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腮腺沃辛瘤31例临床分析被引量：1: 2008年; 储眉周健杨宏宇陈钢李树春黄晓斌罗娟孙顺涛; 关键词：腮腺肿瘤腺淋巴瘤

Tca8113-4-1BBL细胞联合CD28单抗在口腔鳞癌免疫治疗中的作用被引量：1: 2009年; 目的:探讨转4-1BBL肿瘤细胞联合抗CD28单抗体外诱导抗肿瘤活性的能力。方法:通过脂质体法将重组载体pEGFP/neo-h4-1BBL转染人舌鳞癌细胞Tca8113,经G418(400μg/mL)筛选及有限稀释后,获得稳定高表达克隆,分别用RT-PCR和Western印迹检测转染细胞中h4-1BBLmRNA和蛋白的表达。将转染与未转染4-1BBL基因的Tca8113细胞用丝裂霉素C(MMC)处理后,制成肿瘤细胞瘤苗。联合抗CD28单克隆抗体与经体外抗CD3mAb诱导的人外周血T淋巴细胞共同培养,测定T细胞增殖、CTL杀伤活性及产生细胞因子(IL-2和IFN-γ)的能力。实验数据以SPSS12.0软件包进行方差分析。结果:h4-1BBL基因真核表达载体在Tca8113细胞中获得稳定表达。转染h4-1BBL基因的Tca8113细胞联合抗CD28单抗能显著刺激T细胞活化、增殖(P<0.01),促进IL-2、IFN-γ分泌(P<0.01),并能有效地诱导CTL的特异性杀伤活性(P<0.01)。结论:转4-1BBL肿瘤细胞联合抗CD28抗体能显著增强肿瘤细胞的免疫原性,诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。; 张淼岳磊孙顺涛罗娟杨辉俊黄冬兰杨宏宇; 关键词：4-1BBL 抗肿瘤免疫细胞毒性T细胞

转人B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测被引量：2: 2007年; 目的探讨转入B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测。方法采用脂质体介导法将已建好的真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113中(Tca8113/B7-H3),RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达,Western blot检测其蛋白的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有B7-H3基因的Tca8113鳞癌细胞株。结果RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物;DAB显色,裂解的Tca8113/B7-H3基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约65～86ku大小的特异性条带。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,经过有限稀释法建立了Tca8113/B7-H3细胞株。结论成功建立了Tca8113/B7-H3细胞株,为以后的体内外试验提供了很好的平台,为近一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。; 邹多宏郝艳红周健杨宏宇何家才王元银阎旭李宝金唐爱发; 关键词：细胞系

人共刺激分子4-1BBL表达载体的构建及转染Tca8113细胞的研究被引量：2: 2008年; 目的:克隆人肿瘤坏死因子配体超家族(tumor necrosis factor superfamily,TNFSF)成员4-1BBL基因,构建其真核表达载体,并检测4-1BBL基因在Tca8113中的表达。方法:从淋巴细胞中提取RNA,用RT-PCR方法将4-1BBL的编码序列cDNA扩增。然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP-C1质粒中,构建成最终的表达载体pEGFP-Cl-4-1BBL。运用脂质体方法将pEGFP-Cl-4-1BBL转染Tca8113细胞,转染24h后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR和免疫印迹检测4-1BBL在该细胞中的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有4-1BBL基因的Tca8113细胞系。结果:从淋巴细胞中提取的RNA经RT-PCR扩增出目的基因4-1BBL,其全长大小为768bp。测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染pEGFP-Cl-4-1BBL载体的靶细胞Tca8113中,荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白,RT-PCR方法检测到目的基因4-1BBL的7686p大小的cDNA扩增产物。裂解的4-1BBL/Tca8113基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约27.5Kd的特异性条带。结论:转染4- 1BBL基因细胞株的建立,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。; 孙顺涛杨宏宇罗娟储眉张键荣张立兵桂耀庭; 关键词：TCA8113 共刺激分子质粒构建基因转染

B7-H3基因体内诱导特异性抗肿瘤免疫的研究: 2010年; 目的:研究人B7-H3基因在特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法:建人免疫重建荷人口腔鳞癌SCID小鼠嵌合模型,瘤体内注射人B7-H3基因腺病毒表达载体,1周定期检测肿瘤体积,于第4、7周分别尾静脉取血,ELISA法检测人IgG含量;9周后处死模型动物,RT-PCR、免疫荧光显微镜检测肿瘤组织人B7-H3mRNA、蛋白表达;流式细胞仪检测SCID鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果:第4、7周可在免疫重建小鼠外周血测得人IgG。荧光显微镜观察人B7-H3组小鼠肿瘤组织可见大量绿色荧光,RT-PCR检测到人B7-H3mRNA表达,其余各组均未检测到人B7-H3表达。人B7-H3组小鼠肿瘤体积小于其它组(P<0.05),生长明显受到抑制;免疫重建鼠均能检测到人CD4+、CD8+T淋巴细胞,人B7-H3组高于其它组。结论:人B7-H3基因在肿瘤组织的表达增强能成功诱导CD4+、CD8+T淋巴细胞增殖,产生有效的特异性抗肿瘤免疫应答。; 黄冬兰余术宜孙顺涛唐景张淼汪海燕杨宏宇; 关键词：B7-H3 SCID小鼠口腔鳞癌

