国家自然科学基金(30672371)
- 作品数：11 被引量：22H指数：3
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- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学第四军医大学西京脑科医院更多>>
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- 凋亡抑制基因survivin真核表达载体的构建及其在SHG44细胞中的表达
- 2009年
- 目的:克隆细胞凋亡抑制蛋白基因survivin(SVV)的编码序列,构建含SVV基因的真核细胞表达载体并观察其在人胶质瘤细胞系SHG44中的表达.方法:利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增SVV基因编码序列,扩增产物双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,成功构建SVV基因真核表达载体pcDNA3.1-SVV.通过脂质体介导用pcDNA3.1-SVV转染SHG44细胞,经G418筛选,RT-PCR、免疫蛋白印迹(Western Blot)和免疫细胞化学方法鉴定SVV的表达.结果:经酶切鉴定和核苷酸序列分析,证实成功构建了SVV基因真核表达载体pcDNA3.1-SVV.蛋白和RNA水平检测表明SVV基因在SHG44细胞中稳定表达.结论:真核表达载体pcD-NA3.1-SVV使SVV基因在SHG44细胞中稳定表达.
- 张家墅甄海宁章翔张瑞韩涛左毅王鹏霍军丽
- 关键词：SURVIVIN真核表达载体神经胶质瘤SHG44细胞
- 人脑星形细胞瘤中组蛋白修饰方式及意义被引量：1
- 2010年
- 目的探讨组蛋白修饰与人脑星形细胞瘤发生及病理分级的关系。方法选取西京医院神经外科2006年至2008年经病理证实的星形细胞瘤患者肿瘤组织标本67例和正常脑组织标本10例,通过免疫组化方法 ,检测组蛋白3个位点(H3K4diMe、H4K12Ac、H3K18Ac)的修饰水平。结果在正常脑组织中组蛋白3个位点均无修饰;在星形细胞瘤中均有修饰,有2个位点(H3K4diMe、H4K12Ac)的修饰水平随星形细胞瘤病理级别的增高而升高,且呈现明显差异(P<0.05),但H3K18Ac的修饰水平并未随肿瘤病理级别的增高发生显著变化。结论组蛋白修饰与人脑星形细胞瘤的发生有关,且修饰水平的变化与病理级别相关。
- 蔡桑刘柏麟章翔王彦刚
- 关键词：组蛋白修饰星形细胞瘤免疫组化
- 稳定整合靶向性14-3-3ζ基因RNA干涉载体的胶质瘤细胞系建立被引量：1
- 2010年
- 目的构建针对细胞凋亡抑制蛋白14-3-3ζ基因的特异性RNA干涉载体,并建立稳定转染该干涉载体的人胶质瘤细胞系。方法根据14-3-3ζ编码序列,设计并合成针对14-3-3ζ基因的特异性RNA干涉片断,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干涉载体中,构建14-3-3ζ基因shRNA真核表达载体pSilencer-14-3-3ζ。重组载体pSilencer-14-3-3ζ和pSilencer3.1-H1neo阴性对照载体pSilencer3.1-H1neo Negtive经脂质体LipofectamineTM2000介导法转染胶质瘤细胞株U251;转染细胞经过G418筛选,采用Western blot方法分别在蛋白水平检测、筛选G418抗性的克隆细胞。结果酶切鉴定和核苷酸序列分析证实,成功构建了14-3-3ζ基因shRNA真核表达载体pSilencer-14-3-3ζ,经酶切、测序鉴定证实克隆正确。获得了稳定转染pSilencer-14-3-3ζ载体的胶质瘤细胞株。结论 14-3-3ζ基因特异性RNA干涉载体能够显著抑制14-3-3ζ基因在U251细胞中的表达,这为进一步研究14-3-3ζ在胶质瘤细胞系U251中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。
- 彭岱杨晓亮章翔曹卫东
- 关键词：RNA干涉胶质瘤
- RNA干涉脑胶质瘤MSP58基因后肿瘤转移相关基因的表达变化被引量：3
- 2010年
- 目的采用基因芯片技术,观察RNA干涉法抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞MSP58基因表达后肿瘤转移相关基因的变化,从而了解MSP58在肿瘤转移相关基因通路中的可能定位。方法将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3.1-MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251,同时构建相应的阴性对照载体pSilencer3.1-NC以及空载体pSilencer3.1-H1neo。运用半定量RT-PCR及Western blot的方法检测稳定转染和未转染干涉载体的胶质瘤细胞MSP58的mRNA和蛋白的表达水平。运用基因芯片技术分析pSilencer3.1-MSP58转染后肿瘤转移相关基因表达的变化。结果成功建立了具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞、阴性对照U251-NC细胞以及含有空载体的U251-H1neo细胞。干涉组细胞的MSP58的表达无论在mRNA水平还是在蛋白水平均较阴性对照组及空载体组细胞显著降低。基因芯片技术共筛选肿瘤转移相关基因128个,其中上调2倍以上的共有34个基因。结论干涉MSP58基因表达后,胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的下降与肿瘤转移相关基因表达的变化有关。
- 林伟罗小楠章翔张璟张健费舟
- 关键词：基因芯片RNA干涉胶质瘤
