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HSPC238对HMOX1、RPS27a、MT2A、UBB调节的初步研究被引量：8: 2016年; 目的:探讨HSPC238过表达或低表达对目标蛋白(HMOX1、MT2A、UBB、RPS27a)的调节作用及其调节途径。方法:分别构建HSPC238的干扰载体及高表达载体,脂质体法转染HEPG2细胞株,RT-PCR、Western blot检测HSPC238及目标蛋白的mRNA、蛋白的表达量;进一步用目标蛋白的高表达质粒分别转染低表达及高表达HSPC238的HEPG2细胞株,实验组另以蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,镍柱纯化目标蛋白,以HSPC238做免疫印迹,检测目标蛋白累积情况。结果:外源性干扰HSPC238后HMOX1、MT2A、RPS27a表达下调较明显,外源性过表达HSPC238后MT2A、UBB、RPS27a表达水平明显上调;目标蛋白的高表达质粒分别转染低表达及高表达HSPC238的HEPG2细胞株,实验组以蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后,与对照组比较,泛素化的目标蛋白条带明显增加。结论:过表达HSPC238可上调MT2A、UBB、RPS27a的表达,干扰HSPC238可下调HMOX1、MT2A、RPS27a的表达;HSPC238可能通过泛素蛋白酶体途径(Ubiquitin-proteasome pathway,UPP)对目标蛋白发挥调节作用。; 谭家余黄湘陈敬林钟裕恒

SLC基因家族单核苷酸多态性与汉族孕产妇重度子痫前期易感性的关系被引量：1: 2016年; 目的探讨SLC基因家族单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）与汉族孕产妇重度子痫前期易感性的相关性。方法选取2011年3月至2013年3月确诊的合并重度子痫前期孕产妇125例和健康孕产妇140例为研究对象,利用Mass ARRAY-IPLEX技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱平台（MALDI-TOF-MS）对SLC9A3、SLC4A1和SLCO4C1基因的4个SNPs位点进行基因分型。结果基因分型成功率为98.11%。与对照组相比,重度子痫前期组rs2074107的等位基因分布（χ^2=0.992,P=0.319）和基因型分布（χ^2=0.886,P=0.648）均无显著性差异。与对照组相比,重度子痫前期组rs2857078、rs4957061和rs10066650的等位基因分布（χ~2=7.720,P=0.005;χ^2=19.755,P=0.000;χ^2=15.078,P=0.000）和基因型分布（χ^2=6.608,P=0.037;χ^2=20.116,P=0.000;χ^2=12.026,P=0.002）均具有显著性差异,但进行Bonferroni校正后rs2857078位点的2组间基因型分布无显著性差异（Pc=0.074）,而rs4957061和rs10066650的2组间基因型分布均具有显著性差异（Pc=0.000,Pc=0.008）。与CC基因型相比,rs4957061的TT基因型显著增加重度子痫前期发生的危险性（P=0.001）,OR值（95%可信区间）为3.080（1.615~5.875）。如表3与TT基因型相比,rs10066650的GT和GG基因型均增加重度子痫前期发生的危险性（P=0.033,P=0.003）,OR值分别为1.938（1.050~3.577）和5.814（1.628~20.758）。结论 SLC9A3和SLCO4C1基因的单核苷酸多态性可能与重度子痫前期易感性有关。; 杨博黄湘邬敏志黄海志何连艳杨维钟苑芳谭家余; 关键词：重度子痫前期单核苷酸基质辅助激光解吸电离

一个α珠蛋白生成障碍性贫血罕见融合基因的确诊分析: 2019年; 珠蛋白生成障碍性贫血是血红蛋白基因突变引起的珠蛋白肽链合成受抑制、失衡导致的无效造血和溶血性贫血[1]。我国南方为珠蛋白生成障碍性贫血高发地区,重症珠蛋白生成障碍性贫血患者往往需要终身输血,但不良反应、病死率仍较高,因此,通过产前诊断、新生儿疾病筛查等方式早期识别珠蛋白生成障碍性贫血患儿,对指导患儿日后的生育、控制疾病的发生和传播具有重要意义。; 李闪闪吴学威万志丹李冬秀黄湘; 关键词：珠蛋白生成障碍性贫血融合基因基因检测高通量测序

HSPC238相互作用蛋白RPL5的初步筛选: 2015年; 目的:构建HSPC238诱饵载体,筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。方法:基因合成法合成HSPC238基因,sfi IA和sfi IB双酶切后与pGBKT7诱饵载体连接,获得诱饵质粒pGBKT7-HSPC238,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7共同转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-HSPC238的自激活作用,进一步从人胎肝c DNA文库中筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。结果:诱饵载体pGBKT7-HSPC238构建成功,经表型筛选检测无自激活作用,经酵母双杂交技术结合文献分析,从人胎肝c DNA文库中初步筛选发现核糖体蛋白L5(Ribosomal protein L5,RPL5)可能是HSPC238相互作用的目标蛋白之一。结论:成功构建pGBKT7-HSPC238诱饵质粒载体,且经酵母双杂交技术结合文献分析发现RPL5可能是与HSPC238相互作用的目标蛋白之一。; 陈敬林黄湘谭家余钟裕恒万志丹; 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白

pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位被引量：3: 2014年; 目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。; 谭家余陈敬林黄湘李冬秀袁春雷万志丹; 关键词：细胞定位

