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山东省自然科学基金(Y2007C142)
作品数:
2
被引量:5
H指数:1
相关作者:
宋文刚
王家富
李伟
徐英萍
葛丽
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相关机构:
泰山医学院
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发文基金:
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泰山医学院
作者
2篇
宋文刚
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魏丽华
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杜辉
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徐英萍
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李伟
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王家富
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1篇
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1篇
2009
1篇
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小鼠子宫蜕膜基质细胞的分离培养
被引量:4
2008年
目的:蜕膜组织的细胞成分相当复杂,其中蜕膜基质细胞约占全部蜕膜细胞数的75%,其能分泌多种细胞因子,既参与蜕膜营养供应作用又能调节蜕膜局部的免疫微环境。实验拟建立良好的小鼠子宫蜕膜基质细胞培养方法,为进一步建立蜕膜细胞共培养系统将为研究病理性妊娠打下良好的基础。方法:实验于2006—09/2008-01在泰山医学院实验动物中心,SPF级实验室完成。①实验材料:8~10周龄C57BL/6雌性小鼠,由北京维通力化实验动物技术有限公司提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:选用孕龄6~8d的C57BL/6小鼠蜕膜组织进行体外培养,采用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶混合消化,进行全组分蜕膜细胞培养,采用原代细胞过夜换液方法清除红细胞、淋巴细胞和不贴壁的细胞成分,利用传3代方法对蜕膜基质细胞进行分离提纯。纯化后,观察蜕膜基质细胞的生长变化规律,制作细胞爬片,用催乳素免疫组织化学试剂盒检测培养细胞的成分。结果:①小鼠蜕膜基质细胞在接种24h后大部分已贴壁,贴壁生长的细胞成纤维母细胞状,一般培养5~7d后细胞融合成单层。原代培养的蜕膜基质细胞在含10%胎牛血清的培养液中可增生数周,四五天传代1次,传代后的细胞形态无明显变化,而传代培养极性渐不明显。②免疫组织化学显示,体外培养传代后95%阳性细胞为蜕膜基质细胞,细胞大小形状基本均一,染色特点为胞质内可见细小的棕色颗粒,且越近胞核染色越深。结论:采用复合酶消化,换液传代方法提纯蜕膜组织,方法简单、经济实用,并可获得较高纯度的蜕膜基质细胞。
徐英萍
王家富
李伟
宋文刚
关键词:
蜕膜基质细胞
体外培养
免疫组织化学
围着床期小鼠卵巢黄体生成素受体和血管内皮生长因子表达的免疫组织化学研究
被引量:1
2009年
目的探讨黄体生成素受体(LHR)和血管内皮生长因子(VEGF)在围着床期小鼠卵巢中的生物学作用。方法应用免疫组织化学SABC法和图像分析,检测LHR与VEGF在昆明小鼠(n=28)动情期、孕1d、孕4d和孕6d卵巢中的分布状况和变化规律。结果LHR与VEGF免疫阳性细胞具有相似的分布和变化规律。在动情期,较大的卵泡周围的基质细胞呈强阳性着色,与其他组相比,差异显著(P<0.05)。随着妊娠的继续,颗粒黄体细胞的着色逐渐增强,在孕6d时表达最强。在动情期和孕1d,部分血管内皮和血细胞分别呈VEGF和LHR强阳性着色。从孕1d开始,卵泡膜细胞呈LHR阳性着色。结论LHR和VEGF的表达与围着床期小鼠卵巢中卵泡的发育、排卵和黄体形成过程密切相关。
石运芝
魏丽华
葛丽
杜辉
宋文刚
关键词:
围着床期
卵巢
免疫组织化学
小鼠
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