国家自然科学基金(30070297)
- 作品数：11 被引量：48H指数：4
- 相关作者：黄爱龙刘冰熔肖彧君沈鼎明邓华聪更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤坏死因子-α诱导人恶性胶质瘤U251细胞核因子-κB活化及其意义被引量：1
- 2006年
- 目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人恶性胶质瘤U251细胞核因子-κB(NF-κB)的诱导活化作用,并观察NF-κB抑制剂对TNF-α诱导U251细胞凋亡的影响。方法采用电泳迁移率变动分析法检测TNF-α对U251细胞NF-κB的诱导活化,并通过甲基噻唑蓝(MTT)法和流式细胞技术检测NF-κB抑制剂对TNF-α诱导U251细胞凋亡的影响。结果TNF-α对U251细胞NF-κB具有诱导活化作用,其作用效果具有时间依赖性。NF-κB抑制剂对TNF-α诱导的U251细胞凋亡具有明显的促进作用(P<0.01)。结论TNF-α对胶质瘤细胞中的NF-κB具有诱导活化作用,抑制NF-κB活化可以提高胶质瘤细胞对TNF-α诱导的凋亡作用的敏感性。
- 陈海锋程远游潮黄爱龙
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α核因子-ΚB胶质瘤
- 中国人IκBα基因的克隆和序列分析被引量：8
- 2002年
- 目的克隆中国人IκBα基因，了解其与欧美人种有无不同, 为进一步的研究工作打下基础。方法从中国人外周血中分离单个核细胞，刺激细胞贴壁30 min后 提取总RNA。应用RT-PCR法扩增目的基因，胶回收法纯化。将其连接到pGEM-T质粒载体，进行测序并与已知IκBα 序列进行同源性分析。结果中国人IκBα基因与genebank中发表的人IκB α基因序列仅2个碱基不同且所编码氨基酸无改变。结论我们已成功克隆了中国人IκBα基因 。同源性分析表明，其与 genebank中所报道的基因序列基本一致。
- 刘冰熔黄爱龙沈鼎明
- 关键词：基因克隆中国人基因序列分析RT-PCR核转录因子NF-ΚB
- 重组腺病毒IκBαM在血管内皮细胞ECV-304中的表达及对NF-κB活性的抑制
- 2004年
- 目的 检测重组腺病毒IκBαM(AdIκBαM)在血管内皮细胞ECV - 30 4中的表达及肿瘤坏死因子 (TNF -α)诱导下IκBαM的变化与对NF -κB活性的抑制作用。方法 用携有NF -κB抑制物IκBα突变体的AdIκBαM感染ECV - 30 4细胞 ,用West ernblot及EMSA法检测IκBαM的表达及NF -κB活性的变化情况。结果 AdIκBαM在ECV - 30 4细胞中表达且不被TNF -α诱导降解 ,感染IκBαM的ECV - 30 4 /IκBαM细胞在TNF -α刺激下NF -κB无激活 ,而未感染IκBαM的ECV - 30 4细胞经TNF -α刺激后可有NF -κB的过度活化。结论 AdIκBαM能高效扩增并有效感染ECV - 30 4血管内皮细胞 ,且不会被TNF -α诱导而降解 ,能有效抑制血管内皮细胞NF -κB的过度活化 ,抑制NF -κB活性可能保护血管内皮细胞免于TNF
- 肖彧君邓华聪黄爱龙
- 关键词：核转录因子-ΚB肿瘤坏死因子血管内皮细胞
- NF-κB超抑制物IκBαM重组腺病毒的构建被引量：14
- 2004年
- 目的 在克隆IκBα基因并构建IκBαM的基础上 ,构建重组腺病毒AdIκBαM。方法 将IκBαM克隆至穿梭质粒 ,线性化后与骨架质粒共同转染BJ5 183菌 ,构建重组腺病毒质粒。酶切及PCR法鉴定 ;将其线性化后转染 2 93细胞 ,观察绿色荧光以确定转染结果 ,以Westernblot法检测目的基因表达。结果 凝胶电泳及行酶切鉴定表明同源重组成功 ;PCR产物测序证明确为IκBαM ;以重组腺病毒质粒转染 2 93细胞 ,见绿色荧光 ;感染 2 93细胞得到大量病毒。结论 成功构建了IκBαM重组腺病毒 。
- 刘冰熔黄爱龙肖彧君沈鼎明
- 关键词：NF-ΚBIΚBΑ腺病毒基因治疗
- 重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞炎症因子的异常分泌被引量：5
- 2004年
- 构建携有核因子κB抑制物IκBα的突变体IκBαM的重组腺病毒(AdIκBαM),并感染ECV304血管内皮细胞,采用Westem blot、电泳迁移率变动分析和逆转录-聚合酶链反应等方法研究核因子κB在高浓度葡萄糖刺激的ECV304细胞分泌功能中所起的作用以及阻断其活性对内皮细胞分泌功能的影响。结果发现,高糖能诱导ECV304细胞IκBα的降解和核因子κB的激活,同时上调炎症因子细胞间粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和内皮素1 mRNA表达水平,而感染AdIκBαM的ECV304/IκBαM细胞则能拮抗高糖所致的IκBα降解与核因子κB激活,同时下调这些炎症因子的异常分泌水平。结果提示,核因子κB的激活在高糖所致的内皮细胞分泌功能改变中起中轴作用,抑制核因子κB的活化,有助于改善血管内皮细胞功能。
