中国博士后科学基金(201003342)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
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- Cdx2小分子干扰RNA对胃癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察Cdx2小分子干扰RNA（Cdx2-siRNA）对人胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法设计合成针对Cdx2基因的siRNA寡核苷酸以及阴性对照siRNA。将人胃癌MGC-803细胞接种于培养板中，分为3组，正常对照组不作任何处理，Cdx2-siRNA组和阴性对照组分别用Lipofectamine^TM2000将Cdx2-siRNA或阴性对照siRNA转染进细胞内。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot技术检测转染24h时胃癌MGC-803细胞中Cdx2mRNA和蛋白的表达，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测24、36、48、60、72h的细胞活力，应用克隆形成实验检测转染7d时MGC-803细胞增殖的变化，应用流式细胞仪检测转染24h时MGC-803细胞周期和细胞凋亡的变化。结果Cdx2-siRNA或阴性对照siRNA成功转染进胃癌MGC-803细胞内；Cdx2-siRNA组Cdx2mRNA和蛋白的表达量分别为（0．07±0．01）和（0．15±0．02），明显低于阴性对照组和正常对照组（P〈0．05）；Cdx2-siRNA组细胞活力和增殖能力下降，24、36、48、60、72h的吸光度值分别为（0．125±0．003）、（0．193±0．005）、（0．223±0．005）、（0．267±0．003）、（0．315±0．006），克隆形成数为（51．4±3．2），均明显低于阴性对照组和正常对照组（P〈0．05）；而且，Cdx2-siRNA组细胞凋亡率为（12．5±0．6）％，G。／G，期比例为（73．1±7．8）％，明显高于阴性对照组和正常对照组（P〈0．05）；阴性对照组和正常对照组比较，上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Cdx2-siRNA可抑制人胃癌细胞的活力和增殖能力，其机制与诱导细胞凋亡、使细胞周期停滞有关。
- 崔建华谢玉波王晓通肖强
- 关键词：胃癌RNA干扰CDX2增殖脱噬作用
- 双向凝胶电泳及质谱分析法在筛选人胃癌标记物中的应用
- 2012年
- 目的初步筛选人胃癌相关抗原,为进一步认识胃癌的发生、发展机制及其早期诊断、靶向治疗提供依据。方法采用双向凝胶电泳及免疫印迹法分离人胃癌组织的总蛋白质,以PD Quest 8.0软件分析图谱;用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱及蛋白质数据库搜索对差异蛋白点进行鉴定。结果获得分辨率高、匹配性好的人胃癌组织总蛋白双向凝胶电泳图谱,图像分析显示3块胶的点数为789±27、匹配点数为684±21、匹配率为86.7%;获得高分辨率的免疫印迹反应图谱,图像分析找出差异反应蛋白质19处,质谱鉴定共得到11种蛋白质(包括结蛋白、β微管蛋白、波形蛋白及胶转蛋白等)。结论利用血清蛋白质组分析可初步筛选、鉴定11种人胃癌相关抗原,此对进一步认识胃癌的发生、发展机制及其早期诊断、靶向治疗提供了依据。
- 孔凡彪王连振谢玉波肖强
- 关键词：双向凝胶电泳肿瘤标记物
- 稳定过表达Cdx2基因胃癌细胞株的建立
- 2011年
- 目的建立稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株。方法使用阳离子脂质体分别将真核表达载体pCMV-Cdx2-HA或空载体pCMV-HA转染至人胃癌细胞MGC-803中,G418筛选出阳性克隆后扩大培养。RT-PCR和Western Blot技术检测各组胃癌细胞中Cdx2基因mRNA和蛋白的表达情况,将挑选出的稳定株命名为MGC-803/Cdx2细胞(转染组)和MGC-803/EV细胞(空载体组);流式细胞仪检测MGC-803细胞(未转染组)、MGC-803/EV细胞和MGC-803/Cdx2细胞的细胞周期和凋亡情况。结果成功筛选出稳定过表达Cdx2基因的MGC-803胃癌细胞,即MGC-803/Cdx2细胞;与MGC-803细胞和MGC-803/EV细胞比较,MGC-803/Cdx2细胞中Cdx2基因mRNA和蛋白的表达明显增加(P<0.05),而且细胞周期G0/G1期比例和凋亡率也明显增加(P<0.05)。结论成功构建了稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株,而且Cdx2过表达使细胞周期停滞、凋亡增加。
- 李雷王晓通谢玉波肖强
- 关键词：CDX2胃癌细胞周期凋亡
- 人胃癌组织定向cDNA文库的构建
- 2011年
- 目的快速构建成人胃癌组织cDNA文库。方法从人胃癌组织分离总RNA，以含有轴IB酶切位点的oligo（dT）引物合成第1链cDNA，以含蛳IA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA，双链cDNA经sGI（IA＆IB）酶切，以CHROMA SPIN＋TE-1000柱分级分离cDNA，收集符合需要的cDNA片段并纯化，随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体λ文库。结果经检测共获得2．73×10^6个重组子，重组率约为94％，插入片段大小平均为1．2kb。结论用SMART方法构建的胃癌组织cDNA文库质量较高，为以后筛选胃癌相关基因奠定了基础。
- 吴锟谢玉波王连振肖强
- 关键词：CDNA文库胃癌定向克隆
- RNA干扰介导的Cdx2沉默对人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤生长的影响被引量：1
- 2011年
- 目的建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,探讨Cdx2基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体(pLL-Cdx2-siRNA)对人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤Cdx2基因表达和肿瘤生长的影响。方法建立人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤模型,随机分为实验组(pLL-Cdx2-siRNA组),空载体组(pLL3.7组)和生理盐水组。隔天向各组动物肿瘤内分别注射Cdx2基因沉默的重组慢病毒载体pLL-Cdx2-siRNA、空载体pLL3.7或生理盐水0.2 mL,共6次,测量各组肿瘤体积的大小;11 d后处死裸鼠,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中Cdx2基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测肿瘤细胞的凋亡。结果与生理盐水组和空载体组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05),肿瘤细胞Cdx2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05);实验组肿瘤细胞的凋亡指数(16.7±5.6)%明显高于空载体组(10.5±4.1)%和生理盐水组(11.2±4.3)%(P<0.05)。结论慢病毒载体pLL-Cdx2-siRNA瘤内注射可抑制人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤的生长。
- 杨杰谢玉波肖强王晓通李雷
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰CDX2胃癌移植瘤
