国家自然科学基金(30070321)
- 作品数：18 被引量：49H指数：3
- 相关作者：马道新刘春生陈学良姜义荣李勇更多>>
- 相关机构：山东大学东莞市人民医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 复制缺陷性慢病毒介导的双自杀基因在小鼠异基因骨髓移植中的应用被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨复制缺陷性慢病毒介导的胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase,CD)和胸苷激酶(thymidinekinase ,TK)双自杀基因在异基因骨髓移植 (allo BMT)时控制移植物抗宿主病 (GVHD)的可行性及其有效性。方法 将携带双自杀基因的复制缺陷性慢病毒通过脂质体转染入T细胞中。将经6 0 Coγ射线照射后的荷瘤小鼠分组进行骨髓移植 ,观察骨髓移植后荷瘤鼠CFU S、CFU GM、Y染色体整合、T细胞中CD +TK基因整合、生存率和生存期、体重及病理组织学等指标。结果 复制缺陷性慢病毒载体可将双自杀基因高效稳定转染入T细胞。在allo BMT中 ,除空白对照组外 ,各组小鼠的CFU S的数目和CFU GM产率差异无显著性 ,且均有Y染色体整合。使用前体药物治疗的小鼠未发生明显的GVHD ,其生存率和生存期明显高于其它各组 ;双自杀基因的效果优于单自杀基因。结论 复制缺陷性慢病毒介导的双自杀基因系统可在不影响移植物存活的情况下有效控制GVHD的发生 ,显著提高allo BMT的成功率。
- 姜义荣陈学良马道新刘春生
- 关键词：自杀基因小鼠异基因骨髓移植脂质体
- CDglyTK自杀基因系统治疗小鼠慢性粒细胞白血病皮下移植瘤的研究
- 2007年
- 为了探讨逆转录病毒介导的CDglyTK自杀基因系统对K562细胞的体内外杀伤作用,将逆转录病毒介导的CDglyTK自杀基因转染入K562细胞,体外实验用MTT法观察5-氟胞嘧啶/丙氧鸟苷(5-fluorocytosine/ganciclovir,5-FC/GCV)对K562/CDglyTK细胞的生长抑制率。体内实验时将K562/CDglyTK细胞和K562细胞接种于裸鼠皮下,使用GCV和5-FC后,观察裸鼠肿瘤体积的变化及裸鼠的生存率。体外实验表明,GCV联合5-FC对K562/CDglyTK细胞具有明显的杀伤作用;体内实验结果显示,皮下注射K562细胞和K562/CDglyTK细胞后小鼠成瘤率无明显区别;使用5-FC/GCV可明显抑制裸鼠体内的肿瘤形成;经5-FC/GCV治疗后K562/CDglyTK组的肿瘤体积较对照组明显缩小,裸鼠生存率也较对照组明显提高。结论:双自杀基因在体内外对K562细胞均有杀伤作用。
- 姜义荣赖应昌陈小林万得胜陈万宁祁妙华刘春生陈学良马道新
- 关键词：双自杀基因慢性粒细胞白血病逆转录病毒载体5-氟胞嘧啶丙氧鸟苷
- 慢病毒携带的双自杀基因对淋巴瘤细胞杀伤作用的实验研究被引量：4
- 2003年
- 背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质粒pCMVΔ8.2、包膜基因质粒pCMV.VSVG、目的基因质粒pHR'CS.GFP或pHR'CS.CDglytk分两组(pHR'CS.Cdglytk为实验组、pHR'CS.GFP为对照组),经脂质体导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染Raji细胞,用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV),用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率,检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用。结果:表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达。单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51%、50%,与未转染组Raji细胞比较,差异有显著性(P<0.01);联合使用5-FC和GCV对细胞的生长抑制率为73%,明显高于单独使用5-FC或GCV(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染淋巴瘤细胞;双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSVtk/GCV)对淋巴瘤细?
