国家自然科学基金(30070324)
- 作品数：8 被引量：44H指数：3
- 相关作者：武淑兰卜定方石永进李渊杜红玲更多>>
- 相关机构：北京大学第一医院首都医科大学附属北京潞河医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丁酸钠与5-氮杂-2'-脱氧胞苷协同诱导U266细胞p16基因重新表达被引量：3
- 2002年
- 目的探讨脱乙酰化酶抑制剂丁酸钠(SB)与去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)联合处理经骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法用不同浓度药物处理U266细胞后测定细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期;RT-PCR和Westernblotting检测p16基因mRNA及其蛋白的表达水平。结果单用5-Aza-CdR或SB均抑制细胞生长,联合用药对细胞的抑制作用明显增强;单用5-Aza-CdR或SB对细胞G1期无影响,SB与5-Aza-CdR联合作用发生显著的G1期阻滞;单用0.1μmol/L5-Aza-CdR即可诱导U266细胞p16基因重新表达,随着5-Aza-CdR浓度的增高,p16表达增加,单用SB只能诱导p16基因的弱表达,联合用药明显增强p16基因表达。结论脱乙酰化酶抑制剂SB与去甲基化制剂5-Aza-CdR协同可显著诱导人骨髓瘤细胞U266因高甲基化失活的p16基因重新表达,细胞生长受抑,并使细胞阻滞在G期。
- 杜红玲任立敏陈华朱燕戚豫
- 关键词：P16基因丁酸钠药物协同作用
- 三氧化二砷诱导U266细胞p16基因重新表达被引量：18
- 2004年
- 背景与目的:DNA甲基化调节基因表达,且与肿瘤发生相关,干扰抑癌基因甲基化可能成为防治肿瘤的新途径。细胞内砷代谢和DNA甲基化都需要S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体。本文拟探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的抑癌基因p16重新表达的可能性及其机制。方法:以p16基因高甲基化失活的人骨髓瘤细胞系U266为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用限制性内切酶HpaⅡ及其同裂酶MspⅠ结合PCR技术,检测基因组DNA及p16基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16基因和DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases,DNMTs)mRNA表达;Westernblot技术检测P16蛋白表达。结果:(1)U266细胞具有p16基因高甲基化并失表达的特点,即基因组DNA经MspⅠ酶切后电泳呈“涂抹”现象,而经HpaⅡ酶切后与未经酶切的DNA一样均呈单一条带;经MspⅠ酶切后的DNA不能经PCR扩增出p16基因产物,而HpaⅡ酶切后的DNA与未经酶切的DNA一样均能扩增出340bp的p16基因产物;RT-PCR法检测U266细胞无p16mRNA产物,Westernblot检测也未见P16蛋白带。(2)0.5～2.0μmol/LAs2O3处理后的U266细胞DNA经HpaⅡ酶切后电泳呈“涂抹”现象,也不再能扩增出p16基因产物。1.0μmol/L和2.0μmol/LAs2O3处理的U266细胞还扩增出p16基因mRNA产物;Westernblot也检测到P16蛋?
- 黎金庆李渊石永进武淑兰
- 关键词：DNA甲基化三氧化二砷P16
- 体外试验诱导白血病细胞p15^(INK4B)基因重新表达被引量：1
- 2002年
- 目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂 5 氮杂 2′ 脱氧胞嘧啶 (CdR)与组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丁酸钠 (SB)联合诱导白血病细胞p1 5INK4B基因重新表达的可能性。方法 采用急性髓系白血病细胞系KG1a和 2例原代培养白血病细胞为研究对象 ;限制性内切酶联合PCR技术检测p1 5INK4B基因启动子区甲基化状态 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测p1 5INK4BmRNA的表达 ;Western免疫印迹法检测p1 5INK4B蛋白的表达。结果 受检细胞p1 5INK4B基因启动子区呈高甲基化状态 ,mRNA及蛋白表达完全或部分缺失 ;CdR和SB可单独诱导p1 5INK4B mRNA及蛋白表达 ,且有剂量依赖性 ;低浓度CdR(0 5 μmol/L)联合SB(0 5mmol/L)显著诱导p1 5INK4B 表达 ,其作用高于单用高浓度CdR(1 μmol/L) 或高浓度SB(1mmol/L)。结论 CdR和SB可诱导甲基化失活的白血病细胞p1 5INK4B基因重新表达 。
- 任立敏杜红玲朱强石永进陈华武淑兰
- 关键词：体外试验白血病DNA甲基化组蛋白类
- 急性白血病/骨髓增生异常综合征患者DNA甲基转移酶亚型的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨DNA甲基转移酶 (DNMTs)亚型与急性白血病 (AL)发病及骨髓增生异常综合征 (MDS)向AL转化的关系。方法 半定量逆转录 (RT) PCR技术测定 75例AL/MDS患者的DNMT1、3A及 3B的mRNA表达水平。结果 低危MDS组 (2 1例 )DNMT各亚型的表达升高与正常对照组平均值无统计学差异 ,但以正常对照组平均值的 80 %单侧上界为界 ,则分别为 4 7 6 %、4 7 6 %和 4 2 9% ,高于正常对照 (P <0 0 1)。高危MDS组 (13例 )分别为 5 3 8%、76 9%和 92 3%高于正常对照 (P <0 0 1) ,其中DNMT 3B表达显著高于低危MDS组 (P <0 0 1) ,而DNMT1和 3A表达与低危组差异无显著性。AL组 (41例 )DNMT1、3A及 3B分别为 92 7%、97 6 %和 10 0 %高于正常对照 (P <0 0 1) ,且三种DNMT亚型表达水平均显著高于MDS组 (P <0 0 1)。急性淋巴细胞白血病组DNMT1表达显著高于急性髓细胞白血病组 (P <0 0 1) ,而二组的DNMT3A ,3B表达无统计学差异。结论 DNMTs表达水平的增高与AL的发病及MDS向AL转化过程密切相关 ,并以DNMT3B的关系最为密切。