- 人源性Notch 1胞内段真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建人源性Notch 1胞内段(NICD)真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人脑胶质母细胞瘤细胞系U251细胞中获得编码NICD的cDNA,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP;经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内NICD的表达。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,将其转染HeLa细胞72h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内NICD的表达显著增高。结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,为研究Notch信号通路在人脑胶质细胞瘤发生发展中的作用机制奠定了基础。
- 李斌梁亮甄海宁林伟晁晓东董文鹏李娟章翔
- 关键词：NOTCH信号胶质细胞瘤真核表达
- FLIP蛋白抑制顺铂诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡被引量：4
- 2009年
- 目的探讨自杀相关因子(Fas)相关死亡结构域样白介素1(IL-1)β转化酶抑制蛋白(FLIP)对于顺铂(CDDP)诱导大鼠脑胶质瘤细胞(C6细胞株)凋亡的抑制作用,为进一步研究胶质瘤的耐药性奠定分子生物学基础。方法利用由Ad-Max腺病毒包装系统成功构建的携载大鼠FLIP基因的腺病毒表达载体Ad-FLIP感染大鼠C6胶质瘤细胞,24h后经逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测感染组及对照组细胞中FLIP基因的mRNA及蛋白表达水平;分别给予Ad-FLIP感染组及对照组细胞不同浓度的CDDP(0,1,2,4,8mg/ml),药物处理48h后,经流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡状况;四唑蓝显色法(MTT)测定并比较两组细胞活力。结果Ad-FLIP感染组细胞与对照组细胞相比,FLIP mRNA和蛋白表达水平明显增高;流式细胞仪检测结果显示Ad-FLIP感染组细胞凋亡率明显低于对照组。MTT法结果提示经CDDP处理后,Ad-FLIP感染组与对照组细胞活力均有下降,但FLIP蛋白具有明显的抑制作用。结论FLIP蛋白在大鼠C6胶质瘤细胞中具有抵抗化疗药物的作用。
- 贺亚龙贺晓生章翔屈朔瑶王江
- 关键词：FLIP胶质瘤凋亡顺铂
- STAT3与脑胶质细胞瘤被引量：2
- 2008年
- 尹一恒章翔
- 关键词：神经胶质瘤信号转导凋亡
- Survivin在胶质瘤靶向治疗中的研究进展被引量：4
- 2008年
- 无限增殖是恶性肿瘤发生和发展的基础，凋亡抑制是恶性肿瘤发生和发展的重要保证，而survivin是近年发现的一种新的细胞凋亡抑制因子，被认为有强烈的凋亡抑制功能，并且在胶质细胞瘤中具有高度的特异性，而且survivin表达的强度和程度与肿瘤的分级有相关趋势，在多形性胶质母细胞瘤中表达最强。最新研究表明尼古丁正是通过提高survivin的表达引起致癌作用的。本文介绍survivin在胶质细胞瘤的靶向治疗。
- 彭岱章翔甄海宁宋蕾
- 关键词：SURVIVIN胶质细胞瘤靶向治疗
- 14-3-3β在人脑星形细胞瘤中的表达及意义被引量：1
- 2008年
- 目的探讨14-3-3β在人脑星形细胞瘤中表达与肿瘤病理分级的关系。方法采用免疫组化法检测14-3-3β亚型在80例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平。结果在正常脑组织中,14-3-3蛋白β亚型只表达于神经元胞体和突起,在胶质细胞中未见表达。β亚型在人脑星形细胞瘤的表达阳性率及免疫反应评分(IRS)分别为60%、1.86±1.83。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型表达阳性率分别为40%(8/20)、50%(10/20)、70%(14/20)和80%(16/20)。Ⅰ～Ⅳ级脑星形细胞瘤中β亚型IRS分别为0.88±0.27、1.15±0.28、2.19±0.37和3.23±0.47。不同恶性级别的脑星形细胞瘤中,14-3-3蛋白β亚型的阳性表达率无显著差异,但其IRS有显著差异(P<0.05)。结论14-3-3β在人脑星形细胞瘤中高表达,且随着星形细胞瘤病理级别的增高而表达增强,14-3-3蛋白β亚型在脑星形细胞瘤的发生过程中具有重要作用。
- 曹磊章翔曹卫东章薇林洪董文鹏甄海宁杨晓亮霍军丽
- 关键词：凋亡免疫组化星形细胞瘤
- ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Bcl-2和Caspase-3表达的研究被引量：5
- 2010年
- 目的研究全反式维甲酸(ATRA)诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Caspase-3和Bcl-2表达情况,探讨ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制ATRA不同浓度不同时间(6、12、24、48、72h)对胶质瘤C6细胞作用后细胞生长曲线,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA水平的表达变化影响,Western blot分析Caspase-3和Bcl-2在胶质瘤C6细胞中的表达情况。结果胶质瘤C6细胞经ATRA诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在ATRA作用下明显呈低表达而Caspase-3 mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Westernblot检测结果显示ATRA作用后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白Caspase-3的表达。结论ATRA对胶质瘤C6细胞的增殖具有抑制作用。
- 李娟张磊费舟章翔甄海宁张晓楠霍军丽
- 关键词：全反式维甲酸胶质瘤C6BCL-2CASPASE-3
