国家自然科学基金(31171802)
- 作品数:8 被引量:32H指数:4
- 相关作者:刘永锋尹小乐俞咪娜于俊杰黄磊更多>>
- 相关机构:江苏省农业科学院南京农业大学江西农业大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金江西省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- 稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588的T-DNA插入位点侧翼基因克隆
- 本研究克隆稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)分生孢子高产突变菌株A2588的TDNA插入突变基因,解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能,为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。研究通过...
- 于俊杰聂亚锋俞咪娜尹小乐黄磊赵洁陈志谊刘永锋
- 关键词:稻曲病菌分生孢子
- 文献传递
- 稻曲病菌突变体B-726生物学性状分析及其T-DNA插入位点侧翼序列的克隆被引量:5
- 2013年
- 【目的】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体库中致病力减弱突变菌株B-726的生物学性状,分析其T-DNA插入位点的侧翼序列,克隆因外源基因插入被破坏正常表达的基因,为明确该基因在稻曲病菌致病过程中的作用奠定基础,并为稻曲病防治新途径的制定提供理论依据。【方法】通过测定突变菌株B-726生长速率、产孢能力及致病力检测,分析其生物学性状;Southern杂交分析B-726外源基因插入的拷贝数;利用HiTail-PCR获得T-DNA插入位点的侧翼序列;运用RACE-PCR技术,克隆与插入位点毗邻的基因全长;用半定量RT-PCR分析该基因表达情况。【结果】突变菌株B-726与野生菌株P1相比致病力极显著下降,产孢能力、生长速率显著下降。Southern杂交结果显示T-DNA在菌株B-726中以单拷贝形式插入。经过序列分析发现,T-DNA插入在1个命名为Uvt-726上游344 bp处,半定量PCR结果表明,Uvt-726在B-726表达量较P1显著下降。【结论】克隆了1个可能与稻曲病菌致病力相关的基因,推断该基因在稻曲病菌致病过程中起着重要的作用。
- 黄磊俞咪娜胡建坤于俊杰尹小乐聂亚锋陈志谊刘永锋
- 关键词:稻曲病菌T-DNA插入突变
- 稻曲病菌产毒突变体生物学性状分析及其T-DNA插入位点分析
- 稻曲病菌[Ustilaginoidea virens(Cooke)Tak.]次生代谢产生的稻曲毒素(Ustiloxins)是一类具有阻断真核细胞有丝分裂活性的环肽毒素,有较强的细胞毒性,对人畜和植物有毒害作用,已成为稻米...
- 尹小乐于俊杰俞咪娜孟祥坤刘永锋
- 关键词:稻曲病菌突变体
- 文献传递
- 稻曲病菌生物学特性研究
- 2022年
- 研究了稻曲病菌厚垣孢子在水中的萌发、菌丝在不同培养基中的生长与产孢、菌核形成条件及厚垣孢子的致病性。结果发现,少数黄色与黑色稻曲球上的厚垣孢子在田间存在萌发现象;黄色球厚垣孢子在清水中2 h即有孢子萌发产生分生孢子,4 h可见部分分生孢子产生次生分生孢子,12 h分生孢子中60%以上产生次生分生孢子。黑色稻曲球上的厚垣孢子萌发与黄色球上的厚垣孢子类似,但萌发起始时间较后者一般晚2 h以上,萌发率和萌发速率也稍低。稻曲病菌培养以PSA培养基生长最好。病菌培养25 d可产生厚垣孢子。江西稻区稻曲球上可产生菌核,但一般年份不常见。结果表明,田间采集的厚垣孢子是诱发稻曲病的有效接种体,推测其应是田间诱发稻曲病的重要初侵染来源和再侵染要素。
- 黄蓉胡建坤李保同刘永锋潘夏艳曹慧娟黄瑞荣
- 关键词:稻曲病稻曲病菌厚垣孢子菌核生物学特性
- 稻曲病菌产毒突变体的筛选
- 稻曲病是由稻曲病菌[Ustilaginoidea virens (Cooke) Tak.]引起的水稻穗部真菌病害,近年来已成为中国乃至世界范围内的水稻主要病害之一.稻曲病菌次生代谢产生的稻曲毒素(Ustiloxins)是...
