国家自然科学基金(30972225)
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
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- 相关机构：吉林大学吉林省畜牧兽医科学研究院更多>>
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- 奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达
- 2011年
- 原核表达MadCam-1基因、纯化MadCam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据MadCam-1的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术扩增MadCam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1,转化入E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,以纯化后的融合蛋白为抗原,免疫家兔,获得抗血清。结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为50ku的蛋白质。纯化的蛋白质免疫家兔后,经ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32000。因此,成功获得了奶牛MadCam-1多克隆抗体,为进一步研究奶牛黏附分子MadCam-1的功能奠定了基础。
- 刘文博陈媛媛孙玲李德朋付云贺张乃生郭梦尧杨正涛
- 关键词：MADCAM-1克隆纯化多克隆抗体
- 奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA核酸疫苗的构建及免疫原性试验被引量：8
- 2012年
- 扩增了奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌ClfA基因,并将其克隆至真核表达载体pVAX1启动子下游,构建成真核表达质粒,通过体外细胞转染试验,运用IFA方法进行抗原性初步确认,所构建的重组DNA疫苗质粒能在真核细胞中表达并被金黄色葡萄球菌抗体特异性识别。为进一步评价侯选疫苗的免疫原性,进行了BALB/c小鼠免疫试验,分别检测免疫后的ELISA抗体水平、Th1/Th2类细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖试验。结果表明,构建的核酸疫苗pVAX1-ClfA免疫小鼠后,ELISA抗体水平提高,Th1/Th2类细胞因子含量提升,T细胞增殖能力增强。
- 尹荣兰王浩然张艳晶杨正涛刘辉李琳张乃生
- 关键词：金黄色葡萄球菌DNA疫苗免疫原性
- 牛整合素β7亚基片段的表达及多抗制备
- 2011年
- 为制备牛整合素β7亚基片段的多克隆抗体,根据GenBank中牛整合素β7基因序列,合成了β7亚基288 bp(140-427 bp)的cDNA片段,通过DNA重组法构建表达质粒,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为15 ku的β7蛋白。超声破碎细菌后,Ni-NTA树脂进行纯化,免疫兔子获得多抗。间接ELISA检测多抗效价为1∶32000,为进一步研究牛整合素α4β7的功能奠定基础。
- 王海霞杨正涛陈媛媛刘文博张雯张乃生
- 关键词：原核表达多抗
- 奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达
- 原核表达MadCam-1基因、纯化MadCam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据MadCam-1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增MadCam-1基因片段插入到原核表达载体...
- 刘文博陈媛媛李德朋付云贺张乃生郭梦尧杨正涛
- 关键词：MADCAM-1克隆纯化多克隆抗体
- 文献传递
- 牛整合素α4亚基片段的原核表达及抗体制备
- 2011年
- 参照GenBank中牛整合素α4基因序列,合成了牛整合素α4亚基753bp(192～944nt)的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化入BL21,IPTG诱导表达。表达产物经Western blot鉴定,结果表明成功表达了相对分子质量约为30 000的α4蛋白。超声破碎细菌后,目的蛋白主要以包涵体形式存在。蛋白纯化后进一步复性,免疫大鼠获得多抗,间接ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32 000。这为进一步研究牛整合素α4β7的功能奠定了基础。
- 王海霞杨正涛陈媛媛刘文博张乃生
- 关键词：原核表达多克隆抗体