腮腺复发性多形性腺瘤12例临床分析被引量：1: 2008年; 目的探讨腮腺多形性腺瘤术后复发及恶变的原因及临床治疗方法。方法对2003年7月至2007年7月北京大学深圳医院口腔颌面外科收治的12例腮腺多形性腺瘤复发患者进行回顾性分析和追踪调查。结果腮腺多形性腺瘤复发病例肿块多呈多灶性(6/12),剜除术复发率最高,复发间期最短(P<0.05)。12例中有4例发生恶变,占33.3%,末次手术分别采用浅叶切除术、腮腺全切术、扩大切除术,对4例有恶变者术后辅以放射治疗。术后平均追踪24个月,均未见复发。结论导致腮腺多形性腺瘤复发的主要原因是不恰当的手术方式以及手术施行者为非口腔颌面外科专业医生。; 储眉周健杨宏宇黄晓斌陈钢李树春杨辉俊罗娟孙顺涛; 关键词：腮腺多形性腺瘤复发

转入4-1-BBL口腔鳞状细胞癌体外诱导特异性抗肿瘤免疫的研究被引量：2: 2009年; 目的构建转染人口腔鳞状细胞癌细胞株4-1-BBL基因，探讨其体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将重组载体pEGFP-4-1-BBL转染人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113，经G-418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆，分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测转染细胞中人4-1-BBL mRNA和蛋白的表达。制备肿瘤细胞疫苗。用淋巴细胞分离液分离纯化人外周血T淋巴细胞，用抗CD-3单抗预处理T细胞后，与转染及未转染人4-1-BBL的Tca8113疫苗混合培养。用CCK-8比色法检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）的杀伤活性；锥虫蓝计数法检测T细胞增殖，酶联免疫吸附实验检测培养上清液中白细胞介素（IL）-2、干扰素γ分泌水平。结果转基因Tca8113细胞能够稳定高表达人4-1-BBL。与野生型的Tca8113细胞相比较，转染人4-1-BBL的Tca8113细胞PCR扩增产物的大小约271bp，能够显著增强T细胞增殖，促进IL-2、干扰素γ分泌，并能有效地诱导CTL产生对Tca8113细胞的特异性杀伤作用。结论转染4-1-BBL基因既能增强野生型Tca8113细胞的免疫原性，也能诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。; 孙顺涛杨宏宇罗娟储眉张淼黄冬兰; 关键词：鳞状细胞基因疗法肿瘤

4-1BB及其配体在口腔癌免疫治疗中的作用: 2009年; 4-1BB和4-1BB配体(4-1BBL)为肿瘤坏死因子/肿瘤坏死因子受体(TNF/TNFR)超家属的成员。研究发现,4-1BB和4-1BBL相互作用产生的共刺激信号在机体肿瘤免疫中起重要作用。本文通过对4-1BB/4-1BBL在共刺激作用的研究,探讨其在口腔癌免疫治疗中的潜在作用。; 孙顺涛杨宏宇; 关键词：共刺激分子免疫治疗

CIK细胞及其抗肿瘤研究进展被引量：3: 2008年; 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)是由多种细胞因子,如干扰素γ、重组白细胞介素2、抗CD3McAb等诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞,具有高效的非主要组织相容性复合物限制性溶瘤活性,被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的新希望。本文综述了CIK细胞的特点、杀瘤机制和临床应用现状。; 储眉周健; 关键词：杀伤细胞过继免疫治疗肿瘤

4-1BBL在人口腔鳞癌PBL-SCID鼠嵌合模型肿瘤免疫中的作用被引量：1: 2012年; 目的:探索建立人口腔鳞癌PBL-SCID鼠嵌合模型,评价4-1BBL在人口腔鳞癌PBL-SCID嵌合模型肿瘤免疫中的作用。方法:SCID鼠右背部皮下注射5×106(0.2 mL)Tca8113细胞。成瘤后,尾静脉注射anti-asialo-GML多抗,随机分为4组,第①组为对照组,不给予成瘤小鼠免疫重建,第②组给予成瘤小鼠免疫重建,第③组给予成瘤小鼠免疫重建+含有空载体的腺病毒做肿瘤内注射,第④组给予成瘤小鼠免疫重建+含有4-1BBL基因的腺病毒做肿瘤内注射。第②、③、④组小鼠腹腔注射健康志愿者外周血淋巴细胞3×107(0.5 mL),第①组腹腔注射0.5 mL1640培养基。每周记录各组小鼠的成瘤情况,免疫重建后,第2、7周取鼠血,用ELISA法测定人IgG含量。小鼠处死后,比较各组小鼠体重及肿瘤、脾脏的重量。RT-PCR检测4-1BBL基因在瘤体内的表达,HE染色检测肿瘤及脾脏生长情况。结果:模型成瘤率为100%,成瘤潜伏期12～18 d。免疫重建后第2、7周时人口腔癌PBL-SCID嵌合组小鼠血中人IgG分别达71.8μg/mL、136.9μg/mL。免疫重建及转染4-1BBL基因组小鼠,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01)。RT-PCR证明4-1BBL基因在瘤体内充分表达,冰冻切片HE染色见肿瘤生长、脾脏有大量淋巴细胞浸润。结论 :SCID小鼠皮下注射口腔鳞癌细胞、腹腔注射人淋巴细胞,可建立人口腔鳞癌PBL-SCID嵌合模型,经腺病毒转染4-1BBL基因后,可显著提高宿主对瘤体的抑制作用。; 孙顺涛杨宏宇罗娟朱国光来映明杨辉俊; 关键词：4-1BBL 口腔鳞癌肿瘤免疫

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