河北省科技计划项目(052761010-28)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：苏安英唐军民单铁英更多>>
- 相关机构：河北工程大学北京大学更多>>
- 发文基金：河北省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 电穿孔法转染人树突状细胞条件的优化被引量：1
- 2008年
- 目的:通过电穿孔法将带有增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent proteinEGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP(IRES2 internal ribosome entrysite 2内部核糖体进入位点2)质粒导入未成熟树突状细胞(Immature Dendritic Cell,i mDC),探讨不同电穿孔条件对i mDC电转染率和存活率的影响。方法:通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养诱导其成为i mDC。在大肠杆菌中扩增pIRES2-EGFP质粒,选择不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、DNA剂量等。应用电穿孔仪将pIRES2-EGFP质粒导入未成熟树突状细胞,荧光显微镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。0.4%锥虫蓝(trypan blue)染色,计数电转染后细胞存活率。结果:当i mDC浓度为5×106/mL与6μg DNA质粒混合,设定电转染仪电压为300 V、脉冲时间为500μs时,其电转染率到最高,细胞存活率最高,转染后24 h明显表达,48 h后表达最强。结论:在适当的电压、脉冲时间下,选择适当的细胞浓度、DNA剂量,在转染后的一定时间范围内,电穿孔法转染i mDC可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少。电转染提供了外源基因转染i mDC的可行技术。
- 单铁英苏安英唐军民
- 关键词：电穿孔转染绿色荧光蛋白树突状细胞
- 人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞的体外肿瘤杀伤实验被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨人肝癌细胞总RNA电转染人树突状细胞(Dendritic Cells,DCs)后诱导特异性效应T细胞及其效应T细胞抗肝癌的特异性。方法:通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养诱导其成为未成熟树突状细胞(Immature Dendritic Cell,i mDC)和成熟树突状细胞(Mature Den-dritic Cell,mDC)。培养肝癌细胞,Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA。通过电转染法将人肝癌细胞总RNA导入i mDC内;观测电转染的转染率;采用免疫细胞化学检测电转染前后的i mDC形态及其表面标志;通过混合淋巴细胞实验,获取mDC激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞的抗肝癌特异性。结果:电转染方法可将人肝癌细胞总RNA导入i mDC。电转染前后i mDC分子表达无显著差异,mDC的分子表达与i mDC相比发生了变化。转染了人肝癌细胞总RNA的mDC可特异的激活T细胞为效应T细胞。效应T细胞可特异性的杀伤人肝癌细胞,而对不相关的MG-63细胞无特异性的杀伤作用。结论:电转染不影响i mDC的形态和原有的蛋白表达;转染了人肝癌细胞总RNA的mDC可特异的激活T细胞为效应T细胞;效应T细胞具有抗人肝癌细胞的特异性。
- 苏安英单铁英唐军民
- 关键词：树突状细胞肝癌细胞总RNA电转染
