广东省自然科学基金(4300213)
- 作品数：10 被引量：30H指数：3
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- 相关机构：暨南大学中山大学广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金中国博士后科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
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- 多重免疫缺陷NOD/SCID小鼠CD3^+ DX5^+细胞亚群与妊娠结局的关系
- 2006年
- 林羿曾山冯铮曾耀英
- 关键词：动物模型免疫缺陷胎盘
- 自发性流产小鼠模型主动脉旁淋巴结CD45^+CD86^+细胞亚群分析
- 2005年
- 目的:检测主动脉旁淋巴结(PLN)CD45+CD86+细胞,用于间接分析小鼠母-胎界面局部免疫状况。方法:CBA/J×DBA/2、未孕CBA/J雌鼠和CBA/J×BALB/c小鼠分别作为自发性流产模型(A组)、未孕对照(N组)和生育力正常对照(F组)。采用流式细胞术检测CD45+CD86+细胞在CD45+细胞中的百分率(简称CD45+CD86+百分率)和这些细胞的绝对数,其中单个核细胞从孕5.5、9.5和13.5d小鼠PLN和孕13.5d胎盘分离获得。为鉴定CD86+细胞所属类型,采用CD3、CD19和DX5分别作为T细胞、B细胞和NK细胞特异性标志物进行流式细胞检测。结果:A组胚胎吸收率和绝对数(29.3%,1.8±1.0)均显著高于F组(4.8%,0.3±0.5,P<0.01)。相应地,A组孕13.5dPLNCD45+CD86+细胞百分率和绝对数也均显著高于F组(分别为27.5%±14.0%vs12.3%±7.1%和1362±687vs615±353,P<0.01)。未孕CBA/J雌鼠PLNCD45+CD86+百分率为7.5%,与孕5.5dA组小鼠相近(10.6%),至孕9.5d时显著升高至23.9%(与未孕鼠相比,P<0.01;与孕5.5d小鼠相比,P<0.05),并保持高水平直至13.5d(27.5%)。相反,在CBA/J×BALB/c小鼠孕期未观察到这种趋势。结论:CBA/J×DBA/2小鼠流产开始发生于孕9.5d,此时CD45+CD86+细胞数增多,提示这些细胞与胚胎吸收相关。从PLN中分离淋巴细胞进行表型分析,有助于间接评价母-胎界面局部免疫状况。
- 林羿曾耀英肇静娴王通曾山冯铮狄静芳
- 关键词：流产淋巴结
- 脂多糖诱发的同基因妊娠BALB/c和NOD/SCID小鼠早产模型被引量：1
- 2007年
- 目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。由于预实验显示预期的早产均发生于孕16d,因此,实验中在早产发生之前处死小鼠,收集每只孕鼠的胎盘。采用流式细胞术检测胎盘CD45+细胞表面TLR4、CD80和细胞内TNF-α的表达率。结果:采用LPS可诱发BALB/c小鼠早产,而NOD/SCID小鼠则对LPS的诱导有抵抗。经LPS刺激后,TLR4的表达在BALB/c和NOD/SCID小鼠均无显著改变,但是两组小鼠CD45+CD80+细胞的百分率均升高。相反,LPS刺激后仅BALB/c小鼠CD45+TNF-α+细胞的百分率升高,而NOD/SCID小鼠则否。通过预先阻断TLR4的表达可消除LPS对BALB/c小鼠CD80和TNF-α表达的影响,并显著降低LPS诱发的早产率。结论:虽然LPS未能改变TLR4的表达,但是二者相互作用,可激发CD45+CD80+细胞的动员,导致炎性细胞因子产生增多,并最终导致早产。BALB/c和NOD/SCID小鼠对LPS刺激的敏感性存在差异,提示NOD/SCID小鼠缺乏功能正常的T细胞和NK细胞,可能是这种小鼠对LPS诱发的早产有抵抗的原因之一。
- 林羿刘兆宇狄静芳曾耀英
- 关键词：免疫缺陷早产
- NOD/SCID孕鼠脾脏和胎盘CD45^+细胞内细胞因子的表达被引量：1
- 2007年
