贵州省科技攻关计划(2008)
- 作品数：25 被引量：108H指数：6
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- 亚洲带绦虫六钩蚴Ta8基因的克隆表达及免疫原性分析
- 2012年
- 目的原核克隆表达亚洲带绦虫六钩蚴8kDa基因(Ta8),探索其表达蛋白在检测亚洲带绦虫感染中的应用价值。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫六钩蚴cDNA中获取Ta8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论成功地构建了亚洲带绦虫六钩蚴8kDa基因重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中获得了成功表达;证明了8kDa基因表达产物具有免疫原性;还发现该绦虫成虫的头节、成节、孕节中也存在8kDa基因。
- 王宇程金芝黄江戴佳琳陈小睿廖兴江
- 关键词：亚洲带绦虫六钩蚴基因克隆原核表达免疫原性
- 肌球蛋白轻链去磷酸化调节的钙依赖及非依赖途径对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉压及右心室重构的影响
- 2015年
- 目的观察抑制肌球蛋白轻链（MLC）去磷酸化的钙依赖及非依赖2条途径对大鼠高肺血流性肺动脉高压及右心室重构的影响，了解同时干预2条途径是否有叠加效应。方法经腹主动脉．下腔静脉穿刺建立高肺血流动物模型，将雄性sD大鼠50只按数字表法随机分为5组：假手术组、模型组、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）抑制剂干预组[M组，ML-73mg／（kg·d）]、Rho／Rho激酶抑制组[F组，法舒地尔（Fasudil）20mg／（kg·d）]、双重抑制组[M＋F组，ML-73mg／（kg·d）＋Fasudil20mg／（kg·d）]，给药8周；8周后测定大鼠平均右心室压（MRVP）、平均肺动脉压（MPAP）及右心室肥大指数和下腔静脉宽度的改变。结果与假手术组比较，模型组大鼠术后8周MRVP、MPAP明显增加[（4．19±0．67）kPa比（2．65±0．57）kPa；（4．04±0．61）kPa比（2．42±0．48）kPa；F＝295．368、263．912，P均〈0．01]，右心室肥大指数，即右心室（RV）与左心室加室间隔（LV＋s）的比值增加[（O．41±0．03）g／g比（0．21±0．01）g／g；F=247．024，P〈0．05]；予MLCK及Rho激酶抑制剂干预后，MRVP及MPAP明显降低[MRVP：M组（3．51±0．47）kPa比模型组（4．19±0．67）kPa；MPAP：F组（3．68±0．55）kPa比模型组（4．19±0．67）kPa；P均〈0．01]，RV/（LV＋s）降低[M组：（0．29±0．02）g／g，模型组：（0．41±0．03）gCg，F组：（0．30±0．03）g／g；F=247．024，P均〈0．05]；两药合用后，逆转肺动脉压力及右心室肥大的作用更强（P〈0．05）。结论MLC去磷酸化的钙依赖及非依赖2条途径都能在一定程度上减轻高肺血流型大鼠肺动脉高压及右心室肥大的发展，同时干预2条途径能产生叠加效应。
- 杨永曜杨天和蒋清安
- 关键词：肌球蛋白轻链去磷酸化高肺血流肺动脉高压
- 亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因克隆、表达及纯化被引量：3
- 2009年
- 目的扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)Spef1-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spef1-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spef1-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达。结论成功克隆了亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因,并表达和纯化了Spef1-Like蛋白,为研究Spef1-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据。
- 王杰戴佳琳黄江吴璇廖兴江申萍香周灵贵杜武英郎书源
- 关键词：亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
- 电子鼻在辣椒粉风味评价中的应用被引量：5
- 2014年
- 实验选取聚乙烯(PE)膜真空包装、PE膜常压包装、铝塑复合膜常压包装,黑曲霉、唾液乳杆菌、反刍真杆菌沾染的辣椒粉为分析样品,采用电子鼻对其风味品质进行测试。结果显示:电子鼻传感器对辣椒粉挥发性风味物质具有较高的灵敏度和稳定性。PE膜真空包装、PE膜常压包装、铝塑复合膜常压包装,黑曲霉、唾液乳杆菌、反刍真杆菌沾染的辣椒粉样品之间的相似度分别为100%,61.85%,56.16%,26.69%,21.64%,31.17%,其分析结果较为真实地反映了样品间的风味特性。
- 王知松丁筑红蒋智纲高瑞萍张孝刚
- 关键词：辣椒粉风味评价电子鼻
- 不同处理方法对野生地八角硬实种子发芽率的影响被引量：13
- 2012年
- 为探索打破种子硬实的最佳方法,提高发芽率,采用5种不同方法对地八角硬实种子进行处理。结果表明:擦破种皮处理效果最好,发芽率达91.33%;其次是饲料机处理,发芽率为68.67%;98%浓硫酸浸种20min,发芽率达66.00%;80℃和100℃热水浸种10min,发芽率分别达24.00%和24.67%;40%氢氧化钠浸种对地八角种子的发芽率无影响。
- 赵相勇孟军江吴佳海
- 关键词：种子硬实处理发芽率野生植物
- 生态恢复背景下喀斯特地区植被覆盖的时空变化——以黔中地区为例被引量：19
- 2014年
- 为了揭示退耕还林(草)、封山育林和石漠化综合治理等生态恢复工程驱动下喀斯特地区的植被覆盖度的时空变化情况,以黔中为研究区,利用2000年、2005年和2010年三期的MODIS影像数据,通过NDVI像元二分模型法,对研究区植被覆盖进行了动态变化评估。结果表明:2000年到2010年,极高植被覆盖度面积持续增长,高植被覆盖度面积持续减少,极低植被覆盖度、低植被覆盖度和中等植被覆盖度面积先增后减,植被覆盖总体呈现转好趋势;此外,植被覆盖景观斑块数减小,平均斑块面积增大,香农多样性指数减小,表明这一时期内植被覆盖景观的破碎化程度逐渐降低,生态恢复工程取得良好实效。
