国家自然科学基金(31171802)
- 作品数：8 被引量：32H指数：4
- 相关作者：刘永锋尹小乐俞咪娜于俊杰黄磊更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学江西农业大学更多>>
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- 稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588的T-DNA插入位点侧翼基因克隆
- 本研究克隆稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）分生孢子高产突变菌株A2588的TDNA插入突变基因,解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能,为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。研究通过...
- 于俊杰聂亚锋俞咪娜尹小乐黄磊赵洁陈志谊刘永锋
- 关键词：稻曲病菌分生孢子
- 文献传递
- 稻曲病菌突变体B-726生物学性状分析及其T-DNA插入位点侧翼序列的克隆被引量：5
- 2013年
- 【目的】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体库中致病力减弱突变菌株B-726的生物学性状,分析其T-DNA插入位点的侧翼序列,克隆因外源基因插入被破坏正常表达的基因,为明确该基因在稻曲病菌致病过程中的作用奠定基础,并为稻曲病防治新途径的制定提供理论依据。【方法】通过测定突变菌株B-726生长速率、产孢能力及致病力检测,分析其生物学性状;Southern杂交分析B-726外源基因插入的拷贝数;利用HiTail-PCR获得T-DNA插入位点的侧翼序列;运用RACE-PCR技术,克隆与插入位点毗邻的基因全长;用半定量RT-PCR分析该基因表达情况。【结果】突变菌株B-726与野生菌株P1相比致病力极显著下降,产孢能力、生长速率显著下降。Southern杂交结果显示T-DNA在菌株B-726中以单拷贝形式插入。经过序列分析发现,T-DNA插入在1个命名为Uvt-726上游344 bp处,半定量PCR结果表明,Uvt-726在B-726表达量较P1显著下降。【结论】克隆了1个可能与稻曲病菌致病力相关的基因,推断该基因在稻曲病菌致病过程中起着重要的作用。
- 黄磊俞咪娜胡建坤于俊杰尹小乐聂亚锋陈志谊刘永锋
- 关键词：稻曲病菌T-DNA插入突变
- 稻曲病菌产毒突变体生物学性状分析及其T-DNA插入位点分析
- 稻曲病菌[Ustilaginoidea virens(Cooke)Tak.]次生代谢产生的稻曲毒素(Ustiloxins)是一类具有阻断真核细胞有丝分裂活性的环肽毒素,有较强的细胞毒性,对人畜和植物有毒害作用,已成为稻米...
- 尹小乐于俊杰俞咪娜孟祥坤刘永锋
- 关键词：稻曲病菌突变体
- 文献传递
- 稻曲病菌生物学特性研究
- 2022年
- 研究了稻曲病菌厚垣孢子在水中的萌发、菌丝在不同培养基中的生长与产孢、菌核形成条件及厚垣孢子的致病性。结果发现,少数黄色与黑色稻曲球上的厚垣孢子在田间存在萌发现象;黄色球厚垣孢子在清水中2 h即有孢子萌发产生分生孢子,4 h可见部分分生孢子产生次生分生孢子,12 h分生孢子中60%以上产生次生分生孢子。黑色稻曲球上的厚垣孢子萌发与黄色球上的厚垣孢子类似,但萌发起始时间较后者一般晚2 h以上,萌发率和萌发速率也稍低。稻曲病菌培养以PSA培养基生长最好。病菌培养25 d可产生厚垣孢子。江西稻区稻曲球上可产生菌核,但一般年份不常见。结果表明,田间采集的厚垣孢子是诱发稻曲病的有效接种体,推测其应是田间诱发稻曲病的重要初侵染来源和再侵染要素。
- 黄蓉胡建坤李保同刘永锋潘夏艳曹慧娟黄瑞荣
- 关键词：稻曲病稻曲病菌厚垣孢子菌核生物学特性
- 稻曲病菌产毒突变体的筛选
- 稻曲病是由稻曲病菌[Ustilaginoidea virens (Cooke) Tak.]引起的水稻穗部真菌病害,近年来已成为中国乃至世界范围内的水稻主要病害之一.稻曲病菌次生代谢产生的稻曲毒素(Ustiloxins)是...