- 目的研究NOD/SCID孕鼠胚胎吸收率(Resorption rate,RR)与母-胎界面局部免疫状况的关系。方法计算并比较孕13.5天同基因妊娠NOD/SCID×NOD/SCID小鼠和非免疫缺陷的BALB/c×BALB/c小鼠的RR,并采用4色流式细胞术检测NOD/SCID小鼠非孕期和孕13.5天脾脏和胎盘细胞内细胞因子的表达状况,以明确其与妊娠耐受相关的淋巴细胞功能亚群。结果NOD/SCID小鼠的RR与对照组BALB/c小鼠相比无显著差异。与此相应,虽然能够证实NOD/SCID小鼠具有多重免疫缺陷,但是孕期母-胎界面多种功能性细胞亚群的百分率发生自发性改变。结论NOD/SCID小鼠脾脏和胎盘某些细胞百分率的自发性改变可能对妊娠结局有利。
- 林羿陈艺菁曾山冯铮狄静芳曾耀英
- 关键词：细胞表面标志物免疫缺陷
- 自发性流产CBA/J×DBA/2小鼠母-胎界面DX5^+CD69^+细胞的浸润被引量：3
- 2005年
- 目的:研究DX5+CD69+细胞浸润与CBA/J×DBA/2小鼠自发性胚胎吸收的关系。方法:CBA/J×DBA/2小鼠(A组)和CBA/J×BALB/c小鼠(B组)分别用作自发性流产模型和生育力正常对照。DX5用作广泛性NK细胞标志物,CD69作为NK细胞和T细胞活化标志物。采用流式细胞术检测母-胎界面淋巴细胞中CD69+细胞百分率,DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率,并对细胞数量与胚胎吸收率进行线性相关回归分析。结果:A组孕13.5 d胚胎吸收率为34.1%(45/132),显著高于B组(6.6%,9/137;P<0.001)。同时A组DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率(28.1±11.9)%显著高于B组(19.5±5.7)%,(P<0.01)。此外,A组DX5+CD69+与DX5+细胞比率(x)和胚胎吸收率(y)之间存在强线性相关(r=0.807,P<0.001,y=-1.157+1.278x)。结论:母-胎界面过多的DX5+CD69+细胞浸润可能与CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收有关。
- 林羿曾耀英狄静芳曾山曾祥凤詹美意
- 关键词：流产细胞表面标志物淋巴细胞
- Toll样受体3参与双链RNA对小鼠妊娠结局的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨Toll样受体3(TLR3)与双链RNA(dsRNA)相互作用对BALB/c和NOD/SCID小鼠妊娠结局的影响。方法:比较经过和未经预先TLR3阻断条件下同基因妊娠的BALB/c和NOD/SCID小鼠在dsRNA刺激后的胚胎吸收率(RR),并采用流式细胞术检测CD45+TLR3+细胞和CD45+CD80+细胞在CD45+细胞群中、以及CD8α+CD80+细胞在CD8α+细胞群中的百分率。结果:在dsRNA刺激下BALB/c小鼠RR显著升高,而对NOD/SCID小鼠无显著影响。BALB/c小鼠胎盘CD45+细胞群中TLR3表达率升高,并伴有CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞百分率的升高。另可检测到CD45+细胞内IL-2表达率增高,而IL-10表达率下降;而在NOD/SCID模型中未观察到这种趋势。阻断TLR3能消除dsRNA对BALB/c小鼠胚胎排斥的诱导作用,并同时降低CD45+细胞群中CD80的表达率。结论:dsRNA与TLR3的相互作用可能参与CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞的动员,随后母-胎界面IL-2表达增强,而IL-10表达减弱,最终导致胚胎被排斥。dsRNA引起的胚胎排斥过程可能需要具有正常功能的T细胞和NK细胞参与。
- 林羿张家玮狄静芳杨志陈艺菁曾耀英
- 关键词：动物模型免疫缺陷TOLL样受体
- TLR3参与poly(I-C)所致流产的作用被引量：3
- 2006年
