国家自然科学基金(30672385)
- 作品数：11 被引量：41H指数：3
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- Smad4静默对K-ras突变小鼠胰腺PanIN细胞增殖及转移能力的影响
- 2013年
- 背景与目的:由己建立的小鼠基因打靶模型证实,K-ras突变启动了胰腺癌前病变—胰腺上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN),p53、p16失活均可单独促进小鼠PanIN发展为浸润性胰腺癌。作为人胰腺癌中另一失活频率高发的抑癌基因Smad4,本课题组前期研究提示,应用RNA干扰技术沉默PanIN细胞株中内源性Smad4表达,促使PanIN细胞恶性转化。基于此目的,本研究进一步探讨siRNA干扰Smad 4基因对PanIN细胞体内外增殖及转移能力的影响,从而有助于阐明PanIN恶性转化的新机制。方法:构建和筛选能特异性静默PanIN细胞中Smad4表达的最佳siRNA稳定表达质粒,稳定转染最佳siRNA表达质粒进入PanIN细胞,用Zeocin筛选稳定转染克隆,挑选阳性克隆、扩增,稳定转染后细胞命名为PanIN-S。本研究运用细胞计数、克隆形成实验等分别比较两组在活细胞率和体外增殖能力的影响,同时为进一步验证Smad 4基因静默对PanIN细胞体外迁移、侵袭能力的影响,本研究采用Transwell和Mitigel assay检测其干扰前后体外运动、侵袭能力。动物实验中,建立PanIN及PanIN-S细胞组裸鼠移植瘤模型,并应用免疫组化方法检测并比较两组PCNA、VEGF和MMP-9的表达及其差异。结果:成功构建了Smad4基因siRNA体系;体外实验中与PanIN组相比,PanIN-S组细胞增殖、侵袭能力明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);动物模型免疫组化结果显示,与PanIN组相比,PanIN-S组PCNA、VEGF和MMP-9表达显著增高(P<0.05)。结论:K-ras突变基础上小鼠PanIN细胞Smad4基因静默促使PanIN细胞的恶性转化;PanIN基础上Smad4静默促使小鼠PanIN细胞体内外增殖及转移能力的增强,其增殖及转移可能与PCNA、VEGF和MMP-9高表达有关。
- 齐晓光胡毅汪进良谈文龙王琪王立夫Tuveson DA
- 关键词：SIRNA干扰SMAD4基因细胞增殖
- 小鼠胰腺肿瘤模型的研究进展被引量：1
- 2010年
- 近年来胰腺癌的发病率呈上升趋势．其中80％～90％为起源于胰腺导管上皮的胰腺导管腺癌（Dancreaticductaladenoma．PDA）。胰腺癌起病隐匿．缺乏特异性临床表现，且容易转移．恶性程度高．导致其早期诊断困难，确诊时大多已处于晚期而无法施行根治手术。胰腺癌现有治疗方案大致包括联合化学治疗（化疗）、新辅助放射治疗、分子靶向治疗，但治疗效果不十分理想，胰腺癌的5年生存率不足4％，是目前预后最差的恶性肿瘤之一。
- 王琪王立夫
- 关键词：小鼠模型胰腺肿瘤胰腺上皮内瘤变基因打靶
- 多种肿瘤标志物在胰腺癌临床分期中的应用被引量：21
- 2009年
- 目的探讨多种肿瘤标志物检测对胰腺癌的临床分期及术前评估的应用。方法45例胰腺癌,其中Ⅰ-Ⅱ期16例、Ⅲ期11例、Ⅳ期18例,检测其术前CA199、CA125、CEA等肿瘤指标,分析多种肿瘤标志物在胰腺癌临床分期及术前评估中的意义。结果不同分期胰腺癌之间CA199水平差异无显著性(P=0.381),CA125、CEA的水平随着分期的递增而升高,但统计分析显示只有CA125组间差异有统计学意义(P<0.05)。按照是否可切除分为两组,CA199水平在两组间差异无统计学意义(Z=1.045,P=0.296),而CA125、CEA水平在两组间存在显著性差异(P=0.000、0.045)。多因素分析结果显示,胰腺癌的不同分期与有无黄疸、胆道疾病史、性别、体重减轻等之间存在显著统计学差异(P<0.05),而与术前胆红素水平、血糖、糖尿病史、年龄等之间无统计学差异。结论CA125和CEA可辅助用于胰腺癌患者临床分期及术前评估,具有无创性、病人依从性好等优点,具有较好的临床潜在应用价值。