- 姜义荣马道新陈学良刘春生
- 关键词：自杀基因淋巴瘤细胞杀伤作用
- TGF-β_1与肝纤维化被引量：13
- 2004年
- 转化生长因子β1(transforminggrowthfactor β1)作为细胞因子TGF β超家族的成员 ,调节多种靶基因的表达 ,在肝纤维化疾病发生发展中起重要作用 ,被认为是最重要的致纤维化因子 。
- 吕品程凤凤陈惠华陆应麟
- 关键词：TGF-Β1转化生长因子靶基因信号转导
- 双自杀基因对Raji淋巴瘤细胞杀伤的增强作用被引量：1
- 2003年
- 目的 :观察反转录病毒介导的双自杀基因对 Raji淋巴瘤细胞的杀伤增强作用 ,探讨淋巴瘤的基因治疗方法。方法 :通过脂质体将含有双自杀基因的反转录病毒载体 p WZL neo CDglytk导入病毒包装细胞 PA317,经 G4 18筛选后大量培养产病毒的阳性克隆 PA317/ CD+ tk细胞株 ,收集病毒上清 ,浓缩后转染 Raji淋巴瘤细胞 ,再次经 G4 18筛选 ,获得稳定表达双自杀基因的 Raji/ CD+ tk细胞株。用RT- PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物 5 -氟胞嘧啶 (5 - flourocytosine,5 - FC)和 /或无环鸟苷(Ganciciovir,GCV)后 ,MTT法测定细胞的存活率及 CDglytk双自杀基因对 Raji细胞的杀伤作用。结果 :双自杀基因在 Raji细胞中可稳定表达 ,联合使用 5 - FC和 GCV时 Raji细胞的存活率 (13.83% )明显低于单独使用 GCV (5 0 .6 5 % )或 5 - FC(5 7.6 8% )时 ,各组比差异具有显著性 (P<0 .0 1)。结论 :反转录病毒介导双自杀基因对
- 姜义荣刘春生马道新陈学良
- 关键词：反转录病毒自杀基因淋巴瘤基因治疗
- 以非复制型HIV为载体进行目的基因转移的实验研究被引量：3
- 2001年
- 目的探讨非复制型HIV作为基因转移载体的有效性,为卵巢癌基因治疗转移方法提供新思路。方法磷酸钙沉淀法将非复制型HIV基因转移载体(pHR'CS)系统中的3种成分质粒共转染入病毒包装细胞293T,荧光显微镜、电镜、荧光分光光度计检测病毒产生情况。病毒上清过滤、浓缩后感染卵巢癌细胞SKOV3和正常人成纤维细胞GF,荧光显微镜下观察感染效果。PCR、RT-PCR鉴定目的基因HSV-tk在靶细胞中的整合转录结果。光镜观察及MTT法测定GCV的体外杀伤效应,计算细胞生长抑制率(GIR)和半数抑制浓度(IC50)。结果荧光显微镜下观察到293T细胞中有大量GFP表达,透射电镜下观察到大量浓缩后病毒颗粒,荧光分光光度计检测到510nm处有一高吸收峰,此非复制型HIV感染卵巢癌细胞SKOV3和正常人成纤维细胞GF后,PCR、RT-PCR均显示600bp的HSV-tk阳性条带。光镜观察到细胞在GCV作用后出现明显形态变化;MTT法显示GCV对转导HSV-tk的SKOV3和GF细胞有显著杀伤作用。结论非复制型HIV可将目的基因高效转移至卵巢癌细胞中,为一种有效的基因转移载体。
- 刘春生宋莉孔北华马道新魏明
- 关键词：基因转移基因疗法
- HCMV pp65和gB联合核酸疫苗表达载体的构建及其体内生物学活性研究被引量：1
- 2005年
- 马道新于修平张晓梅周亚滨李勇贾继辉赵蔚明
- 关键词：HCMVPP65核酸疫苗活性研究GB
- 双自杀基因慢病毒转移系统的建立及其对T淋巴细胞的体外杀伤作用被引量：2
- 2005年