- 目的研究Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)在poly(I-C)诱发小鼠流产中的潜在作用。方法多聚次黄苷酸-胞苷酸[polyinosinic-polycytidync acid,poly(I-C)]是一种双链RNA,腹腔注射时能够诱发小鼠流产。在预先用单抗阻断或不阻断TLR3情况下,注射poly(I-C)建立小鼠诱发性流产模型,应用流式细胞术分别检测CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率。结果不用抗TLR3抗体预处理,单用poly(I-C)刺激同种异基因交配模型BALB/c×C57BL/6,可使CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率均显著升高。但是,应用抗TLR3抗体预处理的雌鼠,用poly(I-C)刺激时上述百分率不改变。与此相应,poly(I—C)刺激可显著增高胚胎吸收率,而抗TLR3抗体预处理可消除这种作用。结论poly(I-C)与TLR3结合可能对母-胎界面NK细胞活化至关重要,并可促进小鼠胚胎吸收。
- 林羿曾耀英曾山冯铮狄静芳
- 关键词：流产动物模型细胞表面标志物生殖免疫学
- 含小鼠表皮干细胞的真皮替代物体内移植追踪实验被引量：15
- 2005年
- 目的追踪种植于真皮替代物中的小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)移植到同基因受者体内后的转归。方法在体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)分化为ESCs,采用荧光染料Hoechst33342染色后,种植到含有成纤维细胞的胶原-明胶海绵真皮替代物内,移植到与ES细胞同基因的129/J小鼠皮下,采用HE染色、免疫组化和Van Gieson染色等观察这些细胞的存活和分化情况。结果移植后至少3周内仍可以在荧光显微镜下清晰观察到ESCs。这些细胞能够存活并分化形成毛囊样、腺管样结构,形成与天然真皮相似的结构。在这些结构中有CD29(整合素β1亚单位)和细胞角蛋白18等表皮干细胞特异性标志物的表达。在移植后至少10周内未观察到明显排斥反应或严重毒副反应。结论ESCs能够在所构建的真皮支架内存活并分化形成毛囊样和腺管样结构,提示这些来源于ES细胞的ESCs可以作为种子细胞,用于研究制备含有皮肤附属器的真皮替代物。
- 林羿李海标黄锦桃
- 关键词：细胞表面标志物生物材料皮肤附属器真皮替代物干细胞
- NOD/SCID小鼠胎盘DX5^+CD25^+细胞水平
- 2006年
- 为了研究胎盘DX5+CD25+细胞在维持母-胎耐受状态中的潜在作用。采用流式细胞术检测免疫功能正常的BALB/c和免疫缺陷的NOD/SCID小鼠外周血和胎盘DX5+CD25+细胞,评价这些细胞与小鼠妊娠预后的关系。结果:虽然NOD/SCID小鼠存在严重的免疫缺陷,但是其胚胎吸收率和平均每窝产仔数等生育力指标均基本正常,并且其孕13 d胎盘DX5+CD25+/DX5+细胞百分率与免疫功能正常小鼠相比无显著性差异,并均呈高百分率分布特征(约占DX5+细胞总数的90%)。NOD/SCID小鼠胎盘中高百分率的DX5+CD25+细胞可能是正常生育力预后的免疫学基础。
- 林羿李莉平狄静芳曾山Shigeru Saito
- 关键词：流产免疫缺陷
- NOD/SCID孕鼠淋巴细胞表型检测和NK细胞活性分析被引量：5
- 2005年
- 目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响。方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BALB/c×BALB/c小鼠的生育力特征。分别采用多聚次黄苷酸-胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,poly I∶C)或抗asialoGM1单抗(anti-asialo GM1)刺激或抑制NK细胞活性,并分别观察这些因素对妊娠结局的影响。结果与对照组NOD/SCID小鼠相比,poly I∶C处理组NOD/SCID×NOD/SCID小鼠平均每窝产仔数增多,而注射抗asialo GM1单抗则使胚胎吸收率增高,进而平均每窝产仔数显著减少。结论在NOD/SCID小鼠孕期母-胎界面保持适当水平的NK细胞活性对妊娠结局有利。
- 林羿王通狄静芳曾山黄锦桃冯铮曾耀英
- 关键词：细胞表面标志物免疫耐受
