上海市自然科学基金(10zr1422600)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
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- Ⅱ型肺泡上皮细胞转染Napsin A基因对肺纤维化的干预作用被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨Napsin A基因转染至Ⅱ型肺泡上皮细胞对肺纤维化的作用和机制.方法 采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞染色体中并鉴定.予转化生长因子β1（TGF-β1）刺激A549细胞构建体外肺纤维化模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化 用MTT法检测A549细胞转基因前后受TGF-β1刺激情况下增殖能力的变化,并绘制生长曲线 分别用RT-PCR和Western印迹方法检测未转基因和转基因A549细胞被TGF-β1干预后其表达E钙蛋白和纤维连接蛋白基因和蛋白水平的变化,以判断其发生上皮-间质转化（EMT）的情况 用Western印迹方法检测A549细胞转基因前后表达黏着斑激酶（FAK）蛋白量的变化,探讨Napsin A干预肺纤维化的机制.结果 重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A基因和蛋白均显著高于非转基因细胞组（P＜0.01）.细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,提示体外构建肺纤维化模型成功.MTT法检测转基因细胞在TGF-β1诱导下其增殖速度减慢（P＜0.05） E钙蛋白的基因和蛋白表达水平在体外肺纤维化模型中明显下调（E钙蛋白mRNA：A549-PLJM1：0.77±0.09,A549-PLJM1-Napsin A：0.79±0.03,A549＋TGF-β1：0.41±0.05,A549-PLJM1＋TGF-β1：0.40±0.05 E钙蛋白分别为：0. 76±0.06,0.73±0.09,0.20±0.05,0. 22±0.03,P＜0.01）,相反纤维连接蛋白则明显上调（P＜0.01）,但转染Napsin A基因后其变化幅度减小（P＜0.01,P＜0.05）.体外肺纤维化模型中,细胞FAK蛋白表达量增多（A549：0.49±0.04,A549-PLJM1：0.50±0.06 A549-PLJM1-NapsinA：0.48±0.08 A549＋TGF-β1：3.49±0.61 A549-PLJMI＋TGF-β1：3.54±0.25,P＜0.01）,但转基因细胞上调趋势显著小于未转基因细胞组（P＜0.01）.结论 转染Napsin A基因至Ⅱ型肺泡上皮细胞可以抑制肺纤维化,其作用机制可能�
- 郑金旭管淑红许清汤艳刘继柱吕晓婷
- 关键词：肺纤维化NAPSIN上皮-间质转化