- 齐晓光李栋王立夫任峰孙罡林晓琳
- 关键词：胰腺肿瘤TNM分期术前评估肿瘤标志物
- Hedgehog信号通路在胰腺上皮内瘤变恶性转化中的作用被引量：2
- 2009年
- 胰腺上皮内瘤变（PanlN）是近年提出的新术语，是胰腺癌的癌前病变，K．ras高频突变是其重要特征之一。最近研究表明Hedgehog（Hh）信号转导通路早期异常激活在PanIN的发生和恶性转化中发挥重要作用。此外肿瘤干细胞增殖以及活性维持可能亦依赖于此信号通路。本文就Hh信号转导通路在PanlN的发生以及致瘤中的作用及其相关治疗作一综述。
- 齐晓光王立夫
- 关键词：HEDGEHOG信号通路胰腺上皮内瘤变胰腺肿瘤
- 肿瘤标志物在胰腺占位中的鉴别诊断价值被引量：2
- 2010年
- 齐晓光王立夫孙罡林晓琳
- 关键词：胰腺占位肿瘤标志物胰腺癌
- 胰胆系不同疾病之间肿瘤标志物水平比较研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨各肿瘤标志物对胰胆系不同疾病诊断效能及其潜在其它临床应用价值。方法对我院2008年4月-2008年11月间119例不同胰胆系疾病患者,肿瘤患者均为术前血清标本,良性疾病患者采血前均无ERCP等有创检查或治疗,常规离心分离血清进行检测。利用美国雅培公司化学发光分析仪器及配套试剂进行检测,诊断标准以CA199>37(U/ml)、CA125>35(U/ml)、CEA>10(ng/ml)水平为阳性。结果①胰腺不同疾病间,比较各组之间肿瘤标志物等水平差异,统计分析结果,CA199(χ=28.113,P=0.000),CA125(χ=9.752,P=0.008),CEA(χ=8.632,P=0.013),其肿瘤指标均有统计学差异;②胆系不同疾病间,肿瘤组肿瘤标志物指标各平均秩次胆系肿瘤组均高于胆总管结石组,但均无统计学差异(P>0.05)。③胰腺肿瘤组与胆系肿瘤组比较,各肿瘤指标非参数检验结果分别为CA199(Z=0.312,P=0.755),CA125(Z=0.745,P=0.456),CEA(Z=0.491,P=0.624)但各肿瘤标志物水平间无统计学差异(P>0.05)。④慢性胰腺炎与慢性胰腺炎伴假囊肿患者之间,非参数检验结果显示CA125水平之间具有统计学差异(Z=1.970,P=0.048);而假性囊肿与胰腺囊肿之间各指标均无统计学差异(P>0.05)。结论①CA199虽然其诊断胰腺癌特异性较差,但在胰腺良恶性疾病方面对胰腺癌诊断具有较大优势。②各肿瘤指标对胆系良恶性疾病及胰胆肿瘤的诊断效能较低,单独应用不能准确鉴别胆系良恶性疾病及胰胆肿瘤。③CA125指标监测胰腺炎有无继发假性囊肿形成的价值,有待临床进一步研究证实。
- 齐晓光王立夫孙罡林晓琳
- 关键词：胰腺肿瘤胆系肿瘤肿瘤标志物
- Smad4静默前后PanIN细胞基因芯片检测及表达谱的研究被引量：1
- 2011年
- 背景与目的:由己建立的小鼠基因打靶模型证实,K-ras突变启动了胰腺癌前病变即胰腺导管上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN),Smad4基因失活可促使PanIN细胞恶性转化。PanIN细胞中Smad4基因静默后其下游基因表达将如何改变及促使PanIN细胞恶性转化,目前尚不清楚。基于此目的,我们在己成功分离建立K-ras突变启动的PanIN细胞,并应用siRNA干扰技术静默PanIN细胞株中内源性Smad4表达的基础上,应用全基因表达谱芯片研究Smad4基因静默前PanIN细胞与其静默后PanIN-S细胞基因表达谱的变化。方法:应用包含41 174个小鼠基因转录本Agilent小鼠4×44K全基因芯片检测Smad4基因静默前后PanIN细胞基因表达谱变化,分析差异表达基因,并选择其中有差异表达的部分基因进行实时荧光定量多聚酶链反应(Real-time PCR)验证。