国家自然科学基金(81070996)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
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- 弱激光照射对小鼠骨髓来源巨噬细胞极化的调控作用被引量：5
- 2016年
- 目的研究不同能量参数的810 nm弱激光照射对于巨噬细胞极化状态的影响。方法体外分离、培养BALB/c小鼠来源的骨髓巨噬细胞,应用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)条件性培养基培养的骨髓细胞,流式细胞术检测F4/80表达鉴定培养结果。脂多糖-γ干扰素(LPS-IFN-γ)刺激进行M1细胞极化诱导,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶1(Arg1)、CD86 mRNA水平,Western blot法检测i NOS和Arg1蛋白水平。应用(1、2、3、4)J/cm2的810 nm弱激光对体外培养的M1细胞进行照射,MTT法检测细胞增殖,免疫荧光细胞化学染色检测i NOS、Arg1的表达,反转录PCR检测M1细胞i NOS、Arg1 mRNA水平,Western blot法检测M1细胞i NOS、Arg1蛋白水平。结果流式细胞术结果证明分离细胞的F4/80阳性率达99.9%。骨髓源性巨噬细胞在LPS-IFN-γ刺激下,高表达i NOS和CD86 mRNA。Western blot法检测发现,给予极化刺激后,骨髓源性巨噬细胞高表达i NOS和CD86蛋白。不同能量的弱激光照射M1型巨噬细胞,MTT法检测发现,(1、2、3)J/cm2弱激光刺激时,M1细胞活力与对照组比较无显著性差异;4 J/cm2刺激时,M1细胞活力降低。免疫荧光细胞化学染色显示,与对照组比较,(1、2)J/cm2照射时,M2型巨噬细胞标志物Arg1阳性细胞数无明显差异,照射剂量为(3、4)J/cm2时,Arg1阳性细胞数显著增多,M1型巨噬细胞标志物i NOS阳性细胞数显著减少。与对照组比较,照射剂量为(1、2)J/cm2时,i NOS及Arg1 mRNA和蛋白表达水平无明显变化,在照射剂量为(3、4)J/cm2时,i NOS mRNA和蛋白水平表达下降,Arg1 mRNA和蛋白水平表达升高。结论 (1、2)J/cm2的810 nm弱激光对于M1型巨噬细胞活力及极化无影响。照射剂量为3 J/cm2时,M1型巨噬细胞可向M2型巨噬细胞极化,且细胞活性无明显变化。但照射能量为4 J/cm2时,M1型细胞虽然可向M2型细胞极化但同时伴有细胞活性降低。
- 戴晨宋基伟梁卓文张倩张坤王哲胡学昱
- 关键词：脊髓损伤
- 810nm弱激光对脊髓损伤小鼠神经元轴类再生的促进作用及其相关机制被引量：1
- 2019年
- 目的探讨810nm弱激光对小鼠脊髓损伤(SCI)后神经元轴突再生的作用及其相关机制。方法体内实验:选取20只Balb/c小鼠,通过钳夹伤方法,建立标准化小鼠SCI模型,按照随机数字表法分为SCI组及SCI后810nm弱激光照射组(弱激光组),每组10只。弱激光组采用选定参数的弱激光(连续波波长810nm,功率密度2mW/cm2,光斑面积4.5cm2,照射时间50min,获得能量密度6000J/cm2)连续照射损伤区,14d后免疫荧光染色观察SCI组及弱激光组损伤区M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2型巨噬细胞标志物精氨酸酶1(Arg-1)及巨噬细胞普遍标志物F4/80的表达情况。体外实验:选取20只Balb/c小鼠,体外获取并培养小鼠原代骨髓源性巨噬细胞,而后使用脂多糖(LPS)和γ干扰素(INF-γ)诱导为M1型巨噬细胞。按照随机数字表法将巨噬细胞培养板分为M1型巨噬细胞组(M1组)和弱激光照射组(M1+弱激光组),每组细胞数目相同。M1组不做处理,M1+弱激光组采用体外标准化810nm弱激光-巨噬细胞照射模型进行照射。照射24h后RT-qPCR和ELISA法检测两组白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1RA)、白细胞介素10(IL-10)的表达情况。照射48h后Westernblot分析两组iNOS、Arg-1、分化抗原簇206(CD206)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)的表达。照射48h后,分别使用两组巨噬细胞条件培养基培养背根神经节神经元(DRG),培养48h后测量DRG轴突生长的长度。结果体内实验中,相较于SCI组,弱激光组损伤区F4/80+iNOS+的荧光强度显著下降(1.00±0.08∶0.06±0.04)(P<0.05);F4/80+Arg-1+的荧光强度显著上升(1.00±0.07∶2.15±0.12)(P<0.01)。在体外实验中,与M1组相比,M1+弱激光组中M1型巨噬细胞标志物iNOS的表达降低(1.00±0.11∶0.08±0.01)(P<0.01);M2型巨噬细胞标志物Arg-1(1.00±0.14∶2.44±0.16)、CD206的表达升高(1.00±0
