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大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性被引量：15: 2007年; 深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pBI121,并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘,通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中,转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％(质量分数)NaCl的培养基比较,转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量,结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照(转化pBI121载体)植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见,PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的．; 刘昀李冉辉郑易之蔡文斌; 关键词：耐盐基因转基因烟草盐胁迫

一种基于荧光衍生法的色氨酸自动分析的研究被引量：1: 2007年; 通过分析色氨酸衍生为去甲哈尔曼的反应中三氯乙酸浓度和反应试剂甲醛、三氯化铁的浓度及保温时间、保温温度的变化对衍生物荧光值的影响,找到了能得到较高荧光测定值而又对操作条件变动不敏感的该参数变动范围(平台区),为色氨酸自动化分析仪器的设计提供了重要的可行性依据。; 牛艳山马永健孙慧斌; 关键词：三氯乙酸甲醛三氯化铁反应温度

大豆PM2蛋白11氨基酸结构域的耐盐功能鉴定被引量：1: 2006年; 大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenes is abundant group3)蛋白.以含大豆PM2基因的重组载体为模板,PCR法扩增出可编码6拷贝11-氨基酸重复序列的基因片段PM2D.构建pET28a/PM2D重组载体,并转化大肠杆菌得到重组菌BL21/PM2D.SDS-PAGE电泳结果表明,BL21/PM2D重组菌可被诱导表达相对分子质量约为15000的蛋白条带,与目的蛋白的理论相对分子质量(13600)接近.利用DNASIS软件分析,PM2D缺失短肽的亲水指数为1.12.将重组菌BL21/PM2和BL21/PM2D分别涂布在含500mmol/LNaCl和1200mmol/L山梨糖的固体培养基上,计算重组菌的存活率.结果显示,两种重组菌在含500mmol/LNaCl培养基上的存活率分别为30.8%和26.0%,均高于对照菌(BL21/pET28a)的存活率;在含1200mmol/L山梨糖培养基上的存活率分别为59.7%和59.3%,与对照BL21/pET28a菌株的存活率相比无明显差异.PM2D短肽长度为PM2蛋白全长的1/4,但BL21/PM2D重组菌的耐盐能力为BL21/PM2重组菌的80%左右.表明11-氨基酸重复序列区是PM2蛋白序列的一个耐盐结构域.; 叶展辉郑易之刘昀; 关键词：结构域盐胁迫大肠杆菌大豆

大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性被引量：29: 2006年; 将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体的对照菌生长迟滞期约为50 h,含Em基因的重组菌生长迟滞期为32 h,表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性.在此基础上,构建了含Em基因的真核表达载体pB I-Em.再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草.PCR及RT-PCR结果显示,大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中,并能正常转录.转化率为53%.转Em基因烟草植株在含有质量分数1.5%NaC l的培养基中生长状况好于对照植株,叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片.结果表明,大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性.; 蔡丹郑易之兰英; 关键词：大豆大肠杆菌转基因烟草

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深圳市科技计划项目(200441)