国家自然科学基金(30370925)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：浙江省农业科学院浙江大学更多>>
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- GUS为负标记的稻瘟病菌目标基因替换突变体双筛选体系(英文)被引量：3
- 2009年
- 目标基因替换是基因功能研究的重要方法,在生物工程领域广泛应用。为了提高真菌目标基因替换的效率,以稻瘟病菌为研究对象,建立了一种以gusA基因为负筛选标记的目标基因替换突变体双筛选体系(GUS-DS)。首先,检测了78个真菌菌株的内源GUS活性,发现除3个菌株外均呈阴性。同时,将gusA基因导入稻瘟病菌、镰刀病菌、炭疽病菌后,转化子可获得高的GUS活性。表明gusA可用作真菌中的筛选标记。然后,以gusA为负标记,HPH为正标记,以过氧化物酶体定位信号受体基因MGPEX5与MGPEX7的替换为例,建立稻瘟病菌GUS-DS体系。对潮霉素抗性筛选获得的转化子通过GUS活性检测进一步筛选,呈阴性者为可能突变体。通过PCR与Southern杂交对可能突变体进行验证,以此评估GUS-DS的筛选效率。结果表明GUS-DS将Δmgpex5与Δmgpex7的筛选效率由原来的65.8%和31.2%分别提高到90.6%和82.8%。另外,还建立了一种适合于GUS-DS的多重PCR法(M-PCR)用于突变体的验证。通过扩增目标位点的不同区段,可以有效区分突变体、野生型和随机插入转化子。M-PCR法验证突变体简便、迅速,可信度与Southern杂交相同。GUS-DS及M-PCR为功能基因组学及生物工程的研究提供了有力的工具。
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- 关键词：GUS活性
- 丝状真菌目标基因替换过程中的策略与方法被引量：7
- 2007年
- 目标基因替换是基因功能分析的重要手段。随着基因组测序和转化技术的进展,该技术在丝状真菌功能基因组学中的应用越来越广泛,新的体系与方法不断建立和完善。文章在转化体系、打靶载体构建、突变体筛选等方面综述了丝状真菌目标基因替换过程中的策略与方法,并对各方法的优缺点及发展趋势进行了评述。
- 王教瑜杜新法柴荣耀孙国昌林福呈
- 关键词：丝状真菌基因功能分析
