广西壮族自治区科技攻关计划(11107008-5)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：冯家勋刘君梁秦秀林郑小群张政更多>>
- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 根癌农杆菌介导的绿色木霉HP35-3转化及表达体系的构建被引量：2
- 2014年
- 本研究通过根癌农杆菌介导转化法,构建丝状真菌绿色木霉HP35-3的遗传转化表达体系,并以红色荧光蛋白基因(DsRed2)为报告基因来验证本表达体系。首先构建含有潮霉素抗性基因(HygR)、磷酸甘油醛脱氢酶启动子(Pgpd)和红色荧光蛋白基因(DsRed2)的双元载体pCAMT-CPRFP。然后将该双元载体转化到根癌农杆菌EHA105中,并筛选阳性转化子。将该转化子和绿色木霉HP35-3分生孢子进行液体共培养,并在含有150μg/mL潮霉素抗性平板上筛选出绿色木霉HP35-3RFP阳性转化子。最后分别通过如下三种方法检测:提取HP35-3RFP的总DNA进行PCR验证;对菌丝体进行荧光显微镜观察;对菌丝体提取物进行荧光酶标仪检测。结果表明:获得的转化子能够稳定遗传,外源红色荧光蛋白基因整合到木霉HP35-3的基因组中并成功表达。
- 潘家茂蓝健益郑小群秦秀林冯家勋刘君梁
- 关键词：根癌农杆菌丝状真菌红色荧光蛋白
- 青霉纤维素酶基因的表达调控与重组表达研究进展
- 2015年
- 青霉属菌株可以分泌完整的纤维素酶系,尤其高产β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL,EC 3.2.1.21),弥补了工业菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)胞外β?葡萄糖苷酶活性低的不足,加上青霉菌株生长速度快等优点,使其产纤维素酶受到越来越多的关注。为了解决以木质纤维素为原料工业生产燃料乙醇所需纤维素酶量大、成本高等难题,深入研究青霉属纤维素酶基因的表达调控和重组表达非常重要。本文就青霉属纤维素酶基因资源、纤维素酶合成调控网络以及纤维素酶基因的重组表达等进行综述与展望。
- 冯家勋赵帅
- 关键词：青霉
- 哈茨木霉HP37-4纤维二糖水解酶Ⅰ基因的克隆及表达被引量：1
- 2013年
- 从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HP37-4中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅰ基因的全长DNA序列,并从HP37-4总RNA中通过RT-PCR扩增得到该基因全长cDNA序列。序列测定分析表明该基因含有3个外显子和2个内含子,编码含505个氨基酸的多肽。利用生物信息学方法对该蛋白质的结构进行了分析,推测了其主要功能区的位置及结构特征。将该基因cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET30a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达该基因。SDS-PAGE分析表明该基因能在大肠杆菌中过量表达,但以不溶性的包涵体形式存在,经包涵体变性和多肽复性后,纯化得到了表达的重组蛋白。
- 吴柳张政卢业飞秦秀林刘君梁冯家勋
- 关键词：哈茨木霉纤维二糖水解酶基因克隆
