广东省自然科学基金(7301507)
- 作品数：10 被引量：24H指数：3
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- 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂对氢醌致人胚肺成纤维细胞凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)特异性抑制剂N-(6-氧-5,6-二氢菲啶-2-羟基)-N,N-二甲基乙酰胺-盐酸(PJ34)对氢醌(HQ)所致人胚肺成纤维细胞(HLF细胞)凋亡的影响及其作用机制。方法将离体传代培养的HLF细胞分为阴性对照组、阳性对照组(HQ组)、3个PJ34组和3个PJ34+HQ组。按PJ34不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)分为PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用4 h后检测结果;按PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组浓度及作用4 h后再分别加入HQ(80μmol/L)分为PJ34+HQ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用24 h检测结果;HQ组仅用HQ24 h处理。采用PARP-1单克隆抗体荧光标记,流式细胞术检测HLF细胞中PARP-1蛋白表达、细胞凋亡和细胞复制后期(G2)细胞数情况,噻唑蓝(MTT)比色法测定HLF细胞相对存活率。结果各组给予不同剂量的PJ34 4 h后,HLF细胞的存活(增殖)明显受抑制(P<0.05),随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强;PARP-1蛋白表达阳性的HLF细胞百分数均明显低于阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测显示HQ作用24 h后均可引起HLF细胞的调亡,可出现明显的亚二倍体峰,且随着PJ34预处理浓度的增加,其峰值也逐渐增加;HQ可导致细胞周期出现G2期阻滞,PJ34+HQⅠ、Ⅱ、Ⅲ组G2期阻滞减少且差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论PARP-l抑制剂PJ34明显抑制HLF细胞PARP-1表达,增加HQ所致细胞凋亡,并通过诱导HLF细胞凋亡抑制其增殖。
- 唐焕文胡大林梁海荣罗皓
- 关键词：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1PJ34氢醌人胚肺成纤维细胞
- PJ34对糖尿病大鼠肾脏的保护作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其可能机制。方法将SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、模型治疗组,模型治疗组给予PJ34 10mg/kg,正常对照组及模型对照组给予同等剂量的纯化水。测定尿白蛋白排泄量(UAE)、内生肌酐清除率(Ccr)、血浆及肾组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、转化生长因子β1(TGF-β1)和肾小球蛋白激酶C(PKC)水平,并行肾组织形态学观察。结果4周时,模型对照组Ccr、UAE、NO、NOS及肾小球细胞膜PKC明显高于正常对照组,ET低于正常对照组;8周时,糖尿病大鼠肾小球细胞膜PKC明显高于正常对照组,NO和NOS均低于正常对照组,ET高于正常对照组。8周时模型治疗组大鼠的Ccr、尿白蛋白量和肾小球细胞膜PKC,以及4周时NO、NOS明显低于模型对照组。模型治疗组的肾功能及肾病变明显改善,肾组织中ET水平、TGF-β1表达减少。结论PJ34对糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,可能与抑制PKC、肾脏NO合成及降低肾组织ET和TGF-β1水平有关。
- 唐焕文胡大林梁海荣罗皓
- 关键词：糖尿病肾病蛋白激酶CPJ34
- 氢醌诱导TK6细胞miR-221表达异常致PARP-1基因下调的机制被引量：9
- 2011年
- 目的探讨氢醌(HQ)致TK6细胞PARP-1基因表达下调的机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测miR-221的表达改变,以蛋白印迹法检测PARP-1蛋白表达量,以生物信息学方法分析miR-221的潜在甲基化相关靶基因。结果与对照组相比,2.5、5.0和10.0μmol/L HQ组细胞PARP-1蛋白量逐渐下降,5.0和10.0μmol/L HQ组miR-221表达量分别下降17%(P<0.05)、42%(P<0.05)。miR-221能与MBD2 mRNA的3’非翻译区(UTR)形成调控复合体。结论 HQ致PARP-1基因下调机制可能与miR-221表达异常有关。
- 刘林华凌晓璇梁海荣翟璐唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞MICRORNA
- 低剂量氢醌对TK6淋巴母细胞生物学性状及miR-221表达影响被引量：7
- 2011年
- 目的探讨低剂量氢醌(HQ)对TK6淋巴母细胞的生物学性状及小分子非编码RNA(microRNA)-221(miR-221)表达的影响。方法磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用CCK-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞凋亡,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-221的表达改变。结果细胞增殖以48 h最为明显,2.5、5.0和10.0μmol/L组细胞增殖指数分别为1.33(P<0.05)、1.14(P<0.05)和1.12(P<0.05);miR-221表达改变以72 h最为明显,2.5、5.0、10.0μmol/L HQ组细胞miR-221表达量分别抑制了0.31倍(P<0.05)、0.39倍(P<0.05)和0.33倍(P<0.05)。结论低剂量HQ能抑制TK6细胞凋亡和miR-221的表达,促进细胞增殖。
- 刘林华梁小虎凌晓璇唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞
