国家自然科学基金(81001017)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
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- 核仁素蛋白调节嗅觉介导素4mRNA表达的研究
- 2014年
- 目的:探讨核仁素(nucleolin,NCL或C23)蛋白与嗅觉介导素4(olfaetomedin 4,OLFM4)mRNA之间是否存在相互作用,以及NCL对OLFM4转录水平的调控。方法:本研究利用RNA染色质免疫共沉淀(RNA chromatin immunoprecipitation assay,RNA chip)结合RT-PCR确定NCL是否能与OLFM4 mRNA相互作用,以及双荧光素酶报告基因试验检测NCL对OLFM4报告基因的影响。结果:在SGC-7901细胞内,NCL能与OLFM4 mRNA结合,且过表达NCL质粒的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.15倍,敲低NCL质粒的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.8倍,NCL对OLFM4具正向调节作用。结论:NCL与OLFM4mRNA可以相互结合,且NCL可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4 mRNA的半衰期来增加OLFM4 mRNA的稳定性。
- 安娜吴莉雅宋利华黄轶蒋雪刘先俊
- 关键词：核仁素
- 5-羟色胺转运体敲除小鼠在高架十字迷宫中下丘脑CRF mRNA表达的变化
- 2014年
- 目的研究5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)敲除小鼠在高架十字迷宫(elevated plus maze,EPM)中下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(corticotrophin-releasing factor,CRF)mRNA表达的变化。方法将小鼠按基因型(SERT+/+、SERT+/-、SERT-/-)分为对照组和EPM组,每组10只,EPM组利用高架十字迷宫作为应激原刺激小鼠。测定各组小鼠下丘脑以及室旁核部位CRF mRNA的表达。结果在基础条件下(对照组),SERT敲除小鼠下丘脑及室旁核的CRF mRNA表达降低(P<0.05);EPM刺激下(EPM组),SERT+/-和SERT-/-小鼠在下丘脑及室旁核的CRF mRNA表达显著高于SERT+/+(P<0.01);构建的CRF mRNA探针反义链在下丘脑PVN部位检测到高密度的CRF mRNA,而正义链却不能探测到CRF mRNA;EPM组hnRNA SERT-/-小鼠表达较对照组明显增高(P<0.01)。结论应激能明显促进下丘脑CRF mRNA的表达。SERT敲除小鼠的异常应激与CRF mRNA的表达升高有关。
- 文玲邓永兵朱小云蒋雪
- 关键词：5-羟色胺转运体高架十字迷宫下丘脑室旁核
- 尿酸酶基因工程菌的构建与分泌表达
- 2018年
- 目的:将产朊假丝酵母菌尿酸酶编码基因克隆至已改造的表达载体p ET-28a中,使尿酸酶在大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性。方法:(1)利用重组PCR技术删除p ET-28a中Lac O和Lac I序列构建表达载体;(2)金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A,SPA)信号肽编码基因与尿酸酶基因N端融合成目的基因;(2)将目的基因克隆至表达载体中,再转化至E.coli DH5ɑ中,使之表达;(4)利用SDS-PAGE鉴定并测定表达产物生物学活性。结果:尿酸酶在E.coli中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性。结论:利用肠道内正常菌群E.coli构建可分泌、持续表达蛋白的载体p ET-28a-s UOX,可将表达的尿酸酶作用于高尿酸血症模型上,为应用于动物实验通过肠道降低尿酸水平提供依据。
- 唐丽霞刘杰刘先俊蒋雪
- 关键词：尿酸酶大肠埃希菌分泌
- PPARγ激动剂吡格列酮对创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及ICMA-1表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator—activated receptor-γ,PPARγ）激动剂吡格列酮对大鼠创伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）后迟发性神经元死亡、细胞凋亡及细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）表达的影响。方法将36只SD大鼠按随机数字表法分为假致伤组、对照组和吡格列酮治疗组，每组12只。采用改良的Feeney法制作脑创伤模型，治疗组采用吡格列酮（10mS／kg）灌胃，假致伤组和对照组用等量体积分数0．2％二甲基亚砜灌胃。致伤后48h取脑组织，石蜡切片，分别行Nissl、TUNEL染色和ICAM—l免疫组化测定，观察迟发性神经元死亡、神经细胞凋亡程度及ICAM-1表达。结果（1）治疗组尼氏体脱失细胞率为（38．59±1．97）％，明显低于对照组的（51．25±4．01）％（P〈0．05），高于假致伤组的（8．654-1．23）％（P〈0．01）；（2）治疗组神经细胞凋亡计数为31．67±4．76，明显低于对照组45．33±4．68（P〈0．05），高于假致伤组16．83±2．04（P〈0．01）；（3）治疗组ICAM-1表达阳性细胞的平均吸光度值为0．26±0．04，明显低于对照组0．31±0．04（P〈0．05），高于假致伤组0．10±0．02（P〈0．01）。结论PPARγ激动剂吡格列酮能减少TBI后的神经细胞凋亡，保护神经元；其抑制ICAM-1的表达可能是其抑制炎症反应、发挥神经保护作用的机制之一。
- 邓永兵刘科唐文渊蒋雪
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体脑损伤细胞凋亡细胞黏附分子
- 5-羟色胺转运体敲除小鼠在应激下焦虑行为和HPA轴的改变被引量：3
- 2012年
- 目的研究5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)敲除小鼠焦虑行为及ACTH和皮质酮分泌变化。方法将基因型为SERT+/-的雌雄小鼠交配产子,并把鉴定后子代小鼠按基因型(SERT+/+、SERT+/-、SERT-/-)分为对照组和EPM组,每组15只。利用高架十字迷宫作为应激原刺激小鼠,观察各组小鼠的焦虑行为,并测定各组小鼠的ACTH和皮质酮分泌。结果①基因型PCR成功鉴定SERT+/+、SERT+/-和SERT-/-的小鼠。②SERT+/-和SERT-/-小鼠的开臂停留时间、开臂停留时间百分比、进入开臂的次数和进入开臂的次数百分比较SERT+/+均显著降低(P<0.05,P<0.01)。③EPM刺激下,SERT+/-和SERT-/-小鼠ACTH分泌的增加显著高于SERT+/+(P<0.05),SERT-/-小鼠皮质酮分泌的增加显著高于SERT+/+(P<0.05)。结论 SERT敲除小鼠在应激条件下易产生焦虑,并且ACTH和皮质酮分泌显著升高。
- 蒋雪邓永兵安娜吴利亚
- 关键词：5-羟色胺转运体高架十字迷宫ACTH
- GW112 mRNA 3’端非翻译区特异性结合蛋白研究
- 2013年
- 目的:通过体外实验筛选出与GW112 mRNA 3’非翻译区临床特异性结合蛋白,并研究蛋白性质。方法:以稳定表达GW112基因的胃癌细胞SGC-7901为实验对象,体外转录法获得GW112 mRNA 3’非翻译区片段并用生物素标记,结合亲和素磁珠特异性吸附原理,从细胞总蛋白中纯化出与GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白。经过质谱鉴定得到蛋白信息,并用Western blot验证结果。结果:用磁珠纯化的蛋白样品经SDS-PAGE电泳后,取目的条带进行质谱分析发现存在核仁素蛋白,以核仁素单克隆抗体进行Western blot验证后发现与质谱结果一致。结论:核仁素是GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白的一种,并很可能对GW112 mRNA稳定性有直接影响,这为进一步揭示GW112在胃癌细胞抗凋亡机制中的作用奠定基础。
- 吴莉雅安娜蒋雪刘先俊黄轶
- 关键词：MRNA体外转录核仁素
