。; 李浩高毅杨继震薛国柱; 关键词：肝细胞系生物材料生物人工肝 BAL

受体骨髓间质干细胞在大鼠原位肝移植中对生存期的影响: 目的观察受体骨髓间质干细胞(MSCs)在大鼠原位肝移植(OLT)后体内的分布与对生存期的影响。方法以Wistar为供体SD为受体双袖套法制作原位肝移植模型,密度梯度离心法分离与贴壁法富集受体MSCs。实验分3组,A组:正...; 谭浩翔高毅王琼张会迎; 关键词：骨髓间质干细胞原位肝移植免疫排斥反应生存期; 文献传递

不同冻存液改善人胎肝细胞冻存质量比较: 2005年; 目的:通过对不同冻存液冻存人胎肝细胞进行比较,探索一种效果较好的冻存液以改善冻存肝细胞质量。方法:实验于2004-08/11在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。采用二步灌注法分离人胎肝细胞,将分离后的胎肝细胞分别以3组不同冻存液(H AM F-12,RPM I-1640,DM EM)在液氮中冷冻保存4周。4周后快速复苏胎肝细胞,进行存活率、形态学及尿素、白蛋白、谷草转氨酶分泌量检测。结果:①HAM F-12组生存率为(86.0±2.4)%,明显优于RPM I-1640组(81.9±6.5)%和DM EM组(82.1±4.6)%。②H AM F-12组肝细胞极性恢复快,肝细胞生长旺盛,细胞膜完整,胞浆内有丰富颗粒,核仁清楚,少数细胞内出现空泡,与对照组肝细胞形态相似。③用H AM F-12组液冻存人胎肝细胞复苏后,尿素、白蛋白、谷草转氨酶分泌量优于RPM I-1640组和DM EM组。结论:①在其他冻存条件相同下,HAM F-12冻存液显著提高了人胎肝细胞冻存质量,优于RPM I-1640液、DM EM液。②复苏后H AM F-12组肝细胞形态学光镜下观察与刚分离的肝细胞无明显差异,进行原代培养后肝细胞极性恢复较好。; 朱应乾高毅汪燕; 关键词：肝细胞

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广东省科技计划工业攻关项目(2002A3020206)

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