- 尹小乐于俊杰俞咪娜刘永锋
- 关键词：稻曲病菌突变体H2O2
- 稻曲病菌T-DNA插入突变体B1464插入位点分析被引量：2
- 2015年
- 以稻曲病菌致病力丧失的突变菌株B1464为材料,对其生物学形态和分子遗传变异进行分析。B1464田间接种表现为不致病,与野生型菌株相比,在营养贫瘠的MM培养基上生长速率没有显著差异,而在PSA和TB3培养基中生长速率较慢,并且在PS液体培养基中产孢能力下降,同时突变菌株的分生孢子与野生型相比形态和大小均发生变化。Southern杂交结果显示T-DNA在突变菌株B1464中以单拷贝形式插入,利用TAIL-PCR技术扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻,与野生型菌株基因组比对发现突变菌株插入位点处丢失约20kb的DNA片段。RT-PCR结果表明突变菌株中T-DNA插入位点两侧基因表达量均下调。推断突变菌株B1464的致病能力丧失可能是由于T-DNA的插入导致了染色体重排及破坏了某些基因的正常表达。
- 王亚会刘永锋陆凡俞咪娜黄磊郑梦婷于俊杰尹小乐
- 关键词：稻曲病菌T-DNA插入突变致病力
- 稻曲病菌T-DNA插入突变体5062的插入位点分析被引量：9
- 2013年
- 【目的】研究稻曲病菌致病力增强的ATMT突变菌株5062,为稻曲病菌致病机制解析、致病相关基因克隆提供方法基础。【方法】测定和观察5062的菌落直径、菌落形态、产孢能力等生物学特性,进一步利用TAIL-PCR和RACE技术克隆5062基因组的T-DNA侧翼基因,并比对分析基因的信息,最后利用RT-PCR检测突变基因的表达量。【结果】与野生型菌株相比,突变菌株5062田间接种表现为致病力增强,在MM和水琼脂培养基上生长速率减慢,产生大量分生孢子,而在PSA和TB3培养基上,其菌落形态、色素等方面与野生型无明显差异。TAIL-PCR扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻。TAIL-PCR结合RACE技术克隆了5062基因组的T-DNA侧翼基因,RT-PCR表明T-DNA插入位点右侧1个基因在突变体中上调表达。【结论】突变菌株5062的致病力增强,在营养贫乏条件下产孢能力增强,其表型的变化可能是染色体重排和T-DNA插入共同影响的结果。
- 俞咪娜胡建坤黄磊于俊杰尹小乐聂亚锋陈志谊刘永锋
- 关键词：稻曲病菌致病力T-DNA染色体重排
- 中国主要稻区稻曲病菌的生物学特性及群体遗传多样性被引量：18
- 2014年
- 【目的】明确采自中国10个水稻主产省份111个稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)菌株的生物学特性、群体遗传多样性与地理区域的关系。【方法】采用生物学方法测定111个稻曲病菌菌株的产孢能力、生长速率和致病力,并采用SPSS 20.0软件对稻曲病菌菌株的产孢能力、菌丝生长速率及致病力进行相关性分析。提取111个稻曲病菌基因组DNA,采用3对特异性引物BOX、REP、ERIC对稻曲病菌菌株的全基因组DNA进行PCR扩增,通过聚类分析对其群体遗传多样性进行研究。【结果】111个稻曲病菌菌株的致病力与产孢量的Pearson相关系数为0.765,显著性概率为0.001;致病力与生长速率的Pearson相关系数为0.035,显著性概率为0.685。采用3对特异性引物BOX、ERIC、REP对稻曲病菌菌株的全基因组DNA进行了PCR扩增,群体遗传多样性值分别为0.73、0.62和0.60。111个稻曲病菌菌株的DNA用BOX引物分别扩增出7—13条不等的带谱,DNA指纹相似性在0.70相似水平上,供试菌株被划分为6种基因类群,其中第1类群为优势类型,有57个菌株,占总数的51.4%;来自安徽、四川、广西、湖北和云南的菌株主要划分在类群1和4,第2类群主要是来自江苏的菌株,有18个菌株,占总数的16.2%;第3类群是来自浙江的菌株,有8个菌株,占总数的7.2%;第5类群是来自黑龙江的菌株,有9个菌株,占总数的8.1%,第6类群是来自辽宁的菌株,有12个菌株,占总数的10.8%。稻曲病菌基因类群与地理区域之间有一定的相关性,与致病力、生长速率和产孢量之间没有相关性。【结论】来自中国10个省份的111个稻曲病菌菌株的致病力与产孢量之间具有显著相关性,相关程度为中等;致病力与菌丝的生长速率没有相关性。根据BOX-PCR扩增的稻曲病菌菌株基因组DNA指纹图谱的多态性进行划分的基因类群与地理区域之间显著相关,推测稻曲病菌属于局域性传播;基因类群与生物学特�
- 王文斌张荣胜罗楚平尹小乐刘永锋陆凡陈志谊
- 关键词：稻曲病菌生物学特性地理区域BOX-PCR群体遗传多样性
- 稻曲病菌中和薄壁分生孢子形成相关启动子的克隆及其验证
- 水稻稻曲病是由拟黑粉菌[Ustilaginoidea virens (Cooke.) Takahashi]侵染而引起的一种水稻穗期真菌病害，过去仅在中晚稻田零星发生，曾认为是一种丰产病害，一直不被人们重视.20世纪70年...
- 胡建坤陈志谊于俊杰俞咪娜刘永锋
- 关键词：EGFP启动子
- 稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆被引量：2
- 2014年
- 【目的】研究稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力丧失突变菌株B-1015,克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性,用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数,用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列,用RACE PCR克隆T-DNA标记基因,半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比,突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的降低,孢子萌发率无明显差异,致病力丧失。分子检测结果表明T-DNA在B-1015基因组中为稳定的单拷贝插入。hiTail-PCR得到的T-DNA两端侧翼序列在野生型菌株基因组上不相连,RACE PCR在两边的侧翼序列上分别克隆得到Uvt-1015R和Uvt-1015L。预测分析表明Uvt-1015R包含一个长度为948 bp的开放阅读框(open reading frame finder,ORF),可编码295个氨基酸,5′端非编码区(5′-untranslated regions,5′-UTR)长度为341 bp,3′端非编码区(3′-untranslated regions,3′-UTR)长度为271 bp。Uvt-1015L包含一个长度为351 bp的ORF,可编码116个氨基酸,5′-UTR为31 bp,3′-UTR长度为174 bp。在已知功能的蛋白中检索,没有发现与Uvt-1015R和Uvt-1015L基因同源的蛋白。序列分析发现T-DNA插入在两个基因序列中间,RT-PCR结果显示,在突变菌株B-1015中,Uvt-1015R表达量下降,Uvt-1015L不表达。【结论】稻曲病菌突变菌株B-1015致病力等重要生物学表型发生改变,可能是由于T-DNA的插入导致了B-1015基因组重排和Uvt-1015R、Uvt-1015L基因结构的破坏。
- 黄磊胡建坤俞咪娜于俊杰王亚会郑梦婷郑睿刘永锋
- 关键词：稻曲病菌致病力T-DNA基因克隆
