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大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法被引量：6: 2011年; 精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液，根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞（支持细胞及少量的管周细胞）及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同，将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后，5只大鼠的睾丸可以得到约3×10’个精原干细胞，该精原干细胞在体外培养可形成克隆，并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRal和CDHl。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法，操作简便，且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力，该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。; 张岩罗奋华刘林洪萨初拉于泊洋吴应积; 关键词：精原干细胞

制备精原干细胞滋养层细胞条件的优化被引量：5: 2012年; 目的:优化精原干细胞培养滋养层细胞的制备条件。方法:首先根据文献资料报道和实践经验确定丝裂霉素C作用STO细胞的浓度范围和时间范围,利用双因素优选法缩短丝裂霉素C处理STO细胞的试验范围。然后采用MTT检测法确定丝裂霉素C处理STO细胞的最佳浓度和时间。结果:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数量均有所增加;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数目均有所降低。结论:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件。; 刘海超张岩于泊洋吴应积; 关键词：精原干细胞滋养层丝裂霉素C MTT法

检测生精过程中减数分裂完成的质粒载体的构建被引量：1: 2012年; 旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。; 于泊洋罗奋华张岩吴应积; 关键词：小鼠精子发生

精原干细胞来源的多能干细胞的形成及其应用被引量：2: 2011年; 报道证实成体细胞可被重编程去分化为多能干细胞,即诱导多能干细胞(iPS细胞),然而这些去分化过程大多伴随着反转录病毒携带外源基因进入细胞内,而且有的外源基因是致癌基因。因此,目前来看,这些由成体细胞衍生的iPS细胞还不能在临床上用来治疗人类的疾病。另一些最近发表在权威期刊的文章再次受到人们的关注,这些文章显示,小鼠和人睾丸中的精原干细胞(SSCs)可被诱导为多能干细胞。这个转变过程不需要外源基因的介入,也不需要反转录病毒的介导,用于自体器官移植也没有伦理学上的问题。这个发现可能会催生从细胞水平上诱导自体或同源的器官再生来治疗人来各种疾病的方法。本文从SSCs出发,论述了SSCs的各种分离、纯化和培养方法,以及体外培养的SSCs向多能干细胞转变的方法,并介绍了该多能干细胞在再生医学和遗传医学中的应用潜能。; 张岩吴应积; 关键词：精原干细胞多能干细胞

6天龄与10天龄大鼠的睾丸组织的基因差异表达被引量：1: 2012年; 通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。; 刘陶迪罗奋华于泊洋吴应积; 关键词：睾丸组织精原干细胞基因芯片

绵羊cdh1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析被引量：1: 2011年; 在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群。目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道。为了更好地研究绵羊精原干细胞的特性,根据已报道的其他物种的cdh1基因的cDNA保守区设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法克隆了蒙古绵羊cdh1基因cDNA全编码区。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为96.5%,说明该基因在进化上是高度保守的。这为制备绵羊CDH1的抗体奠定了基础,并且为绵羊精原干细胞的分子水平鉴定提供了研究条件。; 胡甜园白音巴图罗奋华吴应积; 关键词：绵羊 CDH1基因

胶质细胞源性神经营养因子引发精原干细胞自我更新的信号通路被引量：1: 2012年; 胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是TGF-β超家族的一个相关成员。哺乳动物睾丸曲细精管内支持细胞分泌的GDNF,能促进精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的自我更新与增殖。SSCs去分化诱导产生的多能干细胞已被广泛应用于再生医学领域,且SSCs在制作转基因动物、男性不育治疗和体外实施精子发生过程等方面,具有极大的应用价值。所以,GDNF引发SSCs自我更新的作用机理非常值得探索。通过对GDNF引发SSCs自我更新的信号通路进行系统梳理,我们发现了如下的作用过程:GDNF与GFR-α1特异性结合,活化Ret蛋白酪氨酸激酶,随后激活Ras/ERK1/2、PI3K-Akt和SFK信号通路,促进SSCs的自我更新;同时,在该过程中还存在信号通路间的交联对话现象。; 刘海超任俊明吴应积; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子精原干细胞信号通路自我更新

绒山羊Sertoli细胞的长期培养及分析: Sertoli细胞从生精上皮基底膜延伸至管腔,是曲细精管中发现的极其重要的体细胞.近年来体内和体外研究显示,Sertoli细胞充当抚育细胞,在精子发生阶段为发育中的生精细胞提供营养.Sertoli细胞为精原干细胞(spe...; 苏慧敏罗奋华包佳婧萨初拉张学明张岩多曙光吴应积; 关键词：绒山羊睾丸 SERTOLI细胞

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教育部“春晖计划”(Z2007-1-01036)