国家自然科学基金(30672308)
- 作品数：7 被引量：39H指数：5
- 相关作者：付勇龚树生陈请国薛秋红谢静更多>>
- 相关机构：华中科技大学首都医科大学咸宁学院更多>>
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- 强噪声暴露后大鼠听觉电生理及形态学改变被引量：16
- 2008年
- 目的:观察强噪声暴露后大鼠听觉电生理及形态学的改变,为探讨噪声性聋的发病机制提供实验依据。方法:大鼠随机分为对照组和实验组,实验组暴露于中心频率为4kHz的窄带噪声中,给声强度为120 dBSPL,暴露时间为4h。观察2组听觉脑干诱发电位(ABR)及耳蜗形态学的变化。结果:实验组出现ABR反应阈上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);暴露后第1天,基底膜铺片经DNA荧光染料碘化丙锭染色后示:实验组3排外耳毛细胞(OHC)中可出现不同的毛细胞细胞核形态变化(正常、凋亡、坏死和缺失),而第21天未见明显的细胞凋亡;OHC的缺失2组差异有统计学意义(P<0.01),螺旋神经节细胞计数2组差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜示:实验组OHC纤毛异常(散乱、倒伏)及OHC的缺失,以第3排OHC最严重。结论:所应用的强噪声能引起大鼠听觉系统的损害,产生永久性阈移(PTS)。该噪声条件下,耳蜗毛细胞的死亡模式在暴露后早期包括凋亡和坏死,而晚期则主要是坏死;PTS的产生可能和OHC纤毛异常及OHC的缺失有关。
- 付勇龚树生薛秋红王国鹏陈请国
- 关键词：噪声凋亡坏死荧光染色
- 大鼠胚胎神经干细胞分离培养及基因感染研究被引量：3
- 2007年
- 目的建立基因工程化神经干细胞(neural stemcells,NSCs)以便为治疗感音神经性聋的研究创造条件。方法分离、培养胎鼠海马组织神经干细胞,并用巢蛋白(nestin)免疫荧光组织化学染色鉴定;诱导神经干细胞分化,用神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光组织化学染色鉴定分化细胞。通过细菌内同源重组方法构建携带有报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组腺病毒(Ad-GFP),并将其感染神经干细胞。结果①获得了大量未分化、呈巢状悬浮生长的神经干细胞团,并能分化为神经元和神经胶质细胞,且经传代培养10代后仍具干细胞特性;②97%以上的神经干细胞能被腺病毒感染;③被腺病毒感染的神经干细胞分化为神经元和神经胶质细胞后仍可有效表达GFP报告基因。结论本实验成功构建了携带GFP基因的重组腺病毒。从胚鼠海马组织分离、培养的细胞具有自我更新能力和多潜能分化能力,为中枢神经系统的干细胞,经基因工程化及传代后,仍具干细胞特性,可以作为细胞移植治疗感音神经性聋试验研究的供体细胞。
- 付勇龚树生刘英鹏薛秋红
- 关键词：神经干细胞细胞培养重组腺病毒
- 神经干细胞与乳鼠基底膜共培养后分化为毛细胞样细胞的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨体外培养和鉴定胚胎大鼠神经干细胞及诱导其分化为毛细胞样细胞。方法从SD系胚鼠大脑分离神经干细胞,在无血清培养基中培养。取乳鼠基底膜与神经干细胞一起培养,14～21天后通过免疫荧光和免疫组化法检测毛细胞标志物myosin VIIa和calretinin。结果培养的神经干细胞胞体透亮,折光性好,Nestin鉴定阳性。诱导分化后的细胞免疫荧光和免疫组化示myosin VIIa和calretinin阳性。结论无血清条件下能培养出活性很好的神经干细胞,乳鼠基底膜能引导其朝毛细胞方向分化。
- 陈请国付勇王显红吴小慧谢静李哲文龚树生
- 关键词：神经干细胞基底膜分化
- 大鼠神经干细胞生长及增殖规律的体外研究被引量：5
- 2008年
- 目的：体外无血清条件下培养胚鼠神经干细胞，观察其生长及分化情况。方法：取孕16～18d SD系大鼠的胚胎海马组织，在含EGF、bFGF和B27的DMEM／F12培养基中培养，电子显微镜下观察其增殖分化过程，并通过免疫荧光方法鉴定分化后的细胞类型。结果：神经干细胞在无血清培养基中生长旺盛，8d左右就可以形成胞体透亮、折光性好的干细胞球，分化后的细胞显示NSE、GFAP免疫阳性。结论：无血清培养条件下神经干细胞生长良好，而在含血清的培养基中可以分化为神经元和星形胶质细胞。
- 陈请国付勇王显红吴小慧朱锐李泽文龚树生
