国家自然科学基金(31171744)
- 作品数：7 被引量：38H指数：3
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- 相关机构：齐齐哈尔大学齐齐哈尔市环境监测中心黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程农业科学更多>>
- 蛹虫草无性型深层培养液中纤溶酶的分离纯化和酶学性质研究被引量：6
- 2012年
- 【目的】确立蛹拟青霉深层培养液中高纯度、高纤溶活性纤溶酶的分离纯化方法并测定其酶学性质。【方法】采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对蛹拟青霉纤溶酶进行分离。用Lowry法测定蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性,SDS-PAGE鉴定其纯度并确定其分子量,IEF法测定其等电点。【结果】研究发现,以蔗糖和豆饼为培养基主要基质时,蛹拟青霉深层培养可以产生至少两种纤溶酶。提纯后的纤溶酶Ⅱ比活力达到800.46 U/mg,总纯化倍数为30.07倍。纤溶酶Ⅱ的相对分子量和等电点分别为32 kD和9.3±0.2。纤溶酶Ⅱ是一种糖蛋白,总含糖量为0.98%(W/V)。该酶可以顺次降解人血纤维蛋白(原)的α、β和γ链。其最适作用pH及温度分别为7.4和41°C。Aprotinine与PMSF对该纤溶酶的活性完全抑制,推测此纤溶酶可能是一种丝氨酸蛋白酶。【结论】单一的高纤溶活性纤溶酶的获得和酶学性质的确定,为该酶开发成为新型溶栓药物提供了理论依据。
- 张雯舒刘晓兰郑喜群时晰董玉成
- 关键词：纤溶酶分离纯化酶学性质
- 脉孢霉纤溶酶体外抗凝与溶栓作用初步研究被引量：1
- 2012年
- 使用实验室制备的脉孢霉纤溶酶组分Ⅱ和组分Ⅲ冻干粉(均达到电泳纯),进行体外血凝块溶解试验、抗凝血实验和对小鼠一般行为的影响和毒理性试验,对不同组分的溶栓、抗凝及毒理效果进行初步研究。体外抗凝试验表明,脉孢霉纤溶酶粗酶液、组分Ⅱ、组分Ⅱ+Ⅲ具有明显的抗凝血作用,其抗凝血效果明显优于尿激酶。体外溶栓试验表明,脉孢霉粗酶液和各组分对血栓的溶解率均高于80%,明显优于对照组;脉孢霉纤溶酶粗酶液、组分Ⅱ、组分Ⅲ和组分Ⅱ+Ⅲ组溶解血栓后的液体中的红细胞分散程度较好,形态完整,尿激酶组血细胞凝集成块状,说明脉孢霉纤溶酶对细胞的损伤小,可以维持细胞的完整形态和功能,其血栓溶解效果要优于尿激酶。小鼠皮下注射试验显示脉孢霉纤溶酶无出血活性。急性毒理试验显示脉孢霉纤溶酶无明显的急性毒性,对小鼠的一般行为和协调运动无影响。
- 何宁刘晓兰
- 关键词：纤溶酶酶学性质纯化
- 蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化被引量：19
- 2012年
- 笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.
- 刘晓兰张雯舒郑喜群沈媛孙莹
- 关键词：蛹虫草纤溶酶纯化色谱分离
- 离子交换色谱在蛋白质分离中的应用被引量：3
- 2013年
- 离子交换色谱法是生物工业下游技术领域常用的分离纯化目的产物的手段。从色谱填料、色谱柱的选择和样品处理等方面对离子交换色谱在蛋白质分离纯化中的分离策略进行总结,并列举成功的分离案例。
- 刘晓兰陈丽邓永平郑喜群艾瑞波任凭
- 关键词：离子交换色谱蛋白质分离纯化
- 茶树菇子实体新纤溶酶的纯化及其溶栓抗凝性质研究被引量：3
- 2020年
- 从茶树菇子实体中提取、纯化纤溶酶,研究其体外的溶栓活性和抗凝活性,用于开发预防具有血栓倾向的心脑血管疾病的功能食品。对茶树菇(Agrocybe aegerita)子实体含有的纤溶酶进行研究,将子实体干燥、粉碎、生理盐水浸提,获得粗酶液,再依次经盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、CM-Sepharose FF离子交换色谱、Source 15PHE疏水色谱和Mono S离子交换色谱纯化,最终得到纤溶酶(ACase)。该酶比活力为1731.05 U/mg,纯化倍数为246.94。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)和Native-PAGE电泳分析显示,ACase为二聚体蛋白,分子质量分别为31.4 kDa和21.2 kDa。Edman降解法分析显示,2个亚基N-端序列分别为AIVTQTNAPWGL和SNADGNGHGTHV,经序列比对确定该酶为新纤溶酶。体外实验显示,ACase可顺次降解人血纤维蛋白原α、β和γ链,具有明显的抗凝血作用。研究显示,茶树菇可以作为功能性食品基料用于开发降低血栓倾向的功能食品。
- 李冠龙刘晓兰刘晓兰
- 关键词：纤溶酶溶栓抗凝功能性食品
- 微生物发酵法生产纤溶酶的研究进展被引量：7
- 2013年
- 血栓类疾病严重威胁人类生命和健康,溶栓疗法是目前治疗该类疾病安全有效的手段,传统的溶栓药物疗效显著,但是还存在一定缺陷。目前,利用微生物发酵产生的纤溶酶制备溶栓药物已经成为研究热点。文章对不同微生物来源的纤溶酶的发酵、分离纯化及性质等方面的资料进行总结,并对纤溶酶研发领域存在的问题进行探讨。
- 艾瑞波刘晓兰邓永平李琰何宁王晓杰袁欣
- 关键词：微生物发酵纤溶酶纯化
