宁波出入境检验检疫局科研基金项目(K07-2011)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
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- 逆转录环介导等温扩增技术检测菜豆荚斑驳病毒被引量：3
- 2013年
- 菜豆荚斑驳病毒（Beanpodmottlevirus，BPMV）可危害大豆、菜豆等豆科植物，造成品质和产量下降。目前，检测BPMV主要采用DAS-ELISA技术及基于RT．PCR的分子生物学方法。近年来开发的环介导等温扩增（100p—mediatedisothermalamplifi—cation，LAMP）是一种新的核酸扩增技术，该技术依赖于能够识别靶序列上6个特异区域的引物和1个具有链置换特性的DNA聚合酶（BstDNApolymer-ase），在等温条件下高效扩增靶基因，
- 郭立新段维军徐亚飞刘永丰张吉红
- 关键词：菜豆荚斑驳病毒环介导等温扩增分子生物学方法ELISA技术核酸扩增技术DNA聚合酶
- 应用逆转录环介导等温扩增技术检测大豆种子中烟草环斑病毒被引量：3
- 2012年
- 根据烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白基因序列设计并合成了1组RT-LAMP引物,利用实时浊度仪监测反应过程,初步建立了烟草环斑病毒的RT-LAMP检测方法,并进行了特异性与灵敏度检测。结果显示,RT-LAMP灵敏度与普通RT-PCR法相当,但检测时间明显缩短,1 h即可完成反应。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可通过裸眼观察荧光的有无来判断是否有扩增。对大豆种子中携带的烟草环斑病毒进行了RT-LAMP检测,裸眼判定与仪器监测结果一致。结果证明所建立的TRSV RT-LAMP方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,不需复杂仪器设备,适合于TRSV的现场快速检测。
- 郭立新陈先锋徐亚飞邱志君朱迪琦段维军
- 关键词：烟草环斑病毒
- 逆转录环介导等温扩增技术检测南方菜豆花叶病毒被引量：10
- 2014年
- 根据南方菜豆花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了4组RT-LAMP引物,通过引物筛选试验,确定SB1组引物为最佳引物,并进行了引物特异性与灵敏度检测试验,最终建立了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测方法。灵敏度检测试验显示,RT-LAMP方法比普通RT-PCR法灵敏度高10倍,而检测时间明显缩短,整个反应过程只需40 min。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可裸眼观察颜色变化来判定结果。本研究所建立的SBMV RT-LAMP方法具有快速、稳定、灵敏、特异、操作简单的特点,适合于SBMV的现场快速检测。
- 郭立新段维军徐亚飞徐颖张永江张吉红
- 关键词：南方菜豆花叶病毒
- 逆转录环介导等温扩增技术检测南芥菜花叶病毒被引量：2
- 2013年
- 根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法。同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断。特异性和灵敏度试验结果显示,RT-LAMP方法快速、特异且灵敏,其灵敏度与普通RT-PCR法一致。
- 郭立新谭毅刘永丰邓丛良段维军许邹亮
- 关键词：南芥菜花叶病毒
- 啤酒花潜隐类病毒研究进展被引量：2
- 2012年
- 啤酒花潜隐类病毒在啤酒花上的感染较普遍,且一般不产生明显症状,给生产带来一定损失。对于该类病毒病害,较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展和培育与栽培无类病毒苗。较为系统地综述了国内外啤酒花潜隐类病毒的分布与危害、生物学特性、基因组结构与序列分析、检测方法及防治与控制等方面的研究进展。
- 郭立新徐颖蔡曹盛
- 关键词：基因组结构
- 啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测被引量：6
- 2012年
- 根据啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)各分离物基因序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对HpLVd的实时荧光RT-PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了HpLVd的实时荧光RT-PCR最佳反应条件:Mg2+终浓度为5.5 mmol/L,引物终浓度为0.7μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L。灵敏度对比试验结果显示,实时荧光RT-PCR的灵敏度较普通RT-PCR通过琼脂糖凝胶电泳高10倍,在25μL反应体系中,总RNA含量达到20 pg就能通过实时荧光RT-PCR检测出来。此方法也能成功检测田间样品上的啤酒花潜隐类病毒。
- 郭立新段维军张祥林邓丛良闻伟刚李世访
- 关键词：实时荧光RT-PCRTAQMAN-MGB探针