- 关键词：胚鼠无血清培养基神经干细胞分化
- 胚胎大鼠神经干细胞的分离培养和鉴定及标记被引量：5
- 2007年
- 目的:探索胚胎大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记的方法。方法:分离胚胎大鼠海马组织,用无血清培养技术培养神经干细胞,免疫组织化学荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;5-溴脱氧尿嘧啶(BrDU)掺入试验,并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况。采用荧光染料Hoechest33342标记神经干细胞并诱导其分化,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学荧光染色鉴定分化细胞。结果:①获得大量未分化呈巢状悬浮生长的神经干细胞团,并能分化为神经元和神经胶质细胞,且经传代培养8代后仍具干细胞特性;②荧光染料的标记率可达97%,细胞传8代后荧光亮度无明显衰减,并且分化后的细胞核中仍有荧光表达。结论:成功培养出胚胎大鼠神经干细胞,培养出的细胞具有增殖、自我更新及核多潜能分化能力,可分化为神经元及神经胶质细胞;荧光染料的标记可获得较高的标记率,可作为神经干细胞移植实验研究的供体细胞。
- 付勇龚树生薛秋红刘英鹏鄢开胜
- 关键词：神经干细胞细胞培养胚胎大鼠
- 大鼠胚胎神经干细胞经蜗窗移植到正常耳蜗的研究被引量：6
- 2008年
- 目的探讨感染携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）报告基因的重组腺病毒（recombinant adenovirus with GFP，Ad-GFP））的大鼠胚胎神经干细胞（neural stem cell，NSC）经蜗窗径路移植到正常大鼠耳蜗后的存活、分布及报告基因的表达情况，并检测移植后大鼠听力和耳蜗形态结构的变化。方法大鼠随机分为三组：组Ⅰ（感染Ad—GFP的NSC移植组）10只，组Ⅱ（人工外淋巴注射组）10只，组Ⅲ（空白对照组）10只。组Ⅰ及组Ⅱ的手术径路均为经蜗窗途径；两组移植前后分别测试大鼠听性脑干反应（ABR），了解其听力的改变；移植后14d在荧光显微镜下观察耳蜗中轴切片中感染Ad-GFP的NSC的存活、分布及报告基因的表达情况，并通过耳蜗切片HE染色及基底膜铺片硝酸银染色观察耳蜗形态结构及毛细胞数目的变化。结果组Ⅰ及组Ⅱ术后ABR反应阈分别为（33．5±3．4）dB和（32．5±3．5）dB，与移植前相比差异均无统计学意义（P值均〉0．05），两组术后ABR反应阈间的差异亦无统计学意义（t=0．526，P〉0．05）。两组大鼠术后耳蜗形态结构均正常。组ⅠNSC移植入耳蜗14d后，存活的细胞主要分布在耳蜗底回的前庭阶和鼓阶，耳蜗其他各回的前庭阶和鼓阶中也有存活，同时表达强烈的绿色荧光。三组均出现耳蜗外毛细胞的散在缺失，总缺失率均未超过1％，且三组各回的缺失率及总缺失率之间的差异均无统计学意义（P值均〉0．05）；三组耳蜗各回均未见内毛细胞的缺失。结论感染Ad-GFP的NSC经蜗窗径路移植到正常大鼠耳蜗后可以存活并表达GFP基因，移植对大鼠听反应阈及耳蜗形态结构无明显影响。
- 付勇汪审清王建亭王国鹏谢静龚树生
- 关键词：干细胞移植耳蜗
- 胚胎大鼠神经干细胞体外培养及分化为类毛细胞的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨体外培养和鉴定胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)及诱导其分化为类毛细胞。方法从SD系胚鼠大脑分离NSCs,在无血清培养基中培养,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导其分化为神经元和星形胶质细胞:将NSCs球放到含鼠尾胶原包被的盖玻片6孔培养板中培养,然后将乳鼠基底膜体外培养后汲取其上清液与NSCs一起培养,14～21天后通过免疫荧光和免疫组化法检测毛细胞标志物肌球蛋白(myosin)Ⅶa和钙视网膜蛋白(calretinin)。结果培养的NSCs胞体透亮,折光性好,分化后的细胞免疫组化示神经元特异性烯醇化酶、胶原纤维酸性蛋白、myosinⅦa和calretinin阳性。结论在无血清条件下能培养出活性很好的NSCs,并且能诱导其分化为神经元、星形胶质细胞和类毛细胞。
- 陈请国龚树生付勇王显红吴小慧谢静李欣李泽文
- 关键词：胚胎干细胞毛细胞