- 杨世凡安裕伦
- 关键词：生态恢复植被覆盖度
- 定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞及神经元样细胞的研究被引量：2
- 2009年
- 目的分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),体外诱导分化为神经元样细胞及脂肪细胞。方法取SD大鼠股骨和胫骨骨髓,经贴壁筛选法体外分离、培养并纯化MSCs。通过倒置显微镜进行细胞形态学观察和流式细胞术进行分析。地塞米松和胰岛素诱导MSCs向脂肪细胞分化,采用油红O染色鉴定;在含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),二甲基亚砜(DMSO)和3-叔丁基-4羟基茴香醚(BHA)培养基中诱导MSCs向神经元样细胞分化,通过免疫细胞化学法鉴定诱导后细胞神经元烯醇化酶(NSE)、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果倒置显微镜下观察到分离培养的骨髓间充质干细胞大小均匀,基本上呈梭形或星形的上皮样细胞,传代培养后的细胞体积增大,成纤维样细胞逐渐增多。MSCs传至第3代采用流式细胞仪检测CD71、CD29呈阳性表达;经油红O染色证实,第5代MSCs经诱导后分化为脂肪细胞;而免疫细胞化学证实MSCs经诱导后分化为神经元样细胞,表达NSE、Nestin,不表达GFAP。结论在体外,大鼠MSCs可诱导分化为脂肪细胞、神经元样细胞,证明其具有多向分化潜能,是组织工程研究中最有前途的种子细胞之一。
- 汪浩文何志旭王志华刘俊峰
- 关键词：间充质干细胞骨髓脂肪细胞神经元样细胞
- 亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析被引量：11
- 2009年
- 目的通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据。方法用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果该基因全长1090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26973.8,等电点为5.96。生物信息分析揭示,Ta CRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功。结论发现亚洲牛带绦虫Ta CRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。
- 戴鹏戴佳琳黄江廖兴江郎书源周灵贵申萍香
- 关键词：亚洲牛带绦虫分子克隆原核表达
- 猪带绦虫成虫烯醇酶基因的生物信息学分析被引量：2
- 2011年
- 目的分析猪带绦虫成虫烯醇酶（enolase,Ts ENO）基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。方法利用生物信息网站如美国国家生物技术信息中心（NCBI）和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（ExPASY）中生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,从获得猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库的表达序列标签（expression sequence tag,EST）中识别Ts ENO基因,分析该基因的结构并预测其编码的蛋白质的结构和功能特征。结果该基因与亚洲带绦虫烯醇酶基因的一致性为98%,相似性为99%;全长1 725bp,编码区为202~1162bp,编码320个氨基酸,为全长基因。无各种亚细胞定位序列,预测该蛋白为跨膜蛋白,与吸虫属的进化关系较近。结论从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出烯醇酶基因,预测为跨膜蛋白,可能具有较好的免疫诊断抗原应用前景。
- 刘玉江王宇黄江
- 关键词：猪带绦虫烯醇酶CDNA生物信息学
- 骨桥蛋白在低钙和燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的 观察骨桥蛋白（OPN）在低钙和氟中毒大鼠肾组织中的表达,探讨OPN与氟中毒肾损害的关系.方法 1月龄Wistar大鼠48只,雌雄各半,体质量80～100 g.按2×2析因设计将大鼠按质量随机分为4组：对照组、高氟组、低钙组、低钙高氟组,每组12只,雌雄各半.采用合成饲料喂养,高氟组和低钙高氟组饲料中的玉米来自燃煤污染型氟中毒病区,含氟量为100 mg/kg,对照组和低钙组饲料中的玉米来自于非病区,含氟量为5 mg/kg.喂养16周后处死大鼠,观察各组大鼠牙齿变化,计算大鼠氟斑牙检出率.取大鼠肾脏,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾脏OPN蛋白和OPN mRNA表达.结果 对照组和低钙组牙齿生长良好,高氟组、低钙高氟组大鼠均出现明显的氟斑牙,氟斑牙检出率为100%.免疫组化结果表明,OPN主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞中.对照组和低钙组肾组织OPN阳性细胞淡染、散在分布,高氟组与低钙高氟组OPN阳性细胞着色较深,广泛分布在肾小管上皮细胞中.OPN蛋白表达显示,高氟组（168.64±13.21）和低钙高氟组（169.26±8.92）高于对照组（145.78±10.26,P均〈0.01）和低钙组（149.60±16.84,P均〈0.01） OPN mRNA表达显示,高氟组（1.89±0.37）和低钙高氟组（1.94±0.22）高于对照组（1.32±0.26,P均〈0.05）和低钙组（1.30±0.18,P均〈0.05）.高氟影响OPN蛋白和OPN mRNA表达（F=13.821、4.24,P均〈0.05）,低钙不影响OPN蛋白和OPN mRNA表达（F=2.164、0.58,P均〉0.05）,但高氟和低钙联合作用时,二者对OPN蛋白和OPN mRNA表达有交互作用（F=6.257、4.32,P均〈0.05）.结论 过量氟可促使大鼠肾组织的OPN表达增加,提示OPN与氟中毒肾损害程度密切相关,可考虑作为一种氟中毒肾损害的标志,并且,高氟与低钙同时存在时,大鼠肾损害会进一步加重,提示低钙是氟化物损害肾脏的重要环节.
- 刘继灿王佳琪于燕妮
- 关键词：骨桥蛋白氟化物钙
