烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金(2006A-3)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：鲁秀敏王永堂余瑛朱枫杨艳红更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆工学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
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- 大鼠p75NTR荧光真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建大鼠p75神经营养素受体(p75neurotrophin receptor,p75NTR)cDNA序列的绿色荧光真核表达载体并鉴定其在人胚肾293(human embryo kidney 293,HEK293)细胞中的表达。方法:采用PCR方法从含野生型大鼠p75NTR的pDC316-RP75质粒中扩增目的片段,经EcoRI和SalI双酶切,定向克隆于pEGFP-N1质粒中,构建绿色荧光真核表达载体pEGFP-N1-RP75,经酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,激光共聚焦及免疫组织化学法鉴定大鼠p75NTR的表达。结果:重组质粒经酶切鉴定和序列分析证实含有大鼠p75NTR的编码序列,转染后经激光共聚焦显微镜及免疫组织化学染色观察表明重组质粒能够在HEK293细胞中表达出具有活性的大鼠p75NTR片段。结论:大鼠p75NTR绿色荧光真核表达载体构建成功并可在HEK293细胞中表达,为进一步研究奠定了基础。
- 王永堂鲁秀敏朱枫曾琳龙在云伍亚民
- 关键词：荧光HEK293细胞
- 人p75NTR荧光真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2008年
- 构建了人p75神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)cDNA序列的绿色荧光真核表达载体,并鉴定其在人胚肾293(human embryo kidney 293,HEK293)细胞中的表达.采用PCR方法从含人p75NTR的pDC316-HP75质粒中扩增目的片段,经EcoRI和SalI双酶切,定向克隆于pEGFP-N1质粒中,构建绿色荧光真核表达载体pEGFP-N1-HP75,经酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,激光共聚焦及Western blot法鉴定人p75NTR的表达.结果表明,酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有人p75NTR编码序列,转染实验表明,重组质粒能够在HEK293细胞中表达出具有活性的人p75NTR片段.
- 鲁秀敏朱枫黄鹏余瑛王永堂
- 关键词：荧光HEK293细胞
- 大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元凋亡及其机制研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨大鼠坐骨神经损伤后雪旺细胞（schwann cells，SCs）中核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）的表达及其对脊髓运动神经元凋亡的调控作用。方法健康成年雄性SD大鼠36只，体重200～250g，随机分为正常对照组（n=-6）和坐骨神经钳夹损伤组（n=30）。采用免疫组化、计算机图像分析技术，对正常和损伤后不同时间1、3、7、14及21d的坐骨神经SCs中NF—κB的表达进行检测。同时取与坐骨神经相连的L4～L6段脊髓作原位末端标记技术（TUNEL）检测脊髓运动神经元的凋亡。结果与正常对照组相比较，损伤组坐骨神经SCs中NF—κB的表达显著改变，其变化趋势为先升高后降低，伤后3d达高峰。随后逐渐下降，21d接近正常值；损伤组脊髓运动神经元凋亡数在损伤后表现出相同的变化趋势。相关分析表明两者呈显著正相关。结论坐骨神经损伤后脊髓运动神经元发生不同程度的凋亡，SCs中NF—κB可能参与这种凋亡的调控过程。
- 鲁秀敏王永堂余瑛杨艳红
- 关键词：坐骨神经核因子-ΚB运动神经元凋亡