结果:基因芯片筛选出差异倍数2倍以上的差异表达基因,如Fut9、CXCR4、MMP2、PIK3C2G、Cplx4、Lemd1、TIMP4、Reln和PITX2等。Real-time PCR验证差异表达基因CXCR4、MMP2、PIK3C2G、TIMP4、PITX2与基因芯片结果一致。结论:Smad4基因静默前后PanIN细胞中CXCR4、MMP2、PIK3C2G、TIMP4、PITX2基因表达存在显著差异,其中CXCR4、PIK3C2G基因可能与胰腺肿瘤新生血管形成相关,MMP2、TIMP4基因可能与胰腺肿瘤细胞黏附、浸润、迁移相关,PITX2表达高低可能与胰腺肿瘤预后相关。
- 王琪姚静静蒋荷朱兰程时丹王立夫
- 关键词：基因芯片SMAD4
- 胰腺肿块伴黄疸对肿瘤标志物诊断的影响分析被引量：1
- 2010年
- 目的评价有无黄疸在肿瘤标志物对胰腺良恶性占位中的意义。方法对60例胰腺恶性肿瘤及19例良性占位患者,利用美国雅培公司化学发光分析仪器及配套试剂进行测定血CA199、CA125和CEA含量,分析比较其单项及联合诊断的敏感度和特异度、ROC曲线分析及组间比较分析。结果 (1)单项指标检测以CA199诊断价值最大,敏感度和特异度分别为66.7%、78.9%,误诊率22.1%,漏诊率33.3%(约登指数=0.456);两者联合中,CA199+CEA组敏感度和特异度分别为73.3%、73.7%,误诊率26.7%,漏诊率26.3%,联合诊断价值最高(约登指数=0.470);优于CA199等单项指标组,差异具有统计学意义(P<0.05);而三者联合诊断并不优于CA199或CA199+CEA联合诊断。(2)胰腺良性占位组中,CA199等在黄疸或不伴黄疸组表达无统计学差异(P>0.05);而在胰腺恶性肿块患者中,黄疸组与无黄疸组相比,非参数检验结果为CA199(Z=1.063,P=0.020)、CA125(Z=0.067,P=0.947)、CEA(Z=0.502,P=0.616),黄疸对CA199水平影响差异有统计学意义(P<0.05),而对CA125、CEA等影响,统计分析显示均无统计学差异(P>0.05)。结论对于胰腺肿瘤的诊断,CA199+CEA联合诊断价值最高,优于CA199等单项指标组及三者联合组。CA199在对伴有黄疸的胰腺良恶性疾病的鉴别,除考虑其肿瘤标志物外还要考虑黄疸的影响作用,将来通过ROC曲线等研究CA199调定点的不同,有望达到更优的诊断效能。另外胰腺癌伴有胆红素异常患者是否为胰腺癌一个独特亚型,有待进一步临床证实。
- 李栋卢士云齐晓光王立夫任峰
- 关键词：胰腺占位肿瘤标志物胰腺肿瘤黄疸
- 进展期胰腺癌临床化学治疗进展被引量：7
- 2009年
- 胰腺癌发病率占人类全身肿瘤的1％～3％、消化道肿瘤的8％-10％。在美国，胰腺癌造成的死亡居肿瘤死亡原因的第5位；在我国其死亡率亦迅速增高，总体死亡率自20世纪90年代初的1．83％增至2000年的2．26％，近年仍呈上升趋势，占恶性肿瘤死因的第7—8位。胰腺癌的高死亡率与其高侵袭性的生物学特性及其对全身和局部治疗的低敏感性有关，明确诊断时多已是进展期，未经积极治疗的胰腺癌中位生存期仅3～4个月。
- 孙罡王立夫
- 关键词：胰腺肿瘤辅助化学治疗吉西他滨联合药物疗法
- 胰腺腺管内上皮瘤的分子遗传学研究进展被引量：2
- 2009年
- 胰腺腺管内上皮瘤(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN)是近几年提出的新术语,并被认为是胰腺癌的癌前病变,近年来随着PanIN转基因动物模型的建立,对其诸多方面的认识向前推进了一大步,尤其是对其分子生物学行为的认识也在逐渐深入,发现K-ras、p53、p16、Smad4等主要分子遗传学事件异常与PanIN及胰腺癌的恶性转化密切相关。为此深入研究胰腺癌癌前病变PanIN的分子遗传学事件异常是发现胰腺癌新肿瘤标志物及早期诊断,并最终有效治疗或控制胰腺癌的关键,同时亦是近几年研究的热点与难点之一。本文从PanIN的起源、形态学变化和分子遗传学异常等方面做一简要概括。
- 齐晓光王立夫
- 关键词：胰腺肿瘤癌前状态分子生物学PANIN
