国家高技术研究发展计划(2003AA2Z3480)
- 作品数：18 被引量：55H指数：5
- 相关作者：饶春明王军志韩春梅史新昌张翊更多>>
- 相关机构：中国药品生物制品检定所军事医学科学院中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 抗DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其抗体的鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。
- 杨婉娟高凯饶春明叶波平王军志
- 关键词：DNA单克隆抗体
- HPLC-ESI-Q-TOF-MS鉴定重组人白细胞介素-11的一级结构被引量：8
- 2006年
- 用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的一级结构。利用电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定rhIL-11的精确分子质量,采用高效液相-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)测定其胰蛋白酶酶切后肽段的部分氨基酸序列并结合数据库检索进行结构鉴定。rhIL-11的实测分子质量为19 047.38 u,与理论分子质量19 047.29 u相比非常接近。HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS测定m/z664.45、m/z609.40的肽段的部分氨基酸序列分别为Glu-Pro-Glu-Leu-Gly-Thr-Leu和Leu-Asp-Ser-Thr-Val-Leu。将这两段序列在MASCOT数据库检索,结果表明rhIL-11的结构正确。
- 杨英饶春明王威张翊韩春梅王军志
- 关键词：液质联用重组人白细胞介素-11分子质量氨基酸序列
- 重组人白介素12质量标准与检测方法研究
- 2006年
- 目的:建立白介素12的质量标准与检测方法,用于该产品的质量控制。方法:采用诱导 PBMC 生成 IFN-γ的方法测定生物学活性;用胰酶酶解分析肽图;用分子排阻 HPLC、离子交换 HPLC 和 SDS-PAGE 法分析蛋白纯度;免疫印迹及 N 端氨基酸序列测定分析、鉴定产品特性。按照《中国药典》三部2005年版的有关规定进行了其他项目检查。结果:用建立的方法对重组人白介素12成品及原液进行检定,结果各项指标均符合《中国药典》的要求。结论:建立了重组人白介素12的质量标准,并可有效地控制制品的质量。
- 王威李永红饶春明杭太俊王军志
- 关键词：生物学活性
- 重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白质量控制方法与质量标准研究
- 2007年
- 研究建立重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)质量控制方法和质量标准。采用针对Jurkat细胞表面CD2分子的竞争结合试验测定融合蛋白的体外活性,以分子筛和离子交换色谱分别确定制品纯度,将制品还原、羧甲基化后再以胰蛋白酶裂解并经反相高效液相色谱进行肽图分析,采用ELISA法分别测定蛋白A与CHO宿主细胞蛋白残留量。建立了重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白生物学活性、理化特性与残留杂质等质量控制方法和质量标准。所建立的质量控制方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)的质量控制与产品检定。
- 高凯韩春梅丁有学侯盛饶春明王军志
- 关键词：自身免疫疾病
- 睫状神经营养因子突变体蛋白的活性研究被引量：11
- 2007年
- 为了进一步研究应用计算机分子模拟设计并表达纯化的睫状神经营养因子突变体蛋白的生物学活性,分别采用鸡胚背根神经节无血清培养法、TF-1细胞增殖法、正常小鼠减重法对其活性进行研究。结果表明突变体蛋白能促进鸡胚背根神经节的生长;促进TF-1细胞增殖,MTT测定法表明突变体蛋白与国际参考品相比,比活不低于2.0×106U/mg;使正常小鼠的体重减轻,摄食量减少,脂肪指数下降,并且体重的减轻与突变体蛋白的给药剂量呈现良好的剂量依赖关系,其ED50为:150.986μg/(kg·d)。以上实验表明CNTF突变体蛋白具有促神经生长、促TF-1细胞增殖和减重的生物学活性,为其进一步的应用和开发提供了依据。
- 毕华袁力勇史新昌赵阳刘兰饶春明王军志
- 关键词：睫状神经营养因子突变体活性研究
- 重组水蛭素生物学活性检测参考品的制备和标定被引量：4
- 2005年
- 目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性。方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测。结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%。经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%。在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月。结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测。
- 丁有学张翊郭莹韩春梅刘兰饶春明王军志
- 关键词：重组水蛭素生物学活性参考品标定方法凝血酶抑制剂
- 睫状神经营养因子突变体的克隆、表达、纯化及生物学活性被引量：3
- 2007年
- 目的设计具有更高生物学活性的睫状神经营养因子突变体,并对其进行表达、纯化及生物学活性检测。方法以计算机分子模拟系统设计突变体,重叠延伸PCR方法获得突变体的编码区DNA序列,克隆入表达载体pThioHisA,转化E.coliBL21,以IPTG诱导表达。复性纯化后,用鸡胚背根神经节无血清培养法和小鼠减重法进行生物学活性测定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,表达量在35%以上,纯化后的纯度达95%以上,能有效地促进鸡胚背根神经节的生长,并能使正常小鼠的体重降低,脂肪指数下降。结论所设计的突变体经表达及纯化后,具有良好的生物学活性,为进一步研究突变体蛋白的促神经生长和减肥作用奠定了基础。
- 毕华袁力勇史新昌李永红赵阳饶春明王军志
- 关键词：睫状神经营养因子突变体克隆生物学活性
- 重组人白细胞介素-1受体拮抗剂质量控制研究被引量：1
- 2007年
- 目的建立重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1ra)的质控方法和标准。方法采用黑色素瘤A375.S2细胞杀伤中和试验测定rhIL-1ra的生物学活性,还原型SDS-PAGE测定相对分子质量,SDS-PAGE和反相高效液相色谱测定纯度,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按《中国药典》三部(2005版)规定进行。结果用建立的质控方法对rhIL-1ra原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2005版)的要求。结论建立的质控方法和标准可保证产品安全有效,可用于rhIL-1ra的检定。
- 高凯史新昌丁有学韩春梅张翊饶春明王军志
- 关键词：受体拮抗剂
- 注射用重组人睫神经营养因子质控方法和质量标准研究被引量：2
- 2009年
- 目的:建立重组人睫神经营养因子的质控方法和质量标准。方法:以TF-1.CN5a1细胞株/MTT比色法测定重组人睫神经营养因子的生物学活性,还原型SDS-PAGE测定相对分子质量,SDS-PAGE和反相高效液相色谱法测定纯度,快速电泳法测定等电点,胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按中国药典2005年版三部进行。结果:用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2005年版三部的要求。结论:所建立的质控方法和质量标准可用于重组人睫神经营养因子产品的常规检定。
- 赵阳毕华韩春梅李响饶春明
- 重组人白介素-12生物学活性检测方法的建立被引量：5
- 2006年
- 目的建立重组人白介素-12(rhIL-12)的生物学活性检测方法。方法采用重组人白介素-12刺激外周血淋巴细胞分泌IFN-γ,并用国际标准品校正,进行生物学活性检测。结果用该方法对重组人白介素-12成品及原液进行检测,成品比活性平均值为1037460IU/mg,变异系数为26·0%(n=5);原液比活性平均值为1262270IU/mg,变异系数为16·8%(n=5)。结论该方法检测结果准确、客观,重复性好,可用于重组人白介素-12生物学活性的常规检测。
- 王威饶春明王军志
- 关键词：生物学活性外周血淋巴细胞
