为探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制,本研究应用免疫组织化学方法检测各组豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位白介素-1β(IL-1β)免疫反应的变化.用Western blot方法分别检测各组豚鼠肺、C7～T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和IL-1β的表达.用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析.免疫组织化学结果显示(染色反应强度用灰度值表示):生理盐水组与单纯致敏组豚鼠IL-1β阳性免疫反应产物的平均灰度值没有显著差异(P＞0.05);与这两个对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C7～T5段脊神经节及相应节段脊髓背角内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显降低(P＜0.01);在哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体),上述部位内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显高于哮喘组(P＜0.01).Western blot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠肺、C7～T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中IL-1β或NGF目标带的IDV(integrated density value)与内参照IDV的比值均明显升高(P＜0.01),而哮喘+NGF抗体组上述部位样品中IL-1β或NGF目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显低于哮喘组(P＜0.01),表明NGF可上调IL-1β的表达.这些结果提示NGF诱发IL-1β的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位IL-1β的表达可能是治疗哮喘的新途径.
目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在哮喘豚鼠下呼吸道的表达及神经生长因子(NGF)对MMP-2的调节作用。方法应用免疫组织化学方法检测各组豚鼠下呼吸道MMP-2免疫反应的变化。用W estern b lot蛋白印迹方法检测各组豚鼠肺组织NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果①免疫组织化学结果显示:豚鼠气道上皮和肺内炎性细胞的MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值(0-深色,255-浅色),生理盐水组(185.60±4.81、161.47±5.71)与单纯致敏组(184.80±9.64、160.33±4.03)比较没有显著差异(P>0.05);哮喘组(141.93±4.66、129.77±4.07)明显低于生理盐水组和单纯致敏组(P<0.01);哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体,179.73±6.11、150.23±8.13)则明显高于哮喘组(P<0.01)。②W estern b lot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠肺组织MMP-2和NGF阳性产物的IDV(Integrated Density Value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调MMP-2的表达。结论MMP-2可能是哮喘气道重塑的一种调控因素,NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道MMP-2的表达有可能延缓气道重塑的发生,可能是治疗哮喘的新途径。