- 尹小乐于俊杰俞咪娜刘永锋
- 关键词:稻曲病菌突变体H2O2
- 稻曲病菌T-DNA插入突变体B1464插入位点分析被引量:2
- 2015年
- 以稻曲病菌致病力丧失的突变菌株B1464为材料,对其生物学形态和分子遗传变异进行分析。B1464田间接种表现为不致病,与野生型菌株相比,在营养贫瘠的MM培养基上生长速率没有显著差异,而在PSA和TB3培养基中生长速率较慢,并且在PS液体培养基中产孢能力下降,同时突变菌株的分生孢子与野生型相比形态和大小均发生变化。Southern杂交结果显示T-DNA在突变菌株B1464中以单拷贝形式插入,利用TAIL-PCR技术扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻,与野生型菌株基因组比对发现突变菌株插入位点处丢失约20kb的DNA片段。RT-PCR结果表明突变菌株中T-DNA插入位点两侧基因表达量均下调。推断突变菌株B1464的致病能力丧失可能是由于T-DNA的插入导致了染色体重排及破坏了某些基因的正常表达。
- 王亚会刘永锋陆凡俞咪娜黄磊郑梦婷于俊杰尹小乐
- 关键词:稻曲病菌T-DNA插入突变致病力
- 稻曲病菌T-DNA插入突变体5062的插入位点分析被引量:9
- 2013年
- 【目的】研究稻曲病菌致病力增强的ATMT突变菌株5062,为稻曲病菌致病机制解析、致病相关基因克隆提供方法基础。【方法】测定和观察5062的菌落直径、菌落形态、产孢能力等生物学特性,进一步利用TAIL-PCR和RACE技术克隆5062基因组的T-DNA侧翼基因,并比对分析基因的信息,最后利用RT-PCR检测突变基因的表达量。【结果】与野生型菌株相比,突变菌株5062田间接种表现为致病力增强,在MM和水琼脂培养基上生长速率减慢,产生大量分生孢子,而在PSA和TB3培养基上,其菌落形态、色素等方面与野生型无明显差异。TAIL-PCR扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻。TAIL-PCR结合RACE技术克隆了5062基因组的T-DNA侧翼基因,RT-PCR表明T-DNA插入位点右侧1个基因在突变体中上调表达。【结论】突变菌株5062的致病力增强,在营养贫乏条件下产孢能力增强,其表型的变化可能是染色体重排和T-DNA插入共同影响的结果。
- 俞咪娜胡建坤黄磊于俊杰尹小乐聂亚锋陈志谊刘永锋
- 关键词:稻曲病菌致病力T-DNA染色体重排
- 中国主要稻区稻曲病菌的生物学特性及群体遗传多样性被引量:18
- 2014年
- 【目的】明确采自中国10个水稻主产省份111个稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)菌株的生物学特性、群体遗传多样性与地理区域的关系。【方法】采用生物学方法测定111个稻曲病菌菌株的产孢能力、生长速率和致病力,并采用SPSS 20.0软件对稻曲病菌菌株的产孢能力、菌丝生长速率及致病力进行相关性分析。提取111个稻曲病菌基因组DNA,采用3对特异性引物BOX、REP、ERIC对稻曲病菌菌株的全基因组DNA进行PCR扩增,通过聚类分析对其群体遗传多样性进行研究。【结果】111个稻曲病菌菌株的致病力与产孢量的Pearson相关系数为0.765,显著性概率为0.001;致病力与生长速率的Pearson相关系数为0.035,显著性概率为0.685。采用3对特异性引物BOX、ERIC、REP对稻曲病菌菌株的全基因组DNA进行了PCR扩增,群体遗传多样性值分别为0.73、0.62和0.60。111个稻曲病菌菌株的DNA用BOX引物分别扩增出7—13条不等的带谱,DNA指纹相似性在0.70相似水平上,供试菌株被划分为6种基因类群,其中第1类群为优势类型,有57个菌株,占总数的51.4%;来自安徽、四川、广西、湖北和云南的菌株主要划分在类群1和4,第2类群主要是来自江苏的菌株,有18个菌株,占总数的16.2%;第3类群是来自浙江的菌株,有8个菌株,占总数的7.2%;第5类群是来自黑龙江的菌株,有9个菌株,占总数的8.1%,第6类群是来自辽宁的菌株,有12个菌株,占总数的10.8%。稻曲病菌基因类群与地理区域之间有一定的相关性,与致病力、生长速率和产孢量之间没有相关性。【结论】来自中国10个省份的111个稻曲病菌菌株的致病力与产孢量之间具有显著相关性,相关程度为中等;致病力与菌丝的生长速率没有相关性。根据BOX-PCR扩增的稻曲病菌菌株基因组DNA指纹图谱的多态性进行划分的基因类群与地理区域之间显著相关,推测稻曲病菌属于局域性传播;基因类群与生物学特�
- 王文斌张荣胜罗楚平尹小乐刘永锋陆凡陈志谊
- 关键词:稻曲病菌生物学特性地理区域BOX-PCR群体遗传多样性
- 稻曲病菌中和薄壁分生孢子形成相关启动子的克隆及其验证
- 水稻稻曲病是由拟黑粉菌[Ustilaginoidea virens (Cooke.) Takahashi]侵染而引起的一种水稻穗期真菌病害,过去仅在中晚稻田零星发生,曾认为是一种丰产病害,一直不被人们重视.20世纪70年...
- 胡建坤陈志谊于俊杰俞咪娜刘永锋
- 关键词:EGFP启动子
- 稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆被引量:2
- 2014年
- 【目的】研究稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力丧失突变菌株B-1015,克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性,用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数,用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列,用RACE PCR克隆T-DNA标记基因,半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比,突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的降低,孢子萌发率无明显差异,致病力丧失。分子检测结果表明T-DNA在B-1015基因组中为稳定的单拷贝插入。hiTail-PCR得到的T-DNA两端侧翼序列在野生型菌株基因组上不相连,RACE PCR在两边的侧翼序列上分别克隆得到Uvt-1015R和Uvt-1015L。预测分析表明Uvt-1015R包含一个长度为948 bp的开放阅读框(open reading frame finder,ORF),可编码295个氨基酸,5′端非编码区(5′-untranslated regions,5′-UTR)长度为341 bp,3′端非编码区(3′-untranslated regions,3′-UTR)长度为271 bp。Uvt-1015L包含一个长度为351 bp的ORF,可编码116个氨基酸,5′-UTR为31 bp,3′-UTR长度为174 bp。在已知功能的蛋白中检索,没有发现与Uvt-1015R和Uvt-1015L基因同源的蛋白。序列分析发现T-DNA插入在两个基因序列中间,RT-PCR结果显示,在突变菌株B-1015中,Uvt-1015R表达量下降,Uvt-1015L不表达。【结论】稻曲病菌突变菌株B-1015致病力等重要生物学表型发生改变,可能是由于T-DNA的插入导致了B-1015基因组重排和Uvt-1015R、Uvt-1015L基因结构的破坏。
- 黄磊胡建坤俞咪娜于俊杰王亚会郑梦婷郑睿刘永锋
- 关键词:稻曲病菌致病力T-DNA基因克隆