山东省自然科学基金(Z2002C01)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：鲁艳芹王传玺韩金祥宋宝刘杰更多>>
- 相关机构：山东省医药生物技术研究中心山东省肿瘤医院卫生部更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- MoMLVgag-pol基因在NIH3T3细胞中的表达和鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的:构建含MoMLVgag-pol基因的重组表达载体,实现其在NIH3T3细胞中稳定表达。方法:应用RT-PCR方法反转录并扩增gag-pol基因,克隆入真核表达载体pcDNA4/HisMaxA上,构建重组表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol,用脂质体法转染NIH3T3细胞,Zeocin筛选稳定表达细胞株,通过SDS-PAGE分析检测表明,gag-pol基因在NIH3T3细胞实现了表达,产物相对分子质量(kDa)为194.78×103。然后,将逆转录病毒载体导入此细胞系,包装逆转录病毒。用PCR与标记基因补救分析法检测野生型辅助病毒。结果:酶切鉴定的片段大小分别为5.2kb,与预期大小一致,经Zeocin筛选后获得稳定表达细胞株,SDS-PAGE实验表明产物融合蛋白相对分子质量(kDa)为194.78×103,与预期相符。脂质体转染包装细胞,嘌呤霉素加压筛选出高病毒滴度(4.0×106CFU/ml)的细胞克隆,且未检测到辅助病毒。结论:构建的融合表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol及其在NIH3T3细胞中的表达,构建成功具有靶向性的逆转录病毒包装细胞系,该细胞系能够包装出高滴度的逆转录病毒,为肝细胞的基因治疗提供了一种新的基因转移系统。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹宋宝刘杰
- 关键词：MOMLVNIH3T3细胞真核表达载体
- 重组HDV核酶逆转录病毒的生产及对HBV抑制效率的测定被引量：1
- 2007年
- 目的:构建含HDV核酶基因的重组逆转录病毒载体,包装出逆转录病毒实现其在HepG2215细胞中稳定表达,并研究其是否抑制HBV的复制。方法:应用PCR方法扩增HDV核酶基因,克隆入逆转录病毒载体pMSCV/U6中,用脂质体法转染逆转录病毒载体包装细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,用PCR和药物抗性水平传播分析检测野生型辅助病毒。收获的病毒感染HepG2215细胞,用酶联免疫实验测定对HBV的抑制率。结果:重组逆转录病毒载体的酶切鉴定片段约为73 bp,与预期值一致。脂质体转染包装细胞,嘌呤霉素加压筛选出高病毒滴度(4.0×106CFU/ml)的细胞克隆,且未检测到辅助病毒,对HBV的抑制率最高可达61.56%。结论:成功构建重组逆转录病毒载体,在包装细胞系中能生产出高滴度的逆转录病毒,能有效的抑制HepG2215细胞内HBV的复制,为HBV的基因治疗提供了实验数据。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹张翠孟斌
- 关键词：核酶
