解放军总医院科技创新苗圃基金(09KMM32)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：黎力石炳毅窦立萍郑德华洪宝发更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院解放军第309医院更多>>
- 发文基金：解放军总医院科技创新苗圃基金北京市自然科学基金“十一五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 吞噬PUVA处理的同种异基因细胞的树突细胞对抗原特异性CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节T细胞的体外诱导作用被引量：6
- 2010年
- 目的探讨吞噬体外光化学法(PUVA)处理的同种异基因淋巴细胞的树突细胞(DC)对抗原特异性CD4+ CD25 +Foxp3+调节性T细胞的体外诱导作用。方法分离LEW大鼠骨髓细胞,经大鼠重组IL-4和GM-CSF共同诱导培养制备骨髓来源的LEW大鼠DC。分离DA大鼠脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的DA大鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)并用流式细胞仪检测其凋亡率。在体外将DA大鼠的PUVA-SP或SP与LEW大鼠骨髓来源的DC共同培养,得到PUVA-SPDC和SPDC,以Luminex液相芯片法检测PUVA-SPDC和SPDC培养上清中IL-10、IL-12的含量。以CFSE标记PUVA-SP,流式细胞仪检测LEW大鼠DC对DA大鼠PUVA-SP的摄取情况。将LEW大鼠CD4+25-T细胞与PUVA-SPDC或SPDC混合培养5d,流式细胞仪检测诱导形成的CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞,同时分离培养体系中的CD4+ CD25+ T细胞,通过混合淋巴细胞反应(MLR)检测PUVA-SPDC诱生的CD4+ CD25+ T细胞对LEW大鼠CD4+ CD25- T细胞(效应性T细胞)体外增殖的抑制作用。结果DA大鼠脾淋巴细胞经PUVA处理后细胞凋亡率为81.93%。LEW大鼠DC可有效摄取PUVA-SP,吞噬率达70.72%。SPDC培养上清中IL-12和IL-10浓度分别为700±18、39±3pg/ml;与SPDC相比,PUVA-SPDC培养上清中的IL-12水平(148±9pg/ml)明显降低(P<0.01),而IL-10水平(75±4pg/ml)则明显增加(P<0.01)。与PUVA-SPDC混合培养后,LEW大鼠CD4+T细胞中CD4+ CD25+ T细胞的比例为15.4%,其中Foxp3阳性率为44.1%;而与SPDC混合培养后LEW大鼠CD4+T细胞中CD4+ CD25+ T细胞的比例只有6.5%,其中Foxp3阳性率仅为8.2%。PUVA-SPDC诱生的CD4+ CD25+ T细胞对体外增殖反应有明显的抗原特异性抑制作用。结论PUVA-SPDC在体外能够有效诱生抗原特异性CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞。
- 郑德华陆宏石炳毅杜国盛邹一平魏玉香窦立萍史迎昌黎力洪宝发
- 关键词：树突细胞PUVA疗法转录因子FOXP3
- 负向调节树突状细胞对心脏移植大鼠调节性T细胞的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨受者树突状细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供者脾淋巴细胞共培养,对心脏移植受者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及移植心存活时间的影响。方法:以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,SD大鼠为无关供者,建立大鼠腹部异位心脏移植模型。分离正常的供者脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供者脾淋巴细胞(PU-VA-SP)。在体外将DA大鼠PUVA-SP或SP与受者骨髓来源的DC共同培养,收集经上述处理后受者DC,流式细胞术(FCM)检测其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达状况。根据受者术前静脉输注的成分将实验动物随机分为3组:①Control组:单纯输注PBS,n=7;②SPDC组:输注加载供者SP的受者大鼠DC,n=8;③PUVA-SPDC组:输注加载PUVA处理的供者SP的受者大鼠DC,n=8。移植术前7d,经外周静脉给受者输注与PUVA-SP共培养后的DC(PUVA-SPDC组)、正常受者DC(DC组)或只输注PBS(Control组),移植术后观察受者移植物的存活时间,检测受者外周血中CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞的比例及其Foxp3表达状况。过继转移PUVA-SPDC组受者大鼠的T细胞后,检测正常LEW大鼠对供者抗原或无关抗原的DTH反应。结果:受者DC与供者未经处理的脾淋巴细胞(SP)混合培养后,其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达分别为16.6%±0.72%、36.5%±0.87%及65.6%±1.45%,明显高于未处理DC组(3.53%±0.27%、13.0%±0.57%及27.7%±1.23%)(P<0.01);而受者DC与PUVA处理过的供者脾淋巴细胞(PUVA-SP)混合培养后,其表面分子的表达仍保持较低的水平,CD80、CD86以及OX6的表达分别为3.9%±0.12%、13.4%±0.59%及28.0%±1.73%,与未经任何处理的受者DC无统计学差异(P>0.05)。移植术后,PUVA-SPDC组受者,外周血CD4+CD25+T、CD4+CD25highT细胞占CD4+T的比例分别是18.97%和3.81%,明显高于输注DC组(4.40%和0.81%)和Control组(3.11%和0.09%)的大鼠(P<0.01)。PUVA-SPDC组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞中Foxp3表达率为29%±1.73%,CD4+CD25highT细胞中Foxp3阳性率�
- 郑德华石炳毅邹一平蔡明钱叶勇洪宝发窦立萍黎力
- 关键词：树突状细胞PUVA心脏移植调节性T细胞
