陕西省科学技术研究发展计划项目(2010K01-171)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：郭文怡倪旭东周学凯李飞张荣庆更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成人外周血平滑肌祖细胞的体外培养被引量：2
- 2011年
- 背景:外周血平滑肌祖细胞具有向平滑肌细胞分化的能力。目的:探索体外分离培养成人外周血平滑肌祖细胞的方法及其生长分化特性。方法:采用密度梯度离心法分离获得成人外周血单个核细胞,培养12d后,应用流式细胞仪鉴定分析平滑肌祖细胞并分选纯化,继续培养诱导分化。采用倒置显微镜观察平滑肌祖细胞的形态变化,免疫荧光染色法观察其α-肌动蛋白的表达,同时应用Westernblot法检测调宁蛋白、平滑肌肌球蛋白重链的表达情况。此外,观察平滑肌祖细胞的生长特性,绘制生长曲线。结果与结论:成人外周血单个核细胞诱导培养4d时开始出现细胞集落,12d时细胞呈明显梭形。流式细胞仪分析显示,CD14和CD105双阳性的平滑肌祖细胞占贴壁细胞的(71.8±7.2)%。分选纯化的平滑肌祖细胞培养到28d呈旋涡状生长。间接免疫荧光染色显示,α-肌动蛋白表达呈阳性。Westernblot检测显示,调宁蛋白和平滑肌肌球蛋白重链分别于14,21d开始表达,并逐渐增加。生长曲线表明,细胞生长至第6天进入对数生长期,第12天后进入平台期。提示通过对外周血单个核细胞的诱导培养,可以获得大量的平滑肌祖细胞。它能稳定增殖,并可进一步分化为平滑肌细胞。
- 周学凯倪旭东李飞张荣庆郭文怡
- 关键词：平滑肌祖细胞CD14CD105诱导分化种子细胞
- 高糖对成人外周血平滑肌祖细胞功能的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察不同浓度葡萄糖对体外培养成人外周血平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cells,SPCs)增殖、迁移和黏附能力的影响。方法采用密度梯度离心法从健康成人外周血获取单个核细胞,培养12 d后,采用流式细胞仪对诱导扩增的SPCs进行分析鉴定并分选纯化。间接免疫荧光染色法观察SPCs培养到第28天后人平滑肌细胞特异性肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。收集培养第12天的SPCs,随机(补充具体的随机方法?)分为5组并给予不同浓度葡萄糖干预:对照组(5.5 mmol/L),11 mmol/L组,22 mmol/L组,44 mmol/L组和渗透压对照组(5.5 mmol/L葡萄糖加38 mmol/L甘露醇)。分别用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法,Transwell小室迁移实验以及黏附能力测定实验检测各组干预6 d后SPCs增殖、迁移和黏附能力的变化。此外,培养SPCs 8 d,期间用22 mmol/L葡萄糖分别干预0、2、4、8 d,观察各组细胞增殖、迁移和黏附能力的变化。结果与对照组相比,高糖各组均能明显促进外周血SPCs的增殖、迁移和黏附能力,其中22 mmol/L葡萄糖组的影响最为显著,44 mmol/L葡萄糖组的促进作用有所下降。用22 mmol/L葡萄糖分别干预SPCs 0、2、4、8 d,其增殖、迁移和黏附能力随着作用时间延长而增强,以干预8 d组最显著。结论高糖能在一定范围内增强外周血SPCs的增殖、迁移、黏附能力,随着浓度增加和时间延长,作用更明显。推测长期高血糖通过促进SPCs的功能参与受损血管过度修复,引起部分心血管疾病的发生发展。
- 周学凯倪旭东李飞张荣庆郭文怡
- 关键词：平滑肌祖细胞葡萄糖增殖迁移
