国家自然科学基金(31130019)
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Notch信号调控巨噬细胞激活分子机制的研究进展被引量：6
- 2014年
- 巨噬细胞是机体抗感染免疫的主要效应细胞,是一类具有异质性的细胞亚群。因其解剖位置和功能表型上的差异,巨噬细胞可分为两类:组织定居巨噬细胞和炎性巨噬细胞。其中,炎性巨噬细胞的产生是巨噬细胞激活的表现形式,也是抵抗病原体入侵和重构组织稳态的一种免疫应答方式。巨噬细胞主要存在两种激活方式:经典激活和替代激活,激活后的巨噬细胞分别行使特定的功能。Notch信号通路可调控体内多种免疫细胞发育和功能,并通过多种分子机制调控巨噬细胞的激活。本文拟从巨噬细胞的类型、激活方式和Notch调控巨噬细胞激活的分子机制方面进行综述。
- 高春辰秦鸿雁韩骅
- 关键词：巨噬细胞NOTCHM2型巨噬细胞
- LIM结构域蛋白FHL1C与GNB2不存在相互作用
- 2015年
- 目的通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制。方法分别构建融合质粒p CMVGAL4-DBD-FHL1C和p CMV-VP16-GNB2,并将其共转染He La细胞,通过哺乳动物双杂交实验验证两者在细胞内是否具有相互作用;构建带Flag标签的GNB2融合蛋白的重组载体p CMV-Flag-GNB2,酶切鉴定正确后,与带myc标签的FHL1C融合蛋白的重组真核表达载体p CMV-myc-FHL1C共转染He La细胞,利用免疫共沉淀技术检测GNB2与FHL1C之间是否存在生理上的相互作用。结果哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验均显示:FHL1C与GNB2之间不存在生理上的相互作用。结论成功构建了实验所需的GNB2的融合蛋白真核表达重组载体,利用哺乳动物双杂交实验及免疫共沉淀技术证实FHL1C与GNB2之间不存在相互作用。
- 刘娟赵俊龙王媛媛韩骅秦鸿雁张丙芳
- 关键词：LIM结构域免疫共沉淀
- 小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立被引量：12
- 2013年
- 目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Arg1、Ym1、MMR等的表达情况。结果形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态;流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Arg1;实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Arg1、Ym1等标志因子。结论建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系。
- 任凯夕赵诣林金超韩骅
- 关键词：巨噬细胞体外培养