- 张家玮孙嘉锴郑峤宋基伟李鲲梁卓文胡学昱王哲
- 关键词：脊髓损伤激光疗法神经再生
- 光生物调节通过抑制氧化应激和继发炎症促进脊髓损伤修复被引量：4
- 2022年
- 目的验证体内可埋置激光光纤介导的光生物调节(PBM)对脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法SD雄性大鼠随机分为Sham组、SCI组、SCI+PBM组,在T10节段对脊髓进行钳夹损伤。SCI+PBM组在损伤后进行14 d激光照射。通过Western blotting检测组织氧化应激水平,ELISA检测炎性因子及神经生长因子(NGF)含量,免疫荧光染色及TUNEL染色判断神经生长及细胞凋亡,BBB评分及足印记评估运动功能恢复。结果①转录因子Nrf2水平在损伤后降低,光照治疗后Nrf2水平相比于SCI组明显上升(P<0.05);抗氧化酶HO-1在光照后与SCI组相比也明显上升(P<0.05)。②SCI组炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平与Sham组相比明显上升(P<0.01),SCI+PBM组炎性因子水平与SCI组相比明显降低(P<0.05);SCI+PBM组NGF、脑源性神经营养因子含量与SCI组相比明显升高(P<0.05)。③SCI组MAP2荧光强度较Sham组相比明显下降(P<0.01),而SCI+PBM组荧光强度与SCI组相比明显升高(P<0.05);光照干预后TUNEL阳性细胞数较SCI组相比明显降低(P<0.01)。④足印记提示SCI组步宽较Sham组相比明显变大(P<0.01),SCI+PBM组步宽与SCI组相比明显下降(P<0.05);HE染色提示光照治疗后,SCI+PBM组空洞面积明显小于SCI组(P<0.01);BBB评分提示第14日时,SCI组与SCI+PBM组差异性明显(P<0.01)。结论体内可埋置光纤能够通过光生物调节促进SCI后的组织修复和功能恢复。
- 朱志杰王选康左晓霜梁卓文李鑫胡学昱王哲
- 关键词：脊髓损伤氧化应激炎症反应
- miR-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的作用及机制研究被引量：3
- 2019年
- 目的:探讨mi R-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:首先构建慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,然后感染椎间盘退变髓核细胞得到稳定过表达细胞系,同时设置空载体和空白细胞组对照。用荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,分别提取三组细胞总RNA,采用RT-q PCR方法检测mi R-155的表达;通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western-Blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化情况。结果:在荧光显微镜下,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光;RT-qPCR结果显示构建的稳定过表达细胞系(GV369-miR-155-NP)中mi R-155的表达水平较高,且与空载体细胞系及空白细胞对照组均呈显著性差异(P<0.05);与空载体组(GV369-NP)及空白细胞对照组相比,过表达组(GV369-miR-155-NP)细胞凋亡率显著降低(P<0.05),FADD、Caspase-3、Bax的表达水平均明显下降,而Bcl-2表达水平显著增加(P<0.05)。结论:mi R-155可能通过靶向结合Caspase-3和FADD阻止FasL-Fas途径或通过线粒体途径抑制人椎间盘退变髓核细胞凋亡。
- 潘东晟张永峰吕艳红赵四平李俊琴王哲
- 关键词：MIR-155细胞凋亡
