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稻瘟病抗性基因Pi36原核表达载体构建·表达与鉴定被引量：2: 2010年; [目的]研究稻瘟病抗性基因Pi36的结构和功能。[方法]利用双酶切构建Pi36基因CC、NBS结构域的原核表达载体,通过菌落PCR鉴定和测序验证阳性克隆。然后分别收集不同浓度IPTG诱导,不同温度30和37℃分别培养的大肠杆菌细胞提取蛋白,利用SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况。[结果]当IPTG浓度为1mmol/L、30℃培养3h,目的蛋白表达量最大。[结论]为进一步研究稻瘟病抗性基因Pi36的抗病机理奠定基础。; 王玲张向明刘新琼; 关键词：稻瘟病抗性基因原核表达载体基因克隆

稻瘟病抗病基因Pia的抗性分析及精细定位被引量：11: 2011年; 稻瘟病是水稻最主要的病害之一.持久抗性品种可以通过聚合不同类型的抗病基因而获得.利用中国10个地区的稻瘟病群体对日本鉴别品种(爱知旭)所持的抗病基因Pia进行了抗谱分析.该基因除了在江苏群体中表现为强效抗性之外,在其他群体中均表现为弱效抗性.利用爱知旭/Kasalath的F2作图群体,通过重组体筛选、精细定位以及共分离分析,将Pia位点界定于约90kb的物理区段内.利用日本晴的参考序列,在该区段内预测出具有抗病基因保守结构的4个侯选基因(Pia-1～Pia-4);相应开发出4个CRG(candidate resistance gene)标记(A17,A25,A26和A27)并进行了共分离分析.结果表明,前3个标记都与Pia位点完全共分离,而来源于Pia-4的A27为抗病亲本缺失的显性标记,且该标记位点与Pia及其侧翼标记位点不连锁.由此推断,包含Pia-4的区域并不在Pia位点,因而可以将其排除.利用上述3个共分离的标记,对日本、中国和IRRI(国际水稻所)开发的3套鉴别品种进行了抗病基因型与分子标记基因型的相关分析.结果表明,Pia-3为最可能的候选基因.本研究为下一步克隆该基因并了解其在稻瘟病抗性中的基础作用提供了依据.; 曾晓珊杨先锋赵正洪林菲王玲潘庆华; 关键词：稻瘟病抗病基因 PIA 基因型

普通野生稻稻瘟病抗性基因Pi36等位基因的克隆与序列分析被引量：2: 2010年; 为了研究稻瘟病抗性基因Pi36的进化机理,以孟加拉国普通野生稻W39、马来西亚普通野生稻W40、印度野生稻L56为材料,对Pi36等位基因进行了克隆和序列分析。测序结果与已知的Pi36和测序品种日本晴以及"93-11"的基因序列进行比较。结果表明,编码区6个品种间的同源性为83%～99%,CC-NBS区域的同源性平均为91%;LRR区域为95%。并且还发现在野生稻W39和W40基因的第二个外显子区域有一个转座子插入。进化分析表明,6个品种从整体上分为3类,L56、日本晴和Pi36聚为一类,说明这3个品种的亲缘关系较近;W39和W40聚为另一类;"93-11"的基因聚为单独的一类,处于独立进化的模式。; 王玲张丹张向明刘新琼; 关键词：稻瘟病抗性基因普通野生稻基因克隆

稻瘟病新隐性抗病基因pi55(t)的遗传及定位被引量：11: 2012年; 粤晶丝苗2号是广东省优质稻主栽品种和省区试对照品种,具有高度的稻瘟病抗性.用中国不同地区297个稻瘟病菌株进行抗谱分析,粤晶丝苗2号对广东、四川、辽宁和黑龙江稻瘟病菌群体的抗性频率均达到100%,其抗谱较主要抗源品种三黄占和28占更广.利用不同的菌株,对粤晶丝苗2号/露明的F2群体和F4株系进行抗性分离分析,结果表明,该品种的稻瘟病抗性由显、隐性的多基因控制.通过基于F4单基因分离株系的BSA分析,分别在染色体2,6,8和12上筛选到了与其抗病基因连锁的候选标记.通过基于基因组位置已知的分子标记的连锁分析,将其中的隐性基因定位于染色体8约1.9cM/152kb的区域内.由于该区域内尚未有主效抗病基因的存在,因此,该基因是新的隐性抗病基因,被命名为pi55(t).通过对该区域内候选基因的注释,发现其中编码LRR蛋白的Os08g40090和编码重金属结合域蛋白的Os08g40130可能是其最佳的候选基因.; 何秀英刘新琼王丽王玲林菲程永盛陈钊明廖耀平潘庆华; 关键词：稻瘟病抗性遗传基因定位

稻瘟病抗性基因Pi36酵母表达载体的构建与表达: 2010年; 稻瘟病抗性基因Pi36编码卷曲螺旋核苷酸结合位点-富亮氨酸重复序列(CC-NBS-LRR)结构的抗病蛋白。为了深入研究该基因的结构和功能,试验利用双酶切构建了Pi36基因CC结构域的酵母表达载体,通过菌落PCR鉴定和测序验证阳性克隆。然后分别收集培养至不同OD值的酵母细胞提取蛋白,利用Western blotting检测目的蛋白的表达情况。结果表明,目的蛋白成功表达,并且在OD值为1.0的酵母细胞中表达量最大。; 王玲张丹张向明刘新琼; 关键词：稻瘟病酵母表达载体

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