PSMA7对A549细胞表面黏附分子表达的影响被引量：1: 2014年; 目的探讨PSMA7表达量的变化对A549细胞表面黏附分子ICAM-1,VCAM-1和CD44表达的影响。方法采用流式细胞仪分别检测高表达PSMA7的A549细胞[pcDNA3.1(-)/PSMA7组]和低表达PSMA7的A549细胞(shPSMA7组)表面黏附分子ICAM-1,VCAM-1和CD44的表达情况。结果与高表达阴性对照组[pcDNA3.1(-)组]相比,pcDNA3.1(-)/PSMA7组的ICAM-1(t=86.325,P=0.000)和VCAM-1(t=16.337,P=0.000)的表达量均显著降低,CD44表达量则无明显变化(t=-0.545,P=0.615),而与低表达阴性对照组(shNC组)相比,shPSMA7组ICAM-1(t=-119.827,P=0.000)和VCAM-1(t=-26.68,P=0.000)表达量均显著增高,CD44表达量则无明显变化(t=-848,P=0.444)。与pcDNA3.1(-)组相比,pcDNA3.1(-)/PSMA7组穿膜侵袭细胞的数量明显减少(t=3.553,P=0.024),而shPSMA7组明显高于shNC组(t=-3.207,P=0.033)。结论高表达或干扰PSMA7可影响A549细胞表面黏附分子ICAM-1,VCAM-1的表达,提示PSMA7可能因此参与肺腺癌细胞的侵袭和转移。; 黄湘王莹袁春雷谭家余; 关键词：A549细胞黏附分子

靶向抑制UBE2C基因对SMMC-7721细胞生物学行为的影响: 2013年; 目的将构建好的UBE2C干扰质粒转入SMMC-7721细胞中,观察其对SMMC-7721细胞生物学行为的影响。方法采用脂质体法将构建好的UBE2C干扰质粒转入SMMC-7721细胞株中,潮霉素筛选4周,并经Western blot鉴定,选出干扰效果最佳的低表达稳定株(shUBE2C组)用于后续实验。用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂克隆形成实验检测克隆形成能力。结果 Western blot检测显示,转shUBE2C组UBE2C的蛋白表达水平低于转阴性对照shNC组(P<0.05)。shUBE2C组的SMMC-7721细胞生长曲线明显右移,显示靶向抑制UBE2C可降低SMMC-7721细胞的增殖能力。与shNC组相比,shUBE2C组细胞的G1期细胞比例明显增高(P﹤0.05),而S期的比例明显降低(P﹤0.05),提示其延缓细胞周期进程。shUBE2C组的克隆形成率明显低于shNC组(P﹤0.05),提示其降低克隆形成能力。结论 UBE2C低表达可改变SMMC-7721细胞的生物学行为。; 黄湘谭家余李冬秀; 关键词：SMMC-7721细胞增殖细胞周期

RPL5蛋白重组质粒的构建、表达及细胞内定位: 2015年; 目的构建重组质粒载体pc DNA3.1-RPL5,观察核糖体蛋白L5(RPL5)在293T、Hep G2和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法使用基因合成法合成RPL5基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,扩增后的目的基因双酶切后连接至pc DNA3.1载体的Bam HⅠ和NotⅠ位点之间,从而构建重组质粒pc DNA3.1-RPL5。将后者转化DH5α大肠杆菌,培养后挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳、测序比对等鉴定。采用脂质体法将鉴定正确的重组质粒转染至293T、Hep G2和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察RPL5在此3种细胞中的表达和定位情况。结果重组质粒pc DNA3.1-RPL5经酶切电泳及DNA测序比对证实,目的基因RPL5的序列完全正确,重组质粒载体构建成功。激光共聚焦观察发现RPL5主要表达于293T、Hep G2和SMMC7721细胞的胞质中。结论成功构建pc DNA3.1-RPL5融合基因并在293T、Hep G2和SMMC7721细胞中表达,证实RPL5主要表达在真核细胞的细胞质中,为进一步探讨RPL5的生物学功能奠定了基础。; 陈敬林黄湘谭家余钟裕恒李冬秀万志丹; 关键词：重组质粒细胞定位

HSPC238对肝癌细胞中RB基因表达的影响被引量：4: 2016年; 目的观察HSPC238对肝癌细胞中RB mRNA和pRb蛋白水平的影响。方法将PcDNA3.1-HSPC238质粒和PLL3.7-HSPC238干扰载体分别转染HepG2细胞,用实时荧光定量PCR的方法检测RB mRNA的表达量;采用Western blotting法检测pRb蛋白的表达。结果和对照组相比,转染高表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb表达量也增加;相反地,和对照组相比,转染低表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb蛋白的表达量也减少。以上结果差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在HepG2细胞中HSPC238对RB基因的表达存在正向调控作用。; 袁春雷谭家余钟裕恒黄湘陈敬林; 关键词：RB基因肝癌细胞 HEPG2

干扰HSPC238对宫颈癌Hela细胞裸鼠成瘤的促进作用被引量：3: 2017年; 目的观察干扰HSPC238对宫颈癌Hela细胞裸鼠成瘤的影响。方法将PLL3.7-HSPC238干扰载体稳定转染Hela细胞,然后将细胞接种到BALB/c裸鼠前肢腋部皮下,观察肿瘤出现时间及体积变化。结果转染了PLL3.7-HSPC238干扰载体组的裸鼠肿瘤较对照组生长快,肿瘤的体积明显大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论干扰HSPC238对宫颈癌Hela细胞裸鼠成瘤具有促进作用。; 钟裕恒黄湘吴学威梁睿; 关键词：HELA细胞宫颈癌裸鼠

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国家自然科学基金(81101534)

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