国家自然科学基金(31171737)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 相关作者：张建华钱炳俊崔青姚晓敏郭梦琦更多>>
- 相关机构：上海交通大学上海海洋大学西南大学更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 纳豆芽孢杆菌rocG基因和ure基因敲除载体的构建被引量：1
- 2013年
- rocG基因和ure基因分别编码纳豆芽孢杆菌中2个与产氨相关的酶——谷氨酸脱氢酶编码和尿素酶。为构建这2个基因的敲除载体,通过PCR分别获得了2个靶基因的上下游旁邻片段和抗性筛选基因nisI。将上游旁邻片段、nisI和下游旁邻片段按次序克隆到革兰氏阳性菌基因组整合质粒pMUTIN4中。限制性内切酶酶切图谱分析及测序结果显示成功构建了纳豆芽孢杆菌rocG基因和ure基因的敲除载体pMUTIN4-rocG::nisI和pMUTIN4-ure::nisI。该质粒的构建,为同源重组获得低产氨纳豆芽孢杆菌工程菌株奠定了基础。
- 黄蓓吴旭蕾钱炳俊张建华
- 关键词：纳豆芽孢杆菌URE基因敲除载体
- 纳豆激酶的制备及其改性研究进展被引量：4
- 2016年
- 纳豆激酶(EC 3.4.21.62)是纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵产生的一种丝氨酸蛋白酶,在体外和体内均具有强烈的纤维蛋白溶解活性。提高纳豆激酶的产量及其稳定性和经口服后的生物利用度具有重要的研究意义,该文综述了野生菌、基因工程菌及动植物细胞发酵/培养制备纳豆激酶的方法,及其稳定性和生物利用度等性能改善方面的研究进展,并对纳豆激酶研究的发展前景进行了展望。
- 季顺利蔡俊秀崔青钱炳俊姚晓敏张建华
- 关键词：纳豆激酶改性
- 纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析被引量：3
- 2017年
- 纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增B.subtilis natto的aprN基因,并依据B.subtilis的密码子偏好性优化了起始30个氨基酸的密码子,构建了重组表达质粒pHT01-aprN。经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B.subtilis,利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。经IPTG诱导表达,摇瓶发酵培养最高酶活力为(289.00±3.42)U/mL,是野生菌的3.9倍,酶活力表达稳定性良好。
- 崔青钱炳俊姚晓敏季顺利鲁飞凤吴静张建华
- 关键词：纳豆激酶基因工程菌酶活力
- 纳豆激酶基因工程菌的构建及高密度发酵
- 血栓引起的发病率和死亡率的比重越来越高,溶栓剂是治疗的最有效药物,但当前临床使用的溶栓剂都存在一些缺点,溶栓剂仍需要不断被开发和改进,尤其是预防性的食源性的溶栓剂很有必要。纳豆激酶(nattokinase,NK)最早来自...
- 崔青
- 关键词：纳豆激酶基因工程菌高密度发酵
- 文献传递
- 纳豆芽孢杆菌脲酶酶学性质的研究
- 2015年
- 为了研究不同的碳源、氮源和不同的培养条件对纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)脲酶产量的影响,以及不同温度、pH和几种金属离子对脲酶活性的影响,采用了滴定法(国标法,标准号GB/T 1356787-1997)和Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定不同碳源、氮源和不同培养条件培养的纳豆芽孢杆菌(CGMCC No.2801)脲酶总活性和浓度,以及不同温度、pH和金属离子条件下的脲酶活性。结果表明,当以谷氨酸为氮源、蔗糖为碳源、pH7、37℃条件下培养12h时脲酶的浓度最高,为57.2μg/mL。脲酶催化反应的最适条件为35℃、pH 7。实验选用的5种金属离子对脲酶活性均有抑制作用,抑制强度为Cu2+>Zn2+>Fe2+>Mg2+>Mn2+,最大抑制率为36.4%。这些结果为纳豆芽孢杆菌脲酶的进一步研究及低产氨纳豆芽孢杆菌的构建奠定了基础。
- 宋光艳崔青钱炳俊张建华
- 关键词：纳豆芽孢杆菌脲酶酶活
- HPLC-TOF/MS测定茶籽粕中的茶皂素主要成分被引量：6
- 2013年
- 利用高效液相色谱-电喷雾-飞行时间质谱（HPLC—ESI—TOF／MS）在负离子模式下成功检测了荼籽粕中提取的茶皂素。高效液相色谱分析茶皂素超纯品得到5个主要皂苷峰，出峰时间分别为4．01、19．52、27．74、29．23和34．01min，各吸收峰峰形对称，由此可见茶皂素组分在该条件下能够得到较好分离。不同浓度荼皂素的定量曲线表明5个峰的峰面积与茶皂素含量的线性回归方程相关系数r值均在0．99以上。ESI—TOF／MS质谱分析结果表明5个组分分别含有2～5种五环三萜类皂苷，合计18种。该法有较高的精确性，可用于茶皂素的定性、定量分析。
- 尹丽茸张建华宋光艳阿拉西.斯尔克米德克郭梦琦钟耀广
- 关键词：茶皂素高效液相色谱
- 两亲性多糖壳—核胶束稳定性研究进展被引量：1
- 2016年
- 在水相体系中,可溶性两亲性多糖能自聚集形成具有壳—核结构的胶束,分子中疏水性和亲水性链段分别构成胶束的疏水内核和亲水外壳,这一结构特征是该胶束实现载体功能的基础。因此,保持或稳定该结构对胶束的实际应用具有重要意义。文章从两亲性多糖胶束结构稳定性内涵、维持稳定的分子间作用力、影响稳定性的因素(结构因素和环境因素)以及失稳表现形式等方面对两亲性多糖壳—核结构胶束的稳定性进行综述,并展望其今后的研究方向。
- 向卓亚赵国华叶发银吕霞
- 关键词：分子间作用力稳定性
- 枯草芽孢杆菌rocG基因插入失活突变株的构建被引量：1
- 2014年
- 枯草芽孢杆菌中有2个编码谷氨酸脱氢酶(GDH)的基因:rocG基因和gudB基因。其中Bacillus subtilis 168菌株的rocG基因编码有活性的GDH,而gudB基因编码没有活性的GDH。敲除168菌株的rocG基因后,gudB基因会自发突变为gudB1基因,后者编码有活性的GDH(gudB1-GDH)。为了研究gudB1-GDH在代谢中的作用及调控机制,构建了pMUTin4-rocG插入突变重组质粒,将其转化至B.subtilis 168,成功获得了1株rocG失活突变株BS-△rocG。对BS-△rocG和野生株的生长情况及GDH酶活进行了比较,发现BS-△rocG生长情况和野生株相当,但其GDH酶活为4.641U/mg蛋白,高于野生株的3.042U/mg蛋白。由此推测BS-△rocG中,gudB可能自发突变为gudB1,从而能够编码有活性的GDH,这一结果为研究枯草芽孢杆菌gudB1-GDH在代谢中的作用及调控机制奠定了基础。
- 倪银芸宋光艳钱炳俊张建华
- 关键词：枯草芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶
