中国博士后科学基金(20090460949)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：杨东亮吴珺陈明发夏幼辰孙潺更多>>
- 相关机构：华中科技大学南昌大学第二附属医院华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- Toll样受体介导小鼠原代肝细胞产生的天然免疫应答及其对乙型肝炎病毒复制的抑制作用被引量：9
- 2011年
- 目的探讨肝细胞的Toll样受体（TLR）信号途径及其诱导的抗病毒免疫应答。方法分离野生型C57BL／6小鼠的原代肝细胞，定量逆转录一聚合酶链反应法检测TLR的表达。分别用TLR1～9配体刺激肝细胞并收集细胞上清液。酶联免疫吸附法检测细胞上清液内的细胞因子。病毒保护实验检测细胞上清液的抗脑膜炎心肌炎病毒因子，并将细胞上清液与HBV-Met细胞共孵育，用Southernblot法检测其对HBV复制的抑制效应。结果原代肝细胞能表达TLR1～9。与其TLR表达谱相应的，肝细胞在TLR1～9配体的刺激下均可以产生炎性细胞因子（肿瘤坏死因子α和白细胞介素6），而仅在TLRl、TLR3、TLR7和TLR9配体刺激下可产生I型干扰素（干扰素α和干扰素β）。在病毒保护实验中，TLR3和TLR7的配体可以刺激肝细胞产生大量的抗脑膜炎心肌炎病毒效应分子；而TLRl、TLR3和TLR4配体直接刺激的肝细胞上清液，以及TLR3、TLR7和TLR9配体转染刺激的肝细胞上清液，都能有效抑制HBV的复制。结论小鼠原代肝细胞有独特的TLR信号途径，并能通过TLR配体的激活产生抑制HBV复制的效应。这一发现对于制定基于TLR的抗肝脏靶向性病毒的治疗措施有指导意义。
- 吴珺陈明发夏幼辰郭艳林永孙潺张春燕陈妍刘慎沛郝友华陆蒙吉JorgF.Schlaak杨东亮
- 关键词：肝细胞TOLL样受体免疫肝炎病毒
- NOD1和NOD2介导的信号通路及其抗病毒免疫应答研究进展被引量：4
- 2013年
- NOD1和NOD2蛋白为胞浆内模式识别受体，其识别进入胞内的细菌胞壁及其降解产物，介导NF—KB和MAPKs信号途径，产生相关效应分子，介导了抗病原微生物免疫应答。近年来的最新研究发现，NOD1受体还通过ISGF3信号途径诱导产生1型干扰素，NOD2受体能识别ssRNA和病毒基因组ssRNA，通过MAVs信号途径激活IRF3，诱导产生1型干扰素，1型干扰素又可正向调控NOD1和NOD2功能性表达。NOD1和NOD2通过介导新的信号途径诱导产生大量的1型干扰素，并参与抗病毒固有免疫应答。因而，对NOD1和NOD2介导的抗病毒免疫应答新认识，将为防治病毒感染性疾病的研究提供新策略。
- 陈明发吴珺杨东亮
- 关键词：信号通路固有免疫
- NOD1/2介导的信号通路及其抗病原微生物免疫应答的研究进展被引量：3
- 2014年
- NOD1/2蛋白为胞质内的模式识别受体,识别进入胞内的细菌胞壁及其降解产物,介导NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径。NOD1受体还通过干扰素刺激基因因子3(ISGF3)信号途径诱导产生1型干扰素,NOD2受体能识别ssRNA和病毒基因组ssRNA,通过线粒体抗病毒信号蛋白(MAV)信号途径而激活干扰素调节因子3(IRF3)。它们分别参与了抗细菌、抗病毒、抗寄生虫等病原微生物免疫应答。对NOD1和NOD2受体的进一步认识,为研究相关病原感染和慢性炎症性疾病的防治措施提供了新的思路。
- 陈明发吴珺杨东亮
- 关键词：信号通路固有免疫
- 丙型肝炎病毒1b型NS3基因扩增方案的改进
- 2012年
- 目的优化扩增武汉地区HCV1b型患者HCV非结构蛋白3(NS3)的cDNA,并进行测序。方法从患者血清中提取HCVRNA,采用型特异性引物扩增分型法检测HCV患者基因分型。设计3对外侧引物和3对内侧引物,采用套式PCR技术(方案一)分别扩增HCV1b型患者的HCVNS33个区段,然后用3对内侧引物进行测序。为了优化NS3扩增和测序效果和减少操作繁琐,对引物进行改进,设计1对外侧引物和1对内侧引物,采用改进的套式PCR技术(方案二)直接扩增HCV1b型患者的HCVNS3区,然后用3个正向引物和1个逆向引物进行测序。结果改进的套式PCR技术(方案二)与套式PCR技术(方案一)相比,操作较为简单,而且扩增效率增高,扩增效果较好。结论采用改进的套式PCR技术(方案二)扩增和测序HCVNS3区更迅速、有效、实用。
- 柯晓煜丁红晖郭燕陈明发林永夏幼辰孙潺杨东亮吴珺
- 关键词：HCVNS3套式PCR
- CXCR3基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型的建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立CXCR3基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型。方法繁育CXCR3基因敲除小鼠,并抽提组织DNA进行聚合酶链反应及凝胶电泳鉴定基因型。CXCR3基因敲除小鼠纯合子9只与野生型C57BL/6小鼠9只同时高压水注射pAAV/HBV1.2质粒,按既定时间点采血检测HBsAg、HBeAg、HBV DNA,以及取肝组织行免疫组织化学检测HBcAg表达。结果本实验室繁殖的CXCR3基因敲除小鼠均为纯合子基因型。在pAAV/HBV1.2质粒转染后第1天,CXCR3基因敲除小鼠与野生型C57BL/6小鼠血清HBsAg水平分别为1134.69±244.42和1759.63±881.20(P=0.096);第4天分别为5305.29±1395.06和7493.29±658.63(P=0.003);第15天分别为1615.04±1187.16和1536.19±1046.02(P=0.905);第40天为229.45±79.27和228.19±295.02(P=0.996);第1天血清HBeAg水平分别为6.65±1.50和20.61±4.03(P=0.000);第4天为6.33±1.61和9.79±2.31(P=0.007);第15天为3.52±1.97和2.85±0.74(P=0.425);第40天为1.28±0.06和1.90±1.01(P=0.431);第10天血清HBVDNA水平分别为4.38±0.22 lgcopies/ml和6.56±0.16lgcopies/ml(P=0.008);第15天为4.41±0.88lgcopies/ml和5.69±0.04lgcopies/m(l P=0.177);第25天为4.48±0.04lgcopies/ml和6.44±0.16lgcopies/ml(P=0.004);第40天为3.66±0.45lgcopies/ml和5.20±0.28lgcopies/ml(P=0.055);两组血清HBV DNA持续存在,在转染后第40天仍为阳性。肝组织HBcAg持续阳性,在转染后第4天、15天和40天均呈高表达,但CXCR3基因敲除小鼠肝组织HBcAg表达较低。结论我们成功建立了CXCR3基因敲除小鼠慢性HBV复制模型,可用于进一步研究CXCR3基因及其配体与HBV感染的关系。
- 陈明发吴珺夏幼辰林永孙潺杨东亮
- 关键词：慢性乙型肝炎CXCR3趋化因子