- 肖彧君李春霖刘冰熔黄爱龙邓华聪
- 关键词：IΚBΑ炎症因子
- 核转录因子NF-κB——肿瘤基因治疗的新焦点被引量：19
- 2001年
- NF κB是一种重要的核转录因子 ,由一个复杂的体系组成。它存在于多种细胞 ,参与多种生理、病理过程的基因调控 ,并在细胞的抗凋亡过程中起着至关重要的作用。NF κB系统由NF κB家族及其抑制物IκB家族共同组成。NF κB的激活是肿瘤细胞抵抗TNF等抗肿瘤药物作用的重要机制。通过抑制IκB的降解来抑制NF κB的激活可以导致肿瘤细胞的大量凋亡。因此 ,通过基因治疗来抑制NF κB的活性 。
- 刘冰熔黄爱龙沈鼎明
- 关键词：转录因子NF-ΚB基因治疗肿瘤
- 人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxAIκBα融合蛋白的制备
- 2002年
- 目的 利用基因重组技术构建人IκBα基因原核表达质粒 ,制备TrxA IκBα融合蛋白 ,以便进一步研究IκBα的生物学功能和制备相应抗体。方法 以重组质粒pGEM T IκBα为模板 ,利用PCR方法扩增出带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的人IκBα基因cDNA ,经相应酶切后插入原核表达载体pET 32a(+)。重组表达质粒pET32a(+) IκBα转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达TrxA IκBα融合蛋白。Westernblot试验鉴定表达蛋白。超声波破菌后采用Ni NTA树脂对TrxA IκBα融合蛋白进行纯化。结果 酶切鉴定证实人IκBα基因cDNA已插入原核表达载体pET 32a(+)。重组表达质粒pET32a(+) IκBα在大肠杆菌BL2 1(DE3)中成功地表达了TrxA IκBα融合蛋白 ,其相对分子质量(Mr)约为 5 6× 10 3 ,表达量约占细菌总蛋白的 2 5 %。Westernblot试验显示TrxA IκBα融合蛋白与兔抗IκBα多克隆抗体呈特异性免疫反应。经Ni NTA树脂纯化后 ,TrxA IκBα融合蛋白的纯度可高达 95 %以上。结论 人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxA IκBα融合蛋白的制备为进一步研究IκBα的生物学功能和制备相应抗体奠定了物质基础。
- 陈海锋程远黄爱龙刘冰榕
- 关键词：基因重组原核表达抗体制备免疫检测
- 应用巢式PCR法克隆N端部分缺失的IκBα基因
- 2001年
- 目的 克隆中国人N端部分缺失的IκBα基因 ,为进一步应用其进行抗肿瘤基因治疗研究打下基础。方法 从中国人外周血中分离单核细胞 ,采用多聚赖氨酸贴壁刺激 0 .5h后提取总RNA。应用逆转录PCR法 ,以自行设计的引物扩增全序IκBα基因 ,应用巢式PCR法扩增N端部分缺失的IκBα基因 ,用TA克隆技术将目的基因连接到pGEM T质粒载体中 ,进行测序并与已知IκBα序列进行同源性分析。结果 测序结果表明我们所克隆的目的基因 ,其基因序列与GenBank中人IκBα基因序列仅有 5个碱基不同但所编码氨基酸仅 1个发生改变。结论 已成功克隆了中国人N端部分缺失的IκBα基因 ,为进一步应用N端部分缺失的IκBα基因进行抗肿瘤基因治疗研究打下了基础。
- 刘冰熔黄爱龙沈鼎明
- 关键词：巢式PCR基因克隆肿瘤基因治疗
- IκBαM重组腺病毒的构建被引量：3
- 2003年
- 刘冰熔黄爱龙沈鼎明肖彧君
- 关键词：基因克隆重组穿梭质粒聚合酶链反应
- NF-κB在高浓度葡萄糖、TNF-α、IL-1β介导的血管内皮细胞损害中的作用被引量：3
- 2005年
- 目的研究核转录因子κB(NFκB)在高糖、肿瘤坏死因子(TNFα)、白细胞介素1β(IL1β)诱导ECV304血管内皮细胞损害中的作用。方法以构建含NFκB抑制物IκBα突变体(IκBαM)的重组腺病毒感染ECV304细胞,用Western印迹、凝胶电泳迁移率实验(EMSA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)等方法研究NFκB在高糖、TNFα、IL1β介导血管内皮细胞损害中的作用。结果TNFα可诱导ECV304细胞的IκBα降解和NFκB的激活(P<0.01),而对ECV304/IκBαM细胞则无此作用;高糖可导致ECV304细胞NFκB的激活(P<0.05),而对ECV304/IκBαM细胞则无此作用;单独使用高糖、TNFα、IL1β导致ECV304细胞活力的降低(均P<0.01),而ECV304/IκBαM细胞可抵抗这些因素对细胞的损害(均P<0.05)。结论高糖、TNFα、IL1β可致血管内皮细胞活力降低,IκBα能有效抑制上述有害因素导致的ECV304细胞NFκB的过度活化,抵抗内皮细胞的损害。抑制NFκB活性可能有助于保护血管内皮细胞的功能。
- 肖彧君黄爱龙李春霖邓华聪向明确唐霓
- 关键词：NF-ΚB葡萄糖细胞损害血管内皮细胞白细胞介素1Β