- CpG岛甲基化结合蛋白在氢醌致骨髓增殖性白血病病毒原癌基因转录激活中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的深入揭示氢醌（HQ）致MPL转录激活的表观遗传学机制。方法以磷酸盐缓冲液（PBS）溶解HQ，以正常TK6细胞、PBS处理细胞为对照组，分别以2．5、5．0、10．0和20．0μmol／LHQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量一聚合酶链反应检测甲基化CpG结合蛋白1～5（MBD1～5）的表达。结果与对照细胞相比，MBD1—4的mRNA表达量在所有的HQ处理细胞中全部下降，20．0μmol／LHQ对MBD2和MBD4表达的抑制效果最为明显，抑制率分别为50％和32％（P〈O．05）；而10．0μmo1／LHQ对MBD1和MBD3表达的抑制效果最明显，抑制率分别为36％和33％（P〈0．05）；MBD5表达无统计学意义（P〉0．05）。在MPL的CpG岛内有3个MBD1序列特异性结合位点。结论HQ致MPL的转录激活可能与MBD1表达异常有关。
- 刘林华凌晓璇梁海荣罗皓戴娟秀唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞转录
- 白血病相关原癌基因在氢醌处理TK6细胞中的表达
- 2012年
- 目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的后续结果。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测白血病相关原癌基因MPL、BRAF、ERBB2、MYB、MYC和RAF1的表达水平。结果与对照细胞相比,HQ处理细胞MPL和RAF1的mRNA表达量都随HQ剂量增加而上升,其中20μmol/L HQ对原癌基因表达的影响最为明显,分别上升了80%(P<0.05)和35%(P<0.05);MYB、MYC和ERBB2基因的mRNA表达量随HQ的剂量上升而下降。结论 MPL的转录活化很有可能与HQ导致的DNA整体低甲基化有关。
- 凌晓璇刘林华梁海荣戴娟秀郭莲仙唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞原癌基因
- 氢醌对DNA甲基转移酶表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的分子机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmo/lL HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达水平。结果与对照组相比,DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达量在各HQ处理组细胞中均下降,其中以20.0μmo/lL组细胞的下降最为明显,分别下降46%(P<0.05)、83%(P<0.05)和48%(P<0.05),且DNMT1和DNMT3a的表达量随着HQ剂量的增加而下降。结论 HQ致DNA整体低甲基化下调机制可能与DNMT1、DNMT3a和DNMT3b表达异常有关。
- 凌晓璇梁海荣黄明元杨慧唐焕文
- 关键词：氢醌DNA甲基转移酶基因表达
- 环境毒物对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达影响被引量：1
- 2011年
- 环境毒物是存在于人类生活和生产环境中,在一定条件下可以侵入人体,干扰或破坏人体正常生理功能,引起短暂性或者永久性病理状态的物质。环境毒物种类繁多,分布广泛。其最大的危害是与机体遗传物质相互作用而产生的＂三致＂作用,
- 梁小虎唐焕文刘林华
- 关键词：环境毒物DNA聚腺苷二磷酸核糖聚合酶
- 低剂量氢醌对大鼠骨髓间充质干细胞生物学性状及PARP-1表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨低剂量氢醌(HQ)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学性状及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因表达的影响,阐明低剂量HQ对骨髓的毒效应。方法:磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0μmol·L-1HQ染毒大鼠BMSCs为处理组。应用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖能力,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞凋亡,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PARP-1基因表达的改变。结果:与PBS对照组比较,各剂量组细胞增殖能力明显提高(P<0.05);染毒48 h后,5.0和10.0μmol·L-1HQ组细胞的凋亡率均明显降低(P<0.05);染毒48 h后,2.5、5.0和10.0μmol·L-1HQ组细胞PARP-1表达量分别为对照组0.92、0.56(P<0.05)和0.45倍(P<0.05)。结论:低剂量HQ能抑制大鼠BMSCs凋亡和PARP-1基因表达,促进细胞增殖。
- 高羽亭刘林华黄明元梁海荣范洪学唐焕文
- 关键词：氢醌骨髓间充质干细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1
- 大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1基因RNA干扰表达质粒构建与鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建并筛选大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因的RNA干扰(RNAi)表达质粒,为职业性疾患的基因治疗探索新途径。方法根据基因序列数据库中报道的PARP-1基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体Li-pofectamineTM2000介导转染大鼠骨髓间充质干细胞。48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染细胞中PARP-1 mRNA的转录水平,筛选有效的PARP-1 RNAi质粒。结果 4种重组PARP-1 RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确。转染后48 h,转染质粒shRNA-PARP-1-532的细胞PARP-1基因抑制效果最明显,mRNA的转录水平下降了78%,可作为后续实验的有效质粒。结论成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为探索PARP-1基因在疾病中的作用奠定了基础。
- 高羽亭黄明元刘林华梁海荣唐焕文
- 关键词：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1短发夹RNA骨髓间充质干细胞转染
