国家自然科学基金(31171820)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王锡锋刘艳王亚娇任堂雨金文更多>>
- 相关机构：中国农业科学院植物保护研究所福建农林大学北京市植物保护站更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 小麦矮缩病毒NASH快速检测方法的建立及应用被引量：4
- 2015年
- 以非放射性物质地高辛为标记物,采用PCR法制备了特异性强、灵敏度高的DNA探针。通过优化反应体系,建立了小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)的核酸斑点杂交(nucleic acid spot hybridization,NASH)快速检测技术体系。该方法诊断准确率高,操作简单,周期短,整个检测过程仅需5h左右。利用建立的NASH技术开展WDV流行学调查,发现近年来WDV在我国陕西韩城、山西太原和河北石家庄等地区点片发生,没有大面积暴发成灾。
- 金文张金良刘艳王锡锋
- 关键词：地高辛
- LNA探针实时荧光定量PCR检测小麦矮缩病毒体系的建立被引量：1
- 2016年
- 本研究通过对多个小麦矮缩病毒（Wheat dwarf virus,WDV）小麦分离物进行序列分析,在编码Rep蛋白N端的基因保守区域设计一对特异性引物和一条长度为19 bp的TaqMan LNA探针,经过探针和引物浓度的系列优化,建立了WDV田间样品LNA探针实时荧光定量PCR检测方法,确定最优反应条件下的引物和探针终浓度分别为0.5μmol/L和0.3μmol/L。该方法建立的标准曲线斜率及相关系数分别为-3.424 3和0.997 3,扩增效率为96.0%,重复性试验组内变异系数为0.11%-1.34%,组间变异系数为0.44%-1.21%,最低检测限为55 copies/μL,其灵敏度是普通PCR的100倍以上。与普通TaqMan探针荧光定量PCR相比,该方法所用探针长度大大缩短,减少了探针间形成二级结构的机会,探针设计更加简单、方便。该方法适用于田间样品的早期监测,为病害流行调查提供了高效快捷的技术支撑。
- 王亮刘艳王锡锋
- 关键词：荧光定量PCR
- 小麦矮缩病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗体制备及应用被引量：5
- 2013年
- 小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)引起的小麦矮缩病是近年来我国小麦生产中的一种重要病毒病害,急需研发快速精准的检测技术用于预测预报和病毒-介体相互作用的研究。本研究应用Gateway重组技术构建了外壳蛋白基因(Coat protein,CP)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导获得CP基因原核表达蛋白。以重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备得到了相应的抗体,Western blot检测表明制备的抗体能与CP重组蛋白、感病小麦和带毒叶蝉特异性结合,说明获得的抗体特异性高。用获得的抗体进行免疫荧光标记,观察到病毒分布在介体叶蝉的前中肠和中中肠部位,为WDV的预测预报和介体条沙叶蝉传毒机制的研究奠定了基础。
- 王亚娇任堂雨刘艳王锡锋
- 关键词：原核表达BLOT免疫荧光标记
