湖北省自然科学基金(2005ABA195)
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：西北农林科技大学湖北省农业科学院扬州大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪乙脑快速诊断方法的建立与应用被引量：2
- 2006年
- 根据乙脑病毒基因组3′末端保守区设计一对特异性引物,建立了乙脑病毒不同株的RT-PCR诊断技术。该技术可以从乙脑病毒WHe株、SA14-14-2株、P3株、SA14-14-2VS株接种的鼠脑组织中扩增出486bp的核酸片段,检出的灵敏度约为2pg。对20份临床样品的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但RT-PCR诊断技术可在3h内直接对组织进行诊断,具有敏感、快速、稳定的优点。
- 唐青海乔宪凤安立国周荆荣郑新民刘西梅华文君何维明
- 关键词：乙脑病毒反转录聚合酶链式反应
- 日本脑炎病毒WHe株NS1基因的克隆、测序及表达
- 2007年
- 以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术,克隆了JEV WHe株的NS1基因,并对其进行了测序和序列分析。构建了pET28b-NS1表达载体,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),并对其进行了诱导表达,对表达产物进行检测。结果表明,NS1基因全长1 145 bp,其核酸序列与JEV P3株同源性为99．4％,与SA14和SA14-14-2等27个JEV毒株的核苷酸序列同源性为98％,表明NS1基因的保守性很高;pET28b-NS1表达产物的相对分子质量约为43 ku,大小与预期结果相符。NS1基因克隆表达成功。
- 乔宪凤唐青海郑新民熊忠良刘西梅华文君周荆荣何维明
- 关键词：日本脑炎NS1基因RT-PCR
- 日本脑炎病毒WHe株全长cDNA的长链RT-PCR法的扩增被引量：2
- 2007年
- 为深入探索日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的致病机理,并为新型疫苗研发提供技术支持,采用长链RT-PCR技术对其基因组全长cDNA进行了扩增鉴定,并对含复杂二级结构的3′末端和5′末端非编码区扩增片段进行了测序分析。扩增结果表明,扩增出的JEV WHe株基因组全长cDNA分子近11 kb大小;非编码区测序分析表明,扩增产物为WHe株所特有。提示长链RT-PCR法可用于JEV WHe株基因组全长cD-NA的扩增。
- 唐青海乔宪凤马秋明何维明郑新民刘西梅安立国颜艳魏庆信
- 关键词：全长CDNA
- 猪日本脑炎DNA疫苗的构建与鉴定
- 2008年
- 为开发猪日本脑炎新型疫苗,采用PCR方法扩增日本脑炎病毒WHe株prME和NS1基因,并将其分别克隆至DNA疫苗载体pVAX1,分别用酶切和测序分析进行鉴定。结果表明prME和NS1基因大小分别为2.1kb和1.1kb,酶切和测序结果表明,猪日本脑炎DNA疫苗pVAX1-prME和pVAX1-NS1构建成功,为进一步免疫试验奠定了基础。
- 唐青海董志强乔宪凤郑新民华文君何维明
- 关键词：日本脑炎DNA疫苗
- 新城疫病毒HN基因片段原核表达重组质粒的构建
- 2008年
- 根据GenBank中发表的新城疫病毒F48E9基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了该病毒HN基因中两个不交叉的基因片段,长度分别为790bp和579bp。将这两段基因分别克隆到pGEM-T vector中,经酶切鉴定和测序后克隆到原核表达载体pET-28a,PCR和酶切鉴定表明,克隆的两个新城疫病毒基因片段已经正确地插入到了原核表达载体pET-28a之中。
- 赵永许乔宪凤刘西梅华文君周荆荣郑新民张淼涛
- 关键词：新城疫病毒原核表达
- 长距离RT-PCR非特异性扩增的鉴定与排除被引量：2
- 2007年
- 根据已经测定的乙脑病毒WHe株全基因组序列(GenBank EF107527),设计1对引物扩增基因组全长cDNA和2对特异性的鉴定引物。经RT-PCR技术扩增后,得到约9 kb的产物,经过反复实验,鉴定为外源性污染核酸扩增产物,并加以有效的排除,初步的研究表明该产物可能是由外源性污染核酸自身反向部分互补扩增所致。
- 唐青海乔宪凤何维明郑新民华文君刘西梅陈果亮马秋明
- 关键词：RT-PCR乙脑病毒