- 李渊武淑兰卜定方朱燕朱强曹香红
- 关键词：急性白血病骨髓增生异常综合征DNA甲基转移酶RT-PCR琼脂糖凝胶电泳
- 脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合诱导U266细胞凋亡和p16基因重新表达被引量：10
- 2002年
- 背景与目的:DNA甲基化调节基因表达与组蛋白脱乙酰化的作用密切相关,针对这两大途径用药,观察对肿瘤细胞的影响是有意义的。本文探讨脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(sodiumphenylbutyrate,SPB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法:通过透射电镜、DNA梯形条带及流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR和Westernblot检测p16表达水平。结果:单用5-Aza-CdR(1μmol/L)或SPB(1mmol/L)及两药联合诱导的细胞凋亡率分别是15.09%,89.19%和85.18%。单用5-Aza-CdR或SPB对细胞G1期无影响,单用SPB使G2/M期细胞比例增高,联合用药发生明显的G1期阻滞,且出现亚G1期峰达50%。单用PB不能诱导U266细胞p16的表达,单用5-Aza-CdR可诱导p16重新表达,两药联合明显增强p16表达水平。结论:PB与5-Aza-CdR协同可显著诱导U266细胞p16重新表达,细胞阻滞在G1期,并使细胞凋亡发生的时相不同于单独用药组。
- 杜红玲戚豫石永进卜定方武淑兰
- 关键词：细胞凋亡P16基因苯丁酸钠
- 骨髓瘤细胞系U266和急性髓性白血病细胞系KG1a细胞内砷浓度与细胞凋亡的关系被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨骨髓瘤细胞系U266与急性髓性白血病细胞系KG1a细胞内砷浓度与凋亡的关系。方法:用不同浓度三氧化二砷(As2O3)处理U266和KG1a细胞48h,原子吸收光谱法测定细胞内砷浓度,AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡率。结果:随培养液As2O3浓度增加,U266细胞内砷浓度和凋亡率也增加,KG1a细胞无此现象。1.0μmol/LAs2O3处理时U266细胞内砷浓度高于KG1a细胞(P<0.01),2.0μmol/L As2O3处理时U266细胞凋亡率明显高于KG1a细胞(P<0.05)。细胞内砷浓度与凋亡率之间在U266细胞呈正相关(r=0.883,P=0.002),在KG1a细胞无相关(r=0.594,P=0.092)。结论:As2O3可诱导U266细胞凋亡而不能诱导KG1a细胞凋亡,对As2O3的敏感性U266细胞高于KG1a细胞,敏感性不同可能与细胞内砷浓度有关。
- 黎金庆武淑兰
- 关键词：三氧化二砷骨髓瘤急性髓性白血病
- 限制性内切酶结合竞争聚合酶链反应定量检测在多药耐药基因甲基化状态中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的建立定量检测多药耐药基因(MDR1)甲基化状态的方法。方法在MDR1基因启动子区含甲基化位点的-102～+186bp片段间设计1条正义引物和2条反义引物,采用不同的反义引物,经3次聚合酶链反应(PCR)获得较目的片段缺失30bp的竞争内标DNA片段,以Pbluescriptsk+为载体构建竞争内标DNA质粒;待检基因组DNA经甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ消化后与竞争内标DNA竞争扩增MDR1基因;PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析仪扫描,目的片段量等于反应体系中竞争内标量乘以目的片段与竞争内标片段的光密度比值,HpaⅡ酶切与未经酶切标本所得目的片段量的比值为甲基化率。结果倍比稀释的基因组DNA与最佳量竞争内标共扩增MDR1基因启动子区目的片段,两扩增产物量的比值与基因组DNA量呈显著正相关,相关系数r=0.992,P<0.001。结论本方法用于MDR1基因甲基化定量检测,操作相对简单,定量准确可靠,适用于临床研究中大量样本检测。
- 朱燕武淑兰屈晨雪卜定方
- 关键词：多药耐药基因限制性内切酶甲基化状态MDR1基因DNA质粒
- DNMT3B基因启动子单核苷酸多态性C46359T与急性白血病的关系被引量：8
- 2005年
- 目的探讨DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与急性白血病 (AL)发病的关系.方法采用PCR-RFLP结合DNA测序技术检测160例AL患者及240例正常对照DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性.结果中国汉族人中CT杂合型的频率为2.5%,TT纯合型的频率为97.5%,未检出CC纯合型;与美国白种人的基因型分布(三种基因型频率分别为41.8%、23.2% 和35.0%)存在显著差异(P<0.001).在160例初发的成人AL患者中CT杂合型的频率为10.6%,明显高于正常对照组(2.5%),P<0.001,提示在AL患者中CT基因型是一个高发现象.正常人中CT基因型发生AL的危险性是TT基因型的4.669倍(OR=4.669, 95%可信区间为1.700～14.747),说明CT基因型与AL的发生有一定的相关性.结论 DNMT3B基因启动子-149位CT基因型与AL发病相关;中国汉族人的DNMT3B基因启动子-149位基因型分布与美国白种人有显著不同.
- 李渊戴悦武淑兰裴珮曹香红卜定方
- 关键词：白血病单核苷酸多态性基因启动子急性白血病基因型频率基因型分布
