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国家自然科学基金(30070370)

作品数:9 被引量:14H指数:3
相关作者:张忠明马立安江涛王芳更多>>
相关机构:华中农业大学长江大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金美国国家科学基金更多>>
相关领域:生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 7篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 3篇拟南芥
  • 3篇RAN
  • 2篇电转化
  • 2篇电转化法
  • 2篇细胞
  • 2篇RNAI载体
  • 2篇RT-PCR
  • 2篇超表达
  • 2篇RNAI
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白纯化
  • 1篇亚细胞
  • 1篇亚细胞定位
  • 1篇印迹
  • 1篇有丝分裂
  • 1篇原核表达
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学功能
  • 1篇双杂交系统
  • 1篇周期

机构

  • 9篇长江大学
  • 9篇华中农业大学

作者

  • 9篇马立安
  • 9篇张忠明
  • 3篇江涛
  • 1篇王芳

传媒

  • 5篇长江大学学报...
  • 2篇华中农业大学...
  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇Agricu...

年份

  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 2篇2008
  • 5篇2007
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记被引量:2
2007年
将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。
马立安江涛张忠明
关键词:抗血清免疫印迹
拟南芥PhrIP1基因超表达、GFP和RNAi载体的构建被引量:1
2007年
根据编码拟南芥成膜素相关蛋白(PhrIP1)基因cDNA全序列设计超表达引物,以1~1000bp之间序列设计GFP引物和序列内部第24~240bp之间序列设计RNAi引物,以pMD18-T-PhrIP1为模板,用PCR方法分别扩增出1.8kb、1.0kb和0.216kb的片段,分别克隆至双元表达载体、GFP载体和RNAi载体上,得到了植物超表达载体pBI-PhrIP1、GFP载体pMON-GFP-PhrIP1和RNAi载体Hellsgate2-PhrIP1。用电转化法,将这些重组质粒导入农杆菌GV3101菌株中,PCR扩增结果表明所构建的植物超表达载体pBI-PhrIP1、GFP融合载体pMON-GFP-PhrIP1和RNAi载体Hellsgate2-PhrIP1已导入农杆菌。
马立安张忠明
关键词:RNAI载体电转化法
用酵母双杂交系统筛选与拟南芥成膜素相关蛋白(PhrIP1)相互作用的蛋白质
2007年
用酵母双杂交系统,以pEG202-PhrIP1为诱饵筛选拟南芥AD-cDNA文库,寻找与成膜素相关蛋白(PhrIP1)相互作用的蛋白质。结果表明,在5×106个转化子中得到6个阳性克隆,经测序及体外蛋白质相互作用证实,得到与PhrIP1相互作用的2个靶蛋白,即Ran2小GTP结合蛋白和CIPK6钙调节激酶。
马立安王芳张忠明
关键词:酵母双杂交系统
3种植物Ran基因的克隆及序列分析被引量:1
2009年
[目的]研究洋葱、大蒜和油菜中Ran基因与拟南芥Ran2基因的同源性,以确定3种植物材料能否作为拟南芥的替代材料研究Ran的定位。[方法]采用RT-PCR方法,以拟南芥Ran2的引物分别从洋葱、大蒜和油菜分裂细胞提取的总RNA中克隆出同源基因,进行测序、比对分析。[结果]洋葱、大蒜和油菜的Ran基因开放阅读框分别为666、663和666bp;分别编码221、220和221个氨基酸,分子量约24.3kD;与拟南芥AtRan2氨基酸序列同源性分别为99.1%、100.0%(除末端缺少1个天冬氨酸D外)和96.4%;进化树分析显示洋葱和大蒜Ran基因与拟南芥进化关系更近。[结论]为进一步研究植物Ran基因的生物学功能奠定了基础。
马立安张忠明
关键词:RT-PCR
拟南芥Ran小GTP结合蛋白在细胞有丝分裂中的定位被引量:3
2008年
分别采用RT-PCR和直接荧光免疫方法分析Ran2 mRNA在拟南芥不同组织器官中的表达及Ran2的亚细胞定位。结果表明,Ran2基因在拟南芥根、茎、叶和花中均有表达;Ran2蛋白在细胞分裂间期主要定位于核膜周边,在后期定位于赤道板上和纺锤体上,末期又回到子细胞核膜周边。
马立安江涛张忠明
关键词:亚细胞定位
拟南芥Ran2基因超表达和RNAi载体的构建被引量:2
2007年
根据编码拟南芥小GTP结合蛋白的Ran2基因cDNA全序列设计超表达引物和序列内部第397-610bp之间序列设计RNAi引物,以pMD18-T-Ran2为模板,用PCR方法分别扩增出666bp和214bp的片段,分别连接至双元表达载体和RNAi载体上,得到了植物超表达载体pBI-Ran2和RNAi载体Hellsgate2-Ran2,并用电转化法导入农杆菌GV3101菌株中,PCR扩增结果表明所构建的植物超表达载体pBI-Ran2和RNAi载体Hellsgate2-Ran2已导入农杆菌。
马立安张忠明
关键词:RNAI载体电转化法
拟南芥Ran2基因的原核表达及产物的纯化被引量:6
2007年
采用RT-PCR方法扩增Ran2cDNA完整的编码区序列,构建pTYB2-Ran2重组质粒,转化大肠杆菌ER2566,经IPTG诱导蛋白表达后SDS-PAGE分析表达产物及存在形式。结果表明,表达的蛋白26ku与预期的理论值一致,并以包涵体形式存在;包涵体经纯化、破碎变性、复性及PBS透析,得到纯度较高的表达蛋白(Ran2)。
马立安江涛张忠明
关键词:原核表达蛋白纯化
Cloning and Sequence Analysis of Three Plant Ran Genes被引量:1
2010年
[Objective]The aim was to study homology between Ran gene in Allium cepa,Allium sativum and Brassica napus and Ran2 gene in Arabidopsis in order to determine whether three kinds of plant material as substitute for Arabidopsis. [Method]By using RT-PCR method,homology gene was cloned from totoal RNA which extracted from splinter cells of Allium cepa,Allium sativum and Brassica napus with Arabidopsis Ran2 primer,then,carrying out sequence and comparative analysis. [Result]The results showed that the open reading frames of Ran genes in Allium cepa,Allium sativum and Brassica napus were 666,663,666 bp,coding 221,220 and 221 amino acids respectively,with the molecular weight of 24.3 kDa. The sequence analysis showed that the amino acid homology of Ran genes between Allium cepa,Allium sativum,Brassica napus and Arabidopsis Ran2 were respectively 99.1 %,100 % (except an Asp D at Allium sativum C terminal),96.4 %. The phylogenetic tree indicated that Ran genes from Allium cepa and Allium sativum had closer evolutionary relationship with Arabidopsis Ran2. [Conclusion]The research laid a foundation for further study on the biological function of plant Ran gene.
马立安张忠明
关键词:RT-PCR
Ran的GTPase活性及其生物学功能研究进展被引量:3
2008年
核内小分子GTP结合蛋白(a small nuclear GTP-binding protein,Ran)是一种分布于真核细胞核内含量十分丰富的小分子GTP酶,是Ras基因大家族中的一员。Ran具有多种生物学功能,参与调节核物质转运,调控核膜装配、纺锤体组装、DNA复制、RNA转录、加工和运输、细胞周期及LPS信号传导等。
马立安张忠明
关键词:纺锤体组装DNA复制细胞周期
共1页<1>
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