国家自然科学基金(81101599)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
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- 优化人胃癌细胞SGC-7901细胞骨架图像的激光共聚焦显微技术
- 2015年
- 目的利用激光共聚焦技术,对比三种固定液不同固定时间对胃癌细胞系SGC-7901的细胞骨架荧光染色的影响。方法选择三种常用固定液:2.5%戊二醛,4%多聚甲醛及95%乙醇,对接种24h后的SGC-7901细胞分别进行10min,20min及30min等不同时间点固定,5%BSA(含0.2%Triton X-100)封闭透膜1h,荧光抗体FITC标记的鬼笔环肽37℃避光孵育2h,DAPI室温染核15min,激光共聚焦扫描显微镜扫描,对比观察其染色结果。结果三种固定液及不同固定时间对SGC-7901细胞骨架染色效果不尽相同。95%乙醇固定后微丝之间区分不明,排列混乱,无网状结构,染色效果与固定时长无关。2.5%戊二醛固定后微丝结构完整,但层次不清晰。4%多聚甲醛固定后微丝结构完整,层次清晰,固定20min及30min微丝荧光染色清晰。结论 4%多聚甲醛固定20min对细胞骨架固定效果最好,荧光染色标记结果为后续细胞骨架功能研究优化实验方法并提供理论依据。
- 高建郑倩倩张四洋
- 关键词：固定液细胞骨架胃癌激光共聚焦
- Cameleon测钙系统在H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用被引量：2
- 2013年
- 观察Cameleon测钙系统在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),并探讨[Ca2+]i与细胞凋亡和Pyk2磷酸化的关系。采用Ca2+指示器Cameleon YC3.6转染A549细胞,24 h后用50 mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚集显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Western blot检测H2O2刺激的细胞中Pyk2-tyr402磷酸化水平。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果发现,在H2O2作用下,A549细胞胞浆内游离[Ca2+]i迅速升高,同时Pyk2-tyr402磷酸化水平显著升高(P<0.05),凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。因此,H2O2促进A549细胞内Ca2+释放,可能通过活化Pyk2诱导细胞凋亡。
- 张四洋于淼高建邱雪杉崔泽实
- 关键词：H2O2CA2+CAMELEONPYK2细胞凋亡
- Glypican-3过表达对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响
- 2014年
- 目的探讨glypican-3对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用glypican-3 cDNA瞬时转染A549细胞,Western blot方法检测转染前后glypican-3在A549细胞中的表达水平,分别采用MTT、流式和Transwell小室研究glypican-3 cDNA对A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用。结果转染后glypican-3在A549细胞中表达上调,细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。结论 A549细胞中glypican-3过表达促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,可能对A549细胞的生长和存活具有重要作用。
- 张四洋朱佳莲崔泽实
- 关键词：细胞运动转染
- Ca^(2+)荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3测定H_2O_2刺激的A549细胞中Ca^(2+)浓度变化被引量：2
- 2014年
- 目的:本研究旨在观察Ca2+荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3在H2O2刺激的A549细胞中的应用,实时测定细胞质Ca2+浓度([Ca2+]i),并比较两种Ca2+探针在荧光曲线及[Ca2+]i测定值等方面的差异。方法:采用Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6转染A549细胞,24h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Ca2+荧光染料探针fluo-3负载细胞,1h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果:采用Cameleon探针转染的细胞中,反映[Ca2+]i变化的R值曲线迅速升高后逐渐降至刺激前水平,通过公式计算发现[Ca2+]i变化范围是33.1-596.1 nmol/L。采用fluo-3探针负载的细胞中,反映[Ca2+]i变化的荧光强度F值曲线逐渐升高至稳定,通过公式计算得到[Ca2+]i变化范围是131.8-695.6 nmol/L。同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。结论:Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6和荧光染料探针fluo-3均检测到H2O2诱导的细胞内[Ca2+]i变化,Cameleon YC3.6可能更灵敏地反映快速变化的钙信号。
- 张四洋周末高建于淼邱雪杉崔泽实
- 关键词：CAMELEONH2O2CA2+
- 应用Ca^(2+)荧光探针fluo-3和fluo-4测定H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的[Ca^(2+)]_i变化被引量：7
- 2014年
- 背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤,Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平,有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),探讨[Ca2+]i与细胞凋亡的关系,并比较两种Ca2+探针在荧光强度及[Ca2+]i测定值方面的差异。方法采用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4负载细胞,1 h后用不同浓度的H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果在相同的探针浓度、负载时间和相同的图像采集参数的条件下,选定细胞内fluo-4平均荧光强度高于fluo-3。50 mM H2O2刺激后,A549细胞胞浆内[Ca2+]i迅速升高,通过公式计算发现采用fluo-3探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是112.2 nM-1,069.6 nM,采用fluo-4探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是7.6nM-505.4 nM。同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比明显增加(P<0.01)。结论 H2O2促进A549细胞内Ca2+释放,诱导细胞凋亡。Ca2+探针fluo-4可能更适合于监测含量较低的细胞中[Ca2+]i变化。
- 张四洋李春艳高建邱雪杉崔泽实
- 关键词：CA^2+H2O2细胞凋亡
- SOCS3和Pyk2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨SOCS3和Pyk2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其相互作用。方法分别采用免疫组织化学和免疫荧光染色方法检测SOCS3和Pyk2在100例NSCLC组织、人支气管上皮细胞HBE和6个NSCLC细胞系中的表达。采用甲基化特异性PCR方法检测A549细胞中SOCS3基因甲基化状态。A549细胞经蛋白酶体抑制剂β-1actacystin预处理，再加入去甲基化试剂5-aza-2’-脱氧胞苷（5-aza），或转染SOCS3突变质粒，检测Pvk2蛋白、Pyk2Tyr402和ERK1／2磷酸化水平。采用逆转录（RT）-PCR检测Pyk2mRNA水平。采用Transwell小室测定细胞迁移情况。结果100例NSCLC组织中，43例（43．0％）SOCS3阳性表达，65例（65．0％）Pyk2高表达。在NSCLC组织和细胞系中均发现SOCS3和Pyk2表达负相关。5-aza能恢复A549细胞中SOCS3的表达。SOCS3依赖于其SH2和KIR功能区与Pyk2相互作用，从而降低Pyk2蛋白、Pvk2Tyr402和ERKl／2磷酸化水平，抑制A549细胞迁移。结论NSCLC中，SOCS3可能通过SOCS—box功能区介导的蛋白酶体途径促使Pvk2蛋白降解．阻断A549细胞迁移。
- 张四洋邱雪杉
- 关键词：细胞因子信号转导蛋白抑制因子蛋白酪氨酸激酶类
