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国家自然科学基金(30070370)

作品数：9 被引量：14H指数：3
相关作者：张忠明马立安江涛王芳更多>>
相关机构：华中农业大学长江大学更多>>
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相关领域：生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 7篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 3篇拟南芥
  • 2篇电转化
  • 2篇电转化法
  • 2篇细胞
  • 2篇RNAI载体
  • 2篇RT-PCR
  • 2篇超表达
  • 2篇RAN
  • 2篇RNAI
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白纯化
  • 1篇亚细胞
  • 1篇亚细胞定位
  • 1篇印迹
  • 1篇英文
  • 1篇有丝分裂
  • 1篇原核表达
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学功能
  • 1篇双杂交系统

机构

  • 9篇长江大学
  • 9篇华中农业大学

作者

  • 9篇马立安
  • 9篇张忠明
  • 3篇江涛
  • 1篇王芳

传媒

  • 5篇长江大学学报...
  • 2篇华中农业大学...
  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇Agricu...

年份

  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 2篇2008
  • 5篇2007
共 9 条 记 录，以下是 1-9
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排序方式：
拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记被引量：2
2007年
将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。
马立安江涛张忠明
关键词：抗血清免疫印迹
拟南芥PhrIP1基因超表达、GFP和RNAi载体的构建被引量：1
2007年
根据编码拟南芥成膜素相关蛋白(PhrIP1)基因cDNA全序列设计超表达引物,以1～1000bp之间序列设计GFP引物和序列内部第24～240bp之间序列设计RNAi引物,以pMD18-T-PhrIP1为模板,用PCR方法分别扩增出1.8kb、1.0kb和0.216kb的片段,分别克隆至双元表达载体、GFP载体和RNAi载体上,得到了植物超表达载体pBI-PhrIP1、GFP载体pMON-GFP-PhrIP1和RNAi载体Hellsgate2-PhrIP1。用电转化法,将这些重组质粒导入农杆菌GV3101菌株中,PCR扩增结果表明所构建的植物超表达载体pBI-PhrIP1、GFP融合载体pMON-GFP-PhrIP1和RNAi载体Hellsgate2-PhrIP1已导入农杆菌。
马立安张忠明
关键词：RNAI载体电转化法
用酵母双杂交系统筛选与拟南芥成膜素相关蛋白(PhrIP1)相互作用的蛋白质
2007年
用酵母双杂交系统,以pEG202-PhrIP1为诱饵筛选拟南芥AD-cDNA文库,寻找与成膜素相关蛋白(PhrIP1)相互作用的蛋白质。结果表明,在5×106个转化子中得到6个阳性克隆,经测序及体外蛋白质相互作用证实,得到与PhrIP1相互作用的2个靶蛋白,即Ran2小GTP结合蛋白和CIPK6钙调节激酶。
马立安王芳张忠明
关键词：酵母双杂交系统
3种植物Ran基因的克隆及序列分析被引量：1
2009年
