国家自然科学基金(81001021)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：高瑞娟赵春燕李电东甄永苏尚伯杨更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院南京大学医学院附属鼓楼医院江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗明胶酶单链抗体与力达霉素融合蛋白抗肿瘤作用机制及疗效研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨抗明胶酶单链抗体Fv与力达霉素(LDM)融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。方法采用三联径向加压C4柱制备LDM发色团AE,体外分子重建将其装入融合蛋白Fv-LDP中,Superdex 75层析获得Fv-LDP-AE。反相HPLC测定纯度或相对含量。流式细胞术测定DNA含量;采用SA-β-gal染色、Western blot和细胞伤口愈合实验分别检测药物对细胞衰老、蛋白表达和迁移的影响;通过动物模型评价药物疗效。结果 Fv-LDP-AE承袭了LDM诱导肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和裂亡的作用特点,并显示出更强的诱导衰老和抗迁移作用。Fv-LDP-AE诱导凋亡和抑制迁移依次与caspases通路激活和MMP-2降调节有关。Fv-LDP-AE可抑制小鼠和裸鼠移植瘤生长,抑制率分别可达到86.6%和82.5%。结论 Fv-LDP-AE对小鼠和裸鼠移植瘤有效,可能与其对细胞周期阻滞、凋亡、裂亡和衰老的诱导以及迁移的抑制有关。
- 高瑞娟尚伯杨盛唯瑾赵春燕李电东甄永苏
- 关键词：明胶酶类单链抗体肿瘤微环境力达霉素
- 平阳霉素诱导人口腔上皮癌KB细胞衰老的特征
- 2015年
- 目的:观察平阳霉素(pingyangmycin,PYM)诱导人口腔上皮癌细胞衰老的特征。方法:采用MTT[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]法和克隆形成实验检测细胞增殖抑制作用;衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色法观察细胞衰老;流式细胞仪测定细胞周期分布和细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blotting检测蛋白表达水平。结果:PYM对多种人癌细胞的增殖抑制活性均强于博莱霉素A2。其中,KB细胞对PYM作用最敏感。PYM还可使KB细胞出现衰老特征,这与细胞阻滞于G2/M期,细胞内ROS积累以及衰老相关蛋白p53和p21水平增加有关。结论:PYM引起细胞衰老,也是其抑制KB细胞增殖的机制之一。
- 桂冠王婷高瑞娟翟力新赵春燕王真李电东
- 关键词：平阳霉素细胞衰老
- 有丝分裂与有丝分裂灾变被引量：5
- 2014年
- 细胞分裂与细胞死亡是生命运动在微观水平上表现出的对立与统一,对细胞死亡的研究迟于细胞分裂将近一个世纪。细胞面对死亡有着多种选择,可以是坏死、凋亡、自噬性细胞死亡,也可以是细胞有丝分裂灾变或者某种未知的新方式。有丝分裂灾变通常指由异常有丝分裂引发、并在有丝分裂过程中或之后的细胞间期中完成的细胞死亡事件。近来,人们提议将其作为一种先于细胞死亡或衰老发生但又与其不同的抑癌途径。本文综述了细胞有丝分裂过程及其主要调节因子,以及与细胞有丝分裂密切相关的有丝分裂灾变现象的发现、生物学特征、分子机制和潜在应用价值,不仅丰富了人类对生命现象的认识,而且为癌症放化疗提供了理论依据,亦为建立新型抗癌药物筛选模型打开了新思路。
- 高瑞娟赵春燕李电东
- 关键词：有丝分裂凋亡自噬性细胞死亡
- 单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化被引量：1
- 2013年
- 优化以包涵体形式表达的抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合蛋白Fv-LDP制备过程。通过单因素或正交设计优化其包涵体制备与溶解、固定化金属螯合层析和分步透析复性过程,Sephadex G-75层析精细纯化蛋白,基于流式细胞术的饱和结合实验检测其抗原结合活性。优化后,Fv-LDP包涵体纯度为63.9%,溶解度为95.7%;纯化后Fv-LDP纯度达95%以上,复性后单体含量占60%,精细纯化后提升为85%,比初始复性条件提高5.6倍,能够与人肺腺癌PAa细胞和肝癌BEL-7402细胞结合。Fv-LDP制备过程被成功优化,为其生产和研发奠定了实验基础,也为其他以包涵体形式表达的基于单链抗体的小型化抗体药物制备提供了比较实用的方法。
- 高瑞娟赵春燕李电东甄永苏
- 关键词：包涵体IV型胶原酶融合蛋白纯化复性