- 目的利用分子生物学方法构建CD和TK双自杀基因慢病毒转移载体。方法将慢病毒基因转移系统中的3种成分质粒(包膜质粒、包装质粒及目的基因转移质粒)用脂质体共转染入病毒包装细胞293T,荧光显微镜下观察;透射电镜下观察病毒颗粒;大量收集病毒上清,浓缩后用之感染T淋巴细胞,荧光显微镜下观察。结果荧光显微镜观察到对照组大量绿色荧光蛋白(GFP);透射电镜证实有大量病毒颗粒存在。单独使用前体药物5-氟脲嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV)后,细胞的存活率与未转染T淋巴细胞比较,差异显著(P<0.01),与单独使用5-FC或GCV比较,联合使用5-FC和GCV时T细胞的存活率明显降低(P<0.01)。结论慢病毒基因转移系统可使双自杀基因发挥强大的杀伤作用,为一种有效的基因转移系统。
- 马道新刘春生陈学良姜义荣李湘新倪淑琴
- 关键词：慢病毒自杀基因T淋巴细胞
- 逆转录病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞的杀伤作用研究被引量：3
- 2003年
- 目的 观察逆转录病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞的杀伤作用 ,探讨淋巴瘤的基因治疗方法。方法 在脂质体的介导下将含有双自杀基因的逆转录病毒载体 pWZLneoCDglytk导入包装细胞PA317,经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA 317/CD +tk细胞株 ,收集病毒上清 ,浓缩后转染Raji淋巴瘤细胞 ,再次经G 418筛选 ,获得稳定表达双自杀基因的Raji/CD +tk细胞株。采用RT -PCR法检测双自杀基因的表达。MTT法测定转基因组及未转基因组Raji细胞的存活率。 结果 双自杀基因在Raji细胞中可稳定表达 ,联合使用 5 -氟胞嘧啶 ( 5 -FC)和无环鸟苷 (GCV )对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应高于单独使用 5 -FC或GCV。
- 姜义荣马道新陈学良刘春生王彦华
- 关键词：淋巴瘤逆转录病毒双自杀基因
- VP22增强人巨细胞病毒pp65核酸疫苗在小鼠体内免疫活性的实验研究被引量：8
- 2005年
- 目的构建人巨细胞病毒(HCMV)主要被膜磷蛋白pp65(HCMVpp65)基因高表达载体以及VP22.pp65联合表达载体,并评价VP22增强pp65核酸疫苗的体内免疫效果。方法8周龄正常BALB/C雌性小鼠分为pcDNA3.pp65组、pVP22.pp65组、实验对照组,每组7只。利用分子克隆技术构建HCMVpp65表达载体pcDNA3.pp65、VP22与pp65融合基因载体pVP22.pp65,免疫小鼠,四甲基偶氮唑蓝法测定T淋巴细胞增殖反应、白细胞介素(IL)2生物学活性,乳酸脱氢酶释放法测定自然杀伤细胞(NK)活性,酶联免疫吸附实验测定血清HCMVIgM、IgG抗体含量、血清及脾细胞培养液中的IL2、IL4含量。结果小鼠的一般状况始终良好,成功构建了HCMV核酸疫苗载体pcDNA3.pp65、pVP22.pp65;免疫小鼠后,两种疫苗T淋巴细胞增殖反应(8周时刺激指数分别为5.11和5.55)和NK细胞活性(12周分别为8.74%和12.08%)及HCMVIgM(6周时A值分别为1.20和1.58)、IgG抗体(6周时A值分别为1.09和1.78)均高于对照组,且pVP22.pp65组高于pcDNA3.pp65组(P<0.05)。小鼠血清中IL2和IL4含量及IL2的生物学活性较低,各组间差异无统计学意义(均P>0.05);小鼠脾细胞上清中IL2和IL4含量以pVP22.pp65组(411.11pg/ml、76.10pg/ml)最高,IL2生物学活性也以pVP22.pp65组(A值为0.22)最高。结论HCMV核酸疫苗无毒性。
- 马道新于修平张晓梅周亚滨李勇贾继辉赵蔚明
- 关键词：人巨细胞病毒PP65核酸疫苗免疫活性T淋巴细胞增殖反应四甲基偶氮唑蓝法分子克隆技术