[目的]研究洋葱、大蒜和油菜中Ran基因与拟南芥Ran2基因的同源性,以确定3种植物材料能否作为拟南芥的替代材料研究Ran的定位。[方法]采用RT-PCR方法,以拟南芥Ran2的引物分别从洋葱、大蒜和油菜分裂细胞提取的总RNA中克隆出同源基因,进行测序、比对分析。[结果]洋葱、大蒜和油菜的Ran基因开放阅读框分别为666、663和666bp;分别编码221、220和221个氨基酸,分子量约24.3kD;与拟南芥AtRan2氨基酸序列同源性分别为99.1%、100.0%(除末端缺少1个天冬氨酸D外)和96.4%;进化树分析显示洋葱和大蒜Ran基因与拟南芥进化关系更近。[结论]为进一步研究植物Ran基因的生物学功能奠定了基础。
马立安张忠明
关键词：RT-PCR
拟南芥Ran小GTP结合蛋白在细胞有丝分裂中的定位被引量：3
2008年
分别采用RT-PCR和直接荧光免疫方法分析Ran2 mRNA在拟南芥不同组织器官中的表达及Ran2的亚细胞定位。结果表明,Ran2基因在拟南芥根、茎、叶和花中均有表达;Ran2蛋白在细胞分裂间期主要定位于核膜周边,在后期定位于赤道板上和纺锤体上,末期又回到子细胞核膜周边。
马立安江涛张忠明
关键词：亚细胞定位
拟南芥Ran2基因超表达和RNAi载体的构建被引量：2
2007年
根据编码拟南芥小GTP结合蛋白的Ran2基因cDNA全序列设计超表达引物和序列内部第397-610bp之间序列设计RNAi引物,以pMD18-T-Ran2为模板,用PCR方法分别扩增出666bp和214bp的片段,分别连接至双元表达载体和RNAi载体上,得到了植物超表达载体pBI-Ran2和RNAi载体Hellsgate2-Ran2,并用电转化法导入农杆菌GV3101菌株中,PCR扩增结果表明所构建的植物超表达载体pBI-Ran2和RNAi载体Hellsgate2-Ran2已导入农杆菌。
马立安张忠明
关键词：RNAI载体电转化法
拟南芥Ran2基因的原核表达及产物的纯化被引量：6
2007年
采用RT-PCR方法扩增Ran2cDNA完整的编码区序列,构建pTYB2-Ran2重组质粒,转化大肠杆菌ER2566,经IPTG诱导蛋白表达后SDS-PAGE分析表达产物及存在形式。结果表明,表达的蛋白26ku与预期的理论值一致,并以包涵体形式存在;包涵体经纯化、破碎变性、复性及PBS透析,得到纯度较高的表达蛋白(Ran2)。
马立安江涛张忠明
关键词：原核表达蛋白纯化
3种植物Ran基因的克隆及序列分析(摘要)(英文)被引量：1
2010年
[目的]研究洋葱、大蒜和油菜中Ran基因与拟南芥Ran2基因的同源性,以确定3种植物材料能否作为拟南芥的替代材料研究Ran定位。[方法]采用RT-PCR方法,以拟南芥Ran2的引物分别从洋葱、大蒜和油菜分裂细胞提取的总RNA中扩增出相应片段DNA(AcRan,AsRan,BnRan),经凝胶电泳回收相应PCR产物,克隆到pMD18-T载体上,转化到DH5α中,抽提质粒,经酶切、PCR鉴定确定阳性克隆,将阳性克隆的菌体进行测序、比对分析。[结果]洋葱、大蒜和油菜的Ran基因开放阅读框分别为666、663和666bp;分别编码221、220和221个氨基酸,分子量约24.3kD;与拟南芥AtRan2氨基酸序列同源性分别为99.1%、100%(除末端缺少1个天冬氨酸D外)和96.4%;进化树分析显示洋葱和大蒜Ran基因与拟南芥进化关系更近,其根尖可代替拟南芥根尖研究Ran基因的定位或相关生物学功能。将该实验克隆的3种植物Ran基因序列与收集的14种植物的Ran序列共28种进行氨基酸同源性比对及进化树分析表明,高等植物Ran基因绝大多数在进化树中处于同一位置,同源性高达90%以上(拟南芥AtRan4和水稻OsRan4例外),因此,它们可能在植物细胞分裂过程中起着相似的作用;且3种植物在受动结合域(EBD)和酸性末端(AT)存在不同;而拟南芥AtRan4缺少这2个功能域,可能与AtRan1～3具有不同的作用。[结论]为进一步研究植物Ran基因的生物学功能奠定了基础。
马立安张忠明
关键词：RT-PCR
Ran的GTPase活性及其生物学功能研究进展被引量：3
2008年
核内小分子GTP结合蛋白(a small nuclear GTP-binding protein,Ran)是一种分布于真核细胞核内含量十分丰富的小分子GTP酶,是Ras基因大家族中的一员。Ran具有多种生物学功能,参与调节核物质转运,调控核膜装配、纺锤体组装、DNA复制、RNA转录、加工和运输、细胞周期及LPS信号传导等。
马立安张忠明
关键词：纺锤体组装DNA复制细胞周期